雷帕霉素联合环孢霉素A滴眼液对大鼠高危角膜移植排斥反应的作用

目的:观察雷帕霉素滴眼液眼局部应用对大鼠高危角膜移植免疫排斥反应的影响,并观察其与环孢霉素A联合应用的效果。方法:实验于2004-12/2005-03在辽宁医学院动物实验室完成,选用健康雄性SD受体大鼠50只及雌性Wistar供体大鼠23只。以SD角膜新生血管化大鼠为受体,建立大鼠高危穿透性角膜移植动物模型。①造模及移植术后40只受体大鼠进入结果分析,按随机数字表法分为4组,每组10只。对照组滴用滴眼液基质,雷帕霉素组滴用2g/L雷帕霉素滴眼液,环孢霉素A组滴用10g/L环孢霉素A滴眼液,各组均100μL/次;雷帕霉素 环孢霉素A组应用2g/L雷帕霉素滴眼液联合10g/L环孢霉素A滴眼液滴眼,各50μL/次。手术后第2天起术眼开始用药,4次/d,连续用药至排斥反应发生。②对角膜植片在裂隙灯下进行临床观测,混浊、水肿和新生血管3项指标评分之和为当日排斥反应指数,当排斥反应指数≥5时,或者植片混浊一项达到3时视为排斥反应发生,记录角膜植片存活时间。③角膜移植术后第14天各组随机抽取4只受体大鼠行角膜组织学检查。结果:40只受体大鼠进入结果分析。①各组受体大鼠角膜植片的存活时间比较:对照组、雷帕霉素组、环孢霉素A组及雷帕霉素 环孢霉素A组角膜植片的存活时间分别为(7.67±1.03,16.67±1.63,15.50±2.43,21.33±2.94)d,各用药组角膜植片的存活时间与对照组比较均显著延长(P<0.01);联合用药组优于单独用药组(P<0.01);雷帕霉素组与环孢霉素A组比较差异无显著性意义(P>0.05)。②各组受体大鼠角膜移植术后14d角膜的组织形态学变化:各用药组角膜植片炎细胞浸润、新生血管形成及水肿程度均明显轻于对照组,雷帕霉素与环孢霉素A联合用药组植片中央部未见炎性细胞浸润及新生血管。结论:2g/L的雷帕霉素滴眼液能显著延长高危角膜移植角膜植片的存活时间,联合应用10g/L的环孢霉素A滴眼液具有协同作用,治疗效果优于雷帕霉素或环孢霉素A单独用药。     

连接粘附分子-1在人角膜上皮中的表达

目的：检测连接粘附分子-1（junction adhesion molecule,JAM-1）在正常人角膜上皮各层中的表达及分布特点并与咬合蛋白（occludin）进行比较。 方法：培养人角膜上皮细胞提取细胞总RNA。以逆转录后获得的cDNA为模板PCR扩增目的基因JAM-1及occludin。流式细胞仪检测JAM-1蛋白表达。双重免疫荧光观察JAM-1与occludin在正常人角膜上皮组织的原位表达。 结果：通过RT—PCR在培养人角膜上皮细胞中检测到JAM-1与occludin扩增片段;流式细胞仪检测到JAM-1蛋白表达;双重免疫荧光结果显示occludin染色主要位于表层上皮层细胞之间;而JAM-1荧光染色不仅见于上皮表层,在整个上皮层细胞之间均可见其荧光反应。 结论：Occludin主要位于正常人角膜上皮表层细胞之间,JAM-1在正常人角膜上皮的全层中均有表达。     

人结膜上皮细胞的培养与鉴定

采用组织块培养法培养正常人结膜上皮细胞,观察细胞状态,并进行免疫组化和RT-PCR检测.结果 组织块培养法获得高纯度的结膜上皮细胞,培养的结膜上皮细胞CK13染色阳性,RT-PCR检测MUC4、MUC5AC均有表达.表明组织块培养法能为体外结膜上皮移植及相关干细胞向结膜上皮细胞诱导分化提供理想的种子细胞.     

角膜后弹力层脱离的诊疗方法及其研究进展

角膜后弹力层脱离是内眼手术的并发症之一,尤其在白内障摘除手术中较为常见。此并发症通常在术中出现,根据临床表现正确判断并处理,预后较好,但诊断和处理不及时后果严重,应引起临床重视。本文针对角膜后弹力层脱离的危险因素、临床表现、治疗和预后,总结并分析相关研究进展,以期为临床提高相关诊疗水平提供参考。 （中华眼科...     

视网膜色素上皮细胞体外凋亡过程中钙离子平衡与caspase-3基因表达

目的:研究钙通道拮抗剂-维拉帕米(verapamil,Ver)诱导视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞凋亡过程中钙离子及凋亡基因caspase-3变化。方法:应用80mg/L的Ver分别作用健康人眼RPE细胞12,24及48h诱导凋亡,设立对照组。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测凋亡基因caspase-3的表达,采用Fluo-3/AM负载技术,MetaFluo4.5/coolsnapfx/IX70细胞内钙离子荧光成像系统测定每组20个RPE细胞钙荧光值,并计算RPE细胞内钙浓度([Ca2+]i)。结果:对照组RPE细胞Ca2+荧光分布胞核最强,胞质次之。Ver作用12,24及48h后,细胞内[Ca2+]i明显降低(P<0.01)。对照组RPE细胞可见caspase-3的mRNA有少量的表达。Ver作用12h后,可见caspase-3的mRNA有较高的表达,与对照组比较,具有显著性差异(P<0.01)。随着Ver作用时间的延长,caspase-3的mRNA表达逐渐增强,在48h时有所下降。结论:Caspase-3基因表达上调及RPE细胞内钙离子稳态失调可能在Ver诱导RPE细胞凋亡中起关键作用。     

深板层角膜移植及穿透角膜移植治疗圆锥角膜的对比研究

目的:观察圆锥角膜患者行深板层角膜移植和穿透角膜移植术后视力、角膜曲率及角膜内皮细胞的变化。方法:将2003-01/2009-07在我院行手术治疗的42例47眼圆锥角膜患者分为两组,一组接受深板层角膜移植(27眼),另一组接受穿透角膜移植(20眼)。观察两组患者术后3,6,12,18mo的裸眼视力、最佳矫正视力、角膜地形图改变和角膜内皮细胞状态。结果:深板层角膜移植组术后裸眼视力平均提高4行,最佳矫正视力平均提高7行,无排斥反应发生。穿透角膜移植术后裸眼视力平均提高5行,最佳矫正视力平均提高8行,有5例发生排斥反应。两种术式相比,术后散光程度无明显差异,深板层角膜移植组角膜内皮细胞丢失速率低于穿透角膜移植组。结论:对于非急性期圆锥角膜患者深板层角膜移植术优于穿透角膜移植术。     

角膜后弹力层剥除联合自动角膜刀取材内皮移植术的临床研究

目的 探讨角膜后弹力层剥除联合自动角膜刀取材内皮移植术的术后疗效、并发症、处理及适应证的选择.方法 临床病例系列研究.2007年9至12月期间,北京大学第三医院、北京大学眼科中心选择9例角膜内皮失代偿的患者行角膜后弹力层剥除自动角膜刀取材及角膜内皮移植手术,术后观察视力、角膜透明性的恢复、植片的脱位率、角膜厚度、角膜曲率及角膜内皮细胞数,随访时间3～7个月.结果 手术中1例虹膜角膜内皮综合征患者的角膜内皮植片植入失败,改行穿透性角膜移植术;其余8例患者术后植片明显脱位1例,再处理后复位.术后8例手术成功患者视力全部提高,植片透明,角膜厚度为(775±30)μm;角膜曲率为(44.19±2.28)D;角膜散光度数为(2.20±0.83)D;角膜内皮细胞数为(1439±296)个/mm~2.结论 角膜后弹力层剥除联合自动角膜刀取材内皮移植术有可能成为一种治疗角膜内皮失代偿的重要术式.     

病毒性角膜内皮炎的诊治探讨

病毒性角膜内皮炎并不少见,但因对其临床表现认识不足,误诊、漏诊病例屡见不鲜.角膜内皮炎常由单纯疱疹病毒、带状疱疹病毒感染所致.临床分为三种类型：盘状角膜内皮炎、弥漫性角膜内皮炎和线状角膜内皮炎.临床表现为病变部位角膜水肿,水肿部位羊脂状KP,当合并小梁网炎时伴有眼压升高,临床上常与青光眼-睫状体炎综合征相混淆.治疗关键点是抗病毒和抗炎,正确合理地使用抗病毒药和皮质类固醇激素类药物非常重要.用药的方法分为全身用药和局部用药.大部分患者眼局部用药是主要的给药途径,对于部分反复发作和病情严重的患者可考虑全身给药.皮质类固醇激素应用的浓度和频度要根据患者的病情而定,但基本原则是在足量应用全身和局部抗病毒药的基础上选择生物利用率高的皮质类固醇激素,将炎症迅速控制后逐渐减量,缓慢停药.     

角膜内皮移植手术的进展

随着对角膜生理和光学作用认识的深入,以及眼科新技术,新设备的不断涌现,角膜内皮移植手术取得了飞速的发展.从DLEK到DSEK,DSAEK再到后来的DMEK,手术操作日趋简便,切口逐渐缩小,更多的保留了正常角膜组织的形态和功能,减少了术后并发症的发生,加快了患者视力恢复速度.随着手术操作的不断改进,角膜内皮移植在临床应用中取得了良好的疗效并显示出诸多优势.目前,角膜内皮移植正在取代传统的穿透性角膜移植,成为治疗角膜内皮疾病的重要术式,使角膜移植由治疗性手术逐渐向屈光性手术过渡.     

复方樟柳碱治疗眼部缺血性病变化的临床疗效观察

采用复方樟柳碱对６８例眼部因性病变进行治疗观察,并与６８例妥拉苏林用药的同种病作疗儿对比分析。结果显示治疗组的有效率以及在视力、视野方面的改善程度均优于对照组,说明复方樟柳碱对眼部缺血性病变的治疗是有效的,有较高的临床应用价值。