2种诱导iPSC向神经干细胞分化方法的比较

目的:整体比较2种促进诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells,i PSC)向神经干细胞(neural stem cells,NSC)分化的方法,确定一种稳定、高效的获得NSC的方法,并对NSC进行系统鉴定。方法:方法A:SB431542和drosomophorin的浓度均为5μmmol/L,诱导初始密度100%;方法 B:SB431542的浓度为5 mmol/L,drosomophorin的浓度为1 mmol/L,诱导初始密度为40%。比较及鉴定方法:镜下观察诱导获得NSC的状态;realtime PCR比较神经干细胞相关基因Pax6、nestin、Sox1、Sox2等表达量;流式细胞术分析诱导第16天Pax6阳性率;免疫荧光定性分析神经干细胞相关蛋白的表达及其自发分化的能力。结果:方法 A获得的NSC悬起后成球趋势明显,圆形,透明;方法 B诱导获得NSC形状不规则,色灰暗。Real-time PCR结果证明方法 A诱导获得的细胞神经干细胞相关基因的表达量高于方法 B。流式细胞术分析证明第16天,PAX6的阳性率,方法 A高于方法 B。经鉴定,方法 A获得的神经干细胞高表达Pax6、nestin、Sox2等基因自发分化30 d,形成明显的神经纤维束,表达TUJ-1、MAP2及GFAP等神经元和胶质细胞的特异性标志物。结论:方法 A整体优于方法 B,我们推荐方法 A作为诱导i PSC向神经干细胞分化的方法。     

FUT3基因靶向miRNA表达载体的构建及鉴定

背景：研究发现，Lewis血型抗原与多种恶性肿瘤关系密切，岩藻糖基转移酶(fucosyltransferase ,FUTs)是参与合成Lewis抗原的关键酶，FUT3是其中之一。 目的：设计并构建靶向FUT3基因的miRNA干扰质粒，为探索肿瘤基因治疗新途径奠定基础。 设计、时间及地点：单一样本观察，于2007-05/10在济南市中心医院医学实验诊断中心完成。 材料：BLOCK-iT TM Pol II miR RNAi Expression Vector Kits (含荧光基因 GFP) 、T4 DNA连接酶购自invitrogen公司；大肠杆菌菌株One Shot TOP10购自invitrogen公司。 方法：根据GenBank中FUT3的序列，应用www.invitrogen.com网站的设计软件设计、合成针对FUT3 miRNA的相应Oligo DNA，退火后与BLOCK-iT TM Pol II miR RNAi Expression Vector相连接，转化感受态 E.coli TOP10 。 主要观察指标：①重组质粒DNA序列分析。②质粒DNA的琼脂糖凝胶电泳检测。③紫外分光光度计检测。④聚合酶链反应鉴定。 结果：经测序鉴定和聚合酶链反应鉴定证实成功构建针对人FUT3基因的miRNA干扰质粒 pcDNATM6.2-GW/EmGFP- FUT3-miR；质粒DNA的琼脂凝胶电泳检测和紫外分光光度计分析结果确认所提质粒纯度较高，可以用于后续试验。 结论：FUT3 靶向miRNA表达载体构建成功。     

B细胞被动凋亡的研究进展

<正>细胞凋亡(Apoptosis)或程序化死亡(Programmed Cell Death,PCD)是一个具有时间性和空间性的自主的生理性细胞死亡过程,是维持机体自身稳定的重要的负调节机制,近年来对T细胞和B     

系统性红斑狼疮患者T、B、NK细胞的变化及临床意义

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者存在免疫功能紊乱,其中淋巴细胞亚群异常在SLE病因及发病中具有重要的意义.我们利用双色荧光标记流式细胞术,探讨SLE患者在疾病的不同阶段外周血白细胞分化抗原CD3 、CD3 CD4 、CD3 CD8 、CD19 、自然杀伤细胞(NK)的变化,为阐述SLE患者存在的免疫功能紊乱、揭示SLE的发病机制提供实验依据.     

HLA—B＊5101与白塞病的相关性研究

目的 :　探讨HLA -B 5 10 1等位基因与白塞病之间的相关性。方法 :　应用微量淋巴细胞毒试验检测HLA -A和HLA -B抗原。应用PCR -SSP技术对HLA -B5 1等位基因 (HLA -B 5 10 1～HLA -B 5 10 7)进行分析。 2 0名白塞病患者符合国际白塞病委员会分类诊断标准 ,同时以 30例正常人作对照组。结果 :　在白塞病患者中 ,HLA -B5 1表型频率明显高于对照组 [患者为 6 0 % (12 2 0 ) ,对照组为 16 .7%(5 30 ) ],χ2 =10 .0 4 ,P <0 .0 0 1,校正P值 <0 .0 5 ,相对危险度为 8.98。没有发现其它HLA -A和HLA -B抗原与白塞病相关。在 12例HLA -B5 1阳性的患者中 ,均为等位基因HLA -B 5 10 1,5个HLA -B5 1阳性的对照亦均为等位基因HLA -B 5 10 1。结论 :　等位基因HLA -B 5 10 1与白塞病的易感性相关     

白塞病患者HLA-B51抗原的变化及意义

为探讨人类白细胞抗原 (HL A) - B5 1与白塞病 (BD)之间的相关性 ,应用微量淋巴细胞毒试验对 2 0例BD患者的 HL A- A和 HL A- B抗原进行了检测。同时以 30例正常人作对照组。结果 ,在 BD患者中 ,HL A- B5 l表型频率明显高于对照组 (6 0 % vsl6 .7% ) ,P<0 .0 0 1(校正 P值 <0 .0 5 ) ,相对危险度为 8.98。没有发现其他 HL A-A和 HL A- B抗原与 BD相关。提示 HL A- B5 1抗原与 BD的易感性相关     

间接免疫荧光法与免疫印迹法检测抗核抗体结果不一致分析

<正>检测抗核抗体(antinuclear antibody,ANA)是以HEp-2细胞结合大鼠肝脏组织为基质检测ANA的间接免疫荧光法(IIF)。基质包含大约100~150种自身抗原。ANA-IIF操作简单、敏感度高、特异性好,且结果易于判断等。美国风湿病学会(ACR)在2009年声明中建议将间接免疫荧     

α5-烟碱型乙酰胆碱受体表达下调对肺癌细胞HIF-1α表达的影响

目的 通过下调α5-烟碱型乙酰胆碱受体（α5-nAChR）的表达,体外研究尼古丁促肺癌细胞增殖过程中α5-nAChR对缺氧诱导因子（HIF-1α）表达的影响。方法 以不同浓度尼古丁作用人肺腺癌细胞株A549,分别采用实时荧光定量PCR和Western blotting检测A549细胞中α5-nAChR、HIF-1α mRNA和蛋白的表达。MTT法、实时荧光定量PCR、Western blotting检测CHRNA5-siRNA转染后,尼古丁促A549细胞增殖的作用和HIF-1α表达的变化。结果 尼古丁浓度为1μmol/L时,α5-nAChR和HIF-1α表达明显升高（P<0.05）,二者表达呈尼古丁浓度依赖性。CHRNA5-siRNA转染显著抑制α5-nAChR、HIF-1α表达（P<0.05）,尼古丁促A549细胞增殖的作用明显受到抑制（P<0.05）。结论 α5-nAchR通过调节HIF-1α的表达,在尼古丁促肺癌细胞增殖中起作用,提示α5-nAChR/HIF-1α信号轴可能是吸烟相关性肺癌发生的重要分子机制之一。     

腺病毒介导RNAi抑制胃癌FU97细胞AFP基因表达的研究

目的:研究甲胎蛋白特异siRNA腺病毒载体对人甲胎蛋白阳性胃癌细胞FU97AFP基因的抑制作用,及抑制甲胎蛋白基因后对此肿瘤细胞周期及凋亡的影响.方法:利用构建好的腺病毒Ad-EGFP-U6-AFP-siRNA载体转染入FU97细胞,筛选出最佳感染复数.结果:筛选出最佳感染复数为:MOI=100;Ad-EGFP-U6-AFP-siRNA转染细胞后能显著抑制AFP基因在mRNA和蛋白水平的表达,G0/G1期细胞百分率[(33.49±1.85)%]明显低于空载体对照组和空白对照组[(64.76±2.98)%和(74.81±2.60)%,P<0.01],G2/S期[(64.10±2.59)%]显著高于空载体组和空白对照组[(34.77±1.91)%和(29.85±2.85)%],P<0.01;凋亡分析,实验组与各对照组之间凋亡发生差异无统计学意义,P>0.05.结论:重组腺病毒介导的RNA干扰能够显著抑制AFP在FU97中mRNA水平和蛋白水平的表达;抑制AFP后,影响细胞增殖周期,但对细胞凋亡无影响.     

冠心病患者血清微量元素与血液流变学指标的关系

为了探讨元素和血液流变学与冠心病的关系,我们选择30例按1990年全国内科学会议心血管病专业组建议的标准确诊的冠心病高血脂患者(男21例、女9例,年龄38～65岁,平均52岁)和20例血脂正常、性别和年龄分布与患者组相仿的健康者,同法测定血清微量元素及血液流变学指标。 1.测定方法:测定血清锌(Zn)、铜(Cu)、铁(Fe)、镁(Mg)、钙(Ca)按原子吸收分光光度法进行。 血液流变学试用全血比高切粘度、全血