成人结膜干细胞定位特征的免疫组织化学研究

目的:研究成人结膜上皮细胞中,粘蛋白5AC(MUC5AC),角蛋白7,p63和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达及分布情况,探讨成人结膜上皮干细胞的定位特征。方法:获取角膜移植供者的睑球结膜,采用HE免疫组化染色法,观察MUC5AC,角蛋白7,p63和PCNA的表达及分布情况。结果:PCNA及p63表达情况一致,主要表达在睑缘皮肤黏膜交界处及近角膜缘结膜上皮深层细胞。角蛋白7在穹窿部球结膜的固有层中的腺体细胞有阳性表达,MUC5AC在各部位结膜上皮的杯状细胞的胞质阳性表达。结论:MUC5AC细胞角蛋白7和p63及PCNA在成人结膜上皮细胞的特征性表达情况可以推测具有分化潜力的结膜干细胞存在于睑缘皮肤黏膜交界处及近角膜缘球结膜上皮深层细胞。     

人视网膜色素上皮细胞吞噬过程中MERTK基因mRNA表达水平与蛋白激酶C关系的研究

目的 探讨人视网膜色素上皮(hRPE)细胞吞噬过程中MERTK基因mRNA表达水平与蛋白激酶C(PKC)的相互作用.方法 对照实验研究.采用1×1010个/L视细胞外节膜盘(ROS),于37℃下孵育体外培养的正常hRPE细胞,在孵育的不同时间终止吞噬反应.用双重荧光标记法,检测hRPE细胞的吞噬能力.用液闪记数γ-32P放射活性法,检测不同吞噬时间点的PKC活性.以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法,检测MERTK基因的mRNA水平变化情况.以PKC激活剂和拮抗剂处理hRPE细胞后,再行MERTK基因mRNA表达水平检测.采用SPSS 13.0统计学软件进行数据分析,实验组与对照组hRPE细胞吞噬ROS能力、PKC活性比较采用Student't检验,MERTK基因mRNA表达水平比较采用单因素方差分析.结果 ROS孵育后的hRPE细胞结合及吞入ROS的数量逐渐增多,至24 h时,hRPE细胞吞噬ROS的数量达到高峰,为(2.85±0.11)×106个,与对照组(0.00±0.00)×106个比较,差异有统计学意义(t=47.64,P＜0.05).ROS孵育后的hRPE细胞胞质PKC活性降低,至24 h时,PKC活性降至最低,细胞质的PKC活性为(151.13±17.67)nmol·g-1·min-1,细胞膜的PKC活性为(152.45±64.83)nmol·g-1·min-1;对照组细胞质的PKC活性为(329.63±14.26)nmol·g-1·min-1,细胞膜的PKC活性为(467.67±68.87)nmol·g-1·min-1;两组间PKC活性比较,差异有统计学意义(细胞质:t=89.66,P＜0.05;细胞膜t=10.31,P＜0.05).在hRPE细胞与ROS不同时段的孵育过程中,MERTK基因mRNA均呈现出高表达状态,孵育至90 min时,MERTK基因mRNA表达灰度值为1.8853±0.0077,与对照组灰度值0.7246±0.0062相比,差异有统计学意义(F=16 060.2167,P＜0.05);孵育至24 h时,MERTK基因mRNA表达灰度值为0.5946±0.0082,与对照组灰度值0.3343±0.0064比较,差异有统计学意义(F=919.8421,P＜0.05).上调hRPE细胞的PKC活性后,再行不同时段的ROS孵育,短时与长时孵育的MERTK基因mRNA表达灰度值均低于对照组(短时孵育:F=17 142.2331,长时孵育:F=1886.4614;P＜0.05).拮抗hRPE细胞的PKC活性后,再行不同时段的ROS孵育,30 min内MERTK基因mRNA表达灰度值为4.4670±0.0092至5.7034±0.0095范围,均高于对照组灰度值0. 9117±0.0021(F=199 012.9138,P＜0.05).结论 PKC的低活性和MERTK基因mRNA的高表达可促进hRPE细胞吞噬ROS的过程.PKC活性和MERTK基因mRNA表达水平作为上游调控信号,通过两条不同的信号通路,以负相关的方式调节hRPE细胞吞噬ROS的功能.     

细菌性角膜溃疡角膜组织中MMP-2、MMP-9表达的研究

目的:研究细菌性角膜溃疡患者角膜组织中的基质金属蛋白酶-2、-9(MMP-2、-9)的表达与分布,探讨其含量的变化与角膜病变的相关性.方法:收集细菌性角膜溃疡患者的病变角膜和正常角膜,应用免疫组化染色方法检测MMP-2、MMP-9在角膜分布和表达,应用图像分析系统分析.结果:细菌性角膜溃疡角膜组织中,MMP-2的阳性表达主要分布于角膜基质层;MMP-9的阳性表达主要分布于角膜上皮层和基底膜附近.病变角膜组织中两种酶的阳性表达均具有统计学意义.结论:MMP-2、MMP-9对细菌性角膜溃疡的发展可能起重要作用.MMP-2参与角膜基质层的损害,MMP-9参与角膜上皮层和基底膜的损害.     

人视网膜色素上皮细胞吞噬过程中细胞内钙离子浓度的变化

视网膜色素上皮（retina pigment epithelium，RPE）细胞具有复杂的结构和特殊的生理机能，RPE吞噬脱落的视细胞外节膜盘（ROS）是视网膜的主要功能之一，这对视细胞外节的更新及维持正常视觉功能至关重要。该功能障碍时引起ROS堆积而导致严重的视网膜疾病，目前对这类疾病尚无有效的治疗手段。RPE细胞不同的吞噬机制目前尚未阐明。本研究通过对RPE细胞不同吞噬过程中细胞内钙离子变化的测定，探讨RPE细胞吞噬时钙离子信号传导通路的作用，从而进一步了解跨膜信号传导系统在RPE细胞的特异性吞噬过程中所起的作用。     

无充气腔镜甲状腺手术的微创性分析

目的:探讨无充气腔镜甲状腺手术的微创性效果。方法:60例甲状腺肿瘤患者根据入院顺序分为治疗组与对照组,每组30例。对照组采用常规手术治疗,治疗组采用无充气腔镜甲状腺手术。结果:治疗组的术中出血量与术后住院时间明显少于对照组(P<0.05)。术后3个月治疗组的声音嘶哑、大出血、甲状旁腺功能低下、喉返神经损伤等并发症总体发生率明显少于对照组(P<0.05)。结论:无充气腔镜甲状腺手术具有微创的特点,同时安全性好,值得推广应用。     

左眼前部结节性巩膜炎并发角膜边缘融解

患者男性,65岁.因左眼间断红、痛合并视物模糊1年余,于2008年1月25日来我院就诊.患者1年前无明显原因左眼出现红、痛症状,无分泌物增多,在当地医院诊断为巩膜炎,给予庆大霉素和地塞米松眼液滴眼,好转停药后即复发,反复发作,同时视力下降,4个月前左眼出现黑色物且突出,当地医院给予口服泼尼松(20 mg/d)和糖皮质激素眼液滴眼治疗,眼痛、红症状无缓解.     

低温冷冻对视网膜色素上皮细胞形态及超微结构的影响

目的：明确冷冻对视网膜色素上皮细胞（ Ｒ Ｐ Ｅ）形态及超微结构的影响。方法：用处于融合状态的原代及第三代 Ｒ Ｐ Ｅ细胞,放入－ ７０℃深低温冰箱内,分别冷冻１５,３０,４５,６０,１２０ ｓ,应用相差显微镜、扫描及透射电镜观察细胞形态及超微结构的变化。结果：相差显微镜观察：冷冻使细胞形态改变,细胞变圆皱缩,细胞间缝隙加宽;扫描及透射电镜观察：冷冻使细胞连接断离,细胞膜双层结构改变,部分细胞的细胞膜破裂。结论：冷冻可导致 Ｒ Ｐ Ｅ细胞间连接断离,且与冷冻时间有关,冷冻超过６０ ｓ 使细胞破裂。     

大鼠角膜碱烧伤不同时期MMP-1及其抑制剂的表达

目的 探讨碱烧伤后不同时期基质金属蛋白酶-1(MMP-1)及其组织型抑制剂(TIMP-1)的表达及作用。方法 建立大鼠角膜碱烧伤模型，应用免疫组化方法检测MMP-1及TIMP-1在碱烧伤后不同时期角膜内的表达。结果 免疫组化显示：正常大鼠角膜组织中无MMP-1及其抑制剂的表达。实验组MMP-1于伤后第1天开始升高，14天达到最高，此后呈现下降趋势，但仍高于正常对照组。而TIMP-1早期有所表达，而后活性逐渐下降，伤后第14天降至最低水平，此后又再度上升。21天时达到最高。结论 角膜溶解高峰期出现于碱烧伤后第14天。此时MMP-1分泌达高峰。TIMP-1分泌达到最低点。角膜溶解的临床病理过程与MMP-1及TIMP-1的分泌密切相关。     

基于微信的中医延续性护理对慢性肾功能衰竭患者的影响

目的 探究基于微信的中医延续性护理对慢性肾功能衰竭患者的影响。方法 选取80例慢性肾功能衰竭患者为研究对象,应用随机数字表法将其分为对照组和观察组,每组40例。对照组行常规出院后干预,观察组在对照组基础上行基于微信的中医延续性护理,两组患者均干预3个月。比较两组患者的遵医行为,以及干预前后肾功能和生活质量。结果 干预3个月后,观察组定期复诊、规范用药、合理饮食、戒烟戒酒、情绪调节等方面的遵医率均高于对照组(均P<0.05)。干预前,两组患者血清尿素氮、肌酐水平差异均无统计学意义(均P>0.05);干预3个月后,两组患者血清尿素氮、肌酐水平均降低,且观察组的水平均低于对照组(均P<0.05)。干预前,两组患者世界卫生组织生存质量测定量表简表(WHOQOL-BREF)的生理、心理、社会关系和环境等维度的评分差异均无统计学意义(均P>0.05);干预3个月后,两组患者WHOQOL-BREF各维度的评分均升高,且观察组的评分均高于对照组(均P<0.05)。结论 基于微信的中医延续性护理可提高慢性肾功能衰竭患者的遵医行为,改善肾功能水平和生存质量,临床应用价值较高。