地高辛标记的小鼠β—1，4—半乳糖基转移酶IRNA探针的制备和应用

为了制备小鼠β—1，4—半乳糖基转移酶I(β—1，4—galactosyltransferase I，β—1，4—GalT—I)地高辛标记的RNA探针以探讨β—1，4—GalT—I mRNA在坐骨神经组织的表达定位，本研究用提取的小鼠脑总RNA，采用RT—PCR方法，得到β—1，4—GalT—I的DNA片断，将其克隆到pGEM—T载体；采用体外转录的方法合成地高辛标记的正、反义β—1，4—GalT—IRNA探针；运用点杂交的方法分析标记探针的灵敏度；最后应用该探针，通过原位杂交的方法，分析β—1，4—GalT—ImRNA在小鼠坐骨神经的表达。结果：构建了β—1，4—GalT—I／pGEM—T质粒，获得了高效价的地高辛标记的正、反义β—1，4—GalT—IRNA探针，应用该探针发现β—1，4—GalT—I在小鼠坐骨神经髓鞘中有表达。以上结果表明，制备的地高辛标记的正、反义β—1，4—GalT—-RNA原位杂交探针可特异地检测β—1，4—GalT—ImRNA在组织中的表达。本研究为进一步分析β—1，4—GalT—I在坐骨神经及其它神经组织发育和损伤过程中的表达奠定基础。     

提高神经生物学教学效果的措施探讨

<正>神经生物学是生命科学中的前沿学科之一,涵盖神经解剖学、神经生理学、神经药理学、临床神经病学、精神病学、神经遗传学、神经内分泌学、分子神经生物学和细胞神经生物学等学科。它不仅需要从不同的水平上弄清神经调控和信息处理的特点,而且需要从分子的水平去揭示神经活动深层次的基础;不仅需要从宏观上研究神经结构、功能活动和行为特点,而且需要从微观上去分析神经功能机制的奥秘,其最终目的在于了解人类神经系统的结构和功能,明确行为与心理活动的物质基础,为改善人类感觉与运动效率,提高神经系统疾病的防治水平,增进健康服务。因此,对临床医学专业本科生开设神经生物学课程有着深远的意义。     

Expression and clinical significance of FPARγ and β-catenin in breast cancer

Objective To study the expression of peroxisome proliferator-activated receptor γ (PPARγ) and β-catenin in breast cancer, and their correlations with clinicopathological parameters and prognosis. Methods Tissue samples obtained from 70 patients with breast cancer and 20 patients with breast benign mass were immunohistochemically examined for the expression of PPARγ and p-catenin. Results Overexpression rate of PPARγ protein was 34. 3% in breast cancer, significantly lower than that in breast benign mass. Abnormal expression rate of β-catenin in breast cancer was 67. 1%. A significant negative-correlation was found between the expression of PPARγ and β-catenin (r=-0. 398,P<0.05 ). PPARγ expression was inversely associated with histologic grade, tumor size, axillary lymph node metastasis,TNM stage and Ki-67 expression (P<0. 05), while positively correlated with ER status and overall survival rate (P<0. 05). Abnormal β-catenin expression was positively associated with histologic grade, axillary lymph node metastasis and TNM stage (P<0. 05), while inversely correlated with overall survival rate (P<0.05). Conclusion PPARγ and β-catenin are correlated with development of breast carcinoma,suggesting that detection of PPARγ and β-catenin may be of value in evaluating the biological behaviors and the prognosis of breast cancer.     

Src抑制的蛋白激酶C的底物在脑组织中的表达

目的:探讨大鼠发育过程中,SSeCKS(Src抑制的蛋白激酶C的底物)在脑组织中的表达变化及意义。方法:通过Western blot,免疫组织化学法检测SSeCKS在脑组织中表达的时空变化及细胞定位。结果:SSeCKS在大鼠脑发育过程中存在明显的表达变化,在胎鼠和生后早期的SD大鼠中表达水平较高,尤以生后1周明显,成年以后显著降低,4周时最低。脑分区检测显示端脑、海马和间脑符合全脑检测结果。DAB显色示SSeCKS在脑组织中呈点状散在分布,免疫荧光双标记示SSeCKS与星形胶质细胞有部分共定位,与神经元无明显共定位。结论:SSeCKS在大鼠脑发育过程中存在时空变化,并且主要定位于星形胶质细胞。提示SSeCKS可能通过参与细胞骨架的调节和信号通路的活化影响大鼠胚胎发育过程中星形胶质细胞指导的神经元的迁移和轴突的生长。     

大鼠坐骨神经损伤后Src抑制的蛋白激酶C的底物在背根神经节中的表达变化

目的:探讨大鼠坐骨神经损伤后,Src抑制的蛋白激酶C的底物(SSeCKS)在背根神经节(DRG)中的表达变化及其意义。方法:制备成年SD(Sprague-Dawley)大鼠坐骨神经夹伤及切断模型。通过Western印迹法、Real-time PCR及免疫组织化学方法检测坐骨神经损伤后SSeCKS在DRG中表达的时空变化。结果:大鼠坐骨神经夹伤后6h,DRG中可检测到SSeCKS的表达并逐步升高,伤后12h达到高峰,2d后逐渐下降;而大鼠坐骨神经切断后DRG中SSeCKS的表达高峰发生在伤后2周,1d时最低;SSeCKS主要分布于DRG大、中、小神经元胞质;SSeCKS与NeuN、NF200以及GAP43存在共定位。结论:大鼠坐骨神经损伤后,引起DRG中SSeCKS的表达变化,其可能参与疼痛信号转导通路并与周围神经损伤后的再生有关。     

Pirh2对人肝细胞肝癌细胞增殖的影响

目的 探讨泛素连接酶Pirh2对人肝细胞肝癌(HCC)细胞增殖的影响.方法 流式细胞仪测定血清饥饿释放过程中SMMC-7721和Hep3B细胞的周期分布情况,并用Western blot检测增殖过程中Pirh2及p27Kip1蛋白表达.在SMMC-7721和Hep3B细胞中转染Pirh2 shRNA,cell counting kit-8(CCK-8)和流式细胞分析检测转染后细胞增殖的能力,Western blot检测细胞周期调控因子的表达.结果 细胞饥饿72 h,两种细胞周期进程停滞在G1/G0期,血清释放后增殖到S期.在此过程中,Pirh2表达上调,p27Kip1表达下调.转染Pirh2 shRNA组相较于对照组和转染空载体质粒组,CCK-8和流式细胞分析显示细胞的增殖能力下降及细胞的周期进程明显受到抑制(P＜0.05).结论 Pirh2参与HCC细胞的周期进程调控,有望成为HCC治疗的新靶点.     

磷酸化P27kip1的表达与非霍奇金淋巴瘤的恶性相关

目的探讨P27kip110位丝氨酸(Ser10)和187位苏氨酸(Thr187)磷酸化形式的蛋白质表达水平与非霍奇金淋巴瘤(NHL)恶性程度的关系。方法采用免疫组织化学方法检测88例NHL及15例良性增生淋巴结中Ser10、Thr187磷酸化P27kip1和P27kip1蛋白的表达,结合临床及病理资料进行统计分析。结果两种磷酸化位点的P27kip1蛋白在良性增生淋巴结(不包括生发中心)中的阳性率明显低于NHL,随着肿瘤侵袭性的增加,两种磷酸化位点的P27kip1蛋白表达水平增高,与增殖指标Ki-67呈正相关。Thr187磷酸化P27kip1蛋白的阳性率与P27kip蛋白表达水平呈正相关,Ser10磷酸化P27kip1蛋白的阳性率与P27kip1蛋白表达水平表现为负相关。结论磷酸化的P27kip1与NHL的恶性程度有关,联合检测磷酸化P27kip1与P27kip1蛋白的表达水平可为NHL的临床诊断和治疗提供参考。     

单根锉WaveOne镍钛器械高效治疗弯曲根管的实验研究

目的研究单根锉WaveOne镍钛器械治疗弯曲根管的疗效，并与不锈钢K 锉、ProTaper 镍钛器械进行比较。方法选取根管弯曲度在20～40°的单根管离体前磨牙60颗，随机分为A、B、C 3组，每组20颗离体牙，3组分别采用WaveOne/Crown-down法、K 锉逐步后退法及ProTaper/Crown-down法行根管预备，并采用口腔颌面锥形束计算机体层摄影分别于根管预备前后对离体牙行横向扫描。预备完成后，对3 组中的60 颗离体牙行冷牙胶侧方加压充填。测量3 组中每颗离体牙的根管预备时间、根管充填时间；分析每颗离体牙根管预 备前后，根管距根尖孔2、4 和6 mm 处的根管偏移量和轴中心率，并对以上结果进行统计学分析。结果A 组根管预备时间低于B、C 组；在根管充填时间上，A 组与C 组比较差异无统计学意义（p >0.05），但A 组短于B组（p <0.05）。在距根尖孔2、4和6 mm处，A组与B组间的根管偏移量及轴中心率比较，差异有统计学意义（p <0.05）；A 组与C 组比较，差异无统计学意义（p >0.05）。结论与不锈钢K 锉及ProTaper 相比，WaveOne 治疗弯曲根管具有效率高、根管成形效果好的优点，可广泛应用于临床弯曲根管的治疗。