抑制AFP基因表达能直接抑制肝癌细胞系SMMC-7721增殖

目的: 构建含有黑色素肿瘤相关抗原hgp100的CTL表位编码基因质粒γ1neo-hgp100,观察此质粒的体外表达和表达产物的提呈,以及体内基因免疫对黑色素肿瘤攻击的保护效应. 方法: 将编码hgp100的CTL表位的DNA序列插入抗体化抗原的表达质粒γ1neo中,构建γ1neo-hgp100,体外转染J558L,ELISA检测免疫球蛋白的表达;转染后的J558L与pmel TCR转基因T细胞共育,48 h后ELISA检测培养上清中IFN-γ的含量.以γ1neo-hgp100脾内基因免疫C57BL/6小鼠,以B16F10黑色素瘤细胞攻击免疫后小鼠,定期观察肿瘤的生长情况及大小.结果: 所构建的γ1neo-hgp100可以在体外表达,表达产物可以被充分的提呈,被提呈的hgp100 CTL表位能有效的活化pmel TCR T细胞分泌IFN-γ.经γ1neo-hgp100免疫的小鼠能显著抵抗B16F10黑色素瘤细胞的攻击,生存时间得以明显延长.结论: γ1neo-hgp100基因可有效的在体外表达并被提呈至T细胞,产生体内免疫保护效应.     

人类白细胞抗原-B51与病葡萄膜炎的相关性研究

目的 探讨人类白细胞抗原(HLA)-B51与Behcet病葡萄膜炎间的相关性。 方法 应用微量淋巴细胞毒试验，对27例病患者和30例健康人的HLA-A和HLA-B抗原进行研究。应用聚合酶链式反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术测定HLA-B51抗原阳性的病患者和对照组人群中的HLA-B51等位基因(HLA-B*5101-B*5107). 结果 Behcet病患者和对照组HLA-B51的阳性频率分别为63%和16.7%［χ2=12.9，P＜0.001，Pc＜0.05,相对危险度(RR)=8.5 ］。在Behcet病患者中，葡萄膜炎的患病率为40.7%(11/27)；72.7%(8/11) Behcet病葡萄膜炎中存在HLA-B51(均为HLA-B*5101)。HLA-B51和HLA-B*5101与Behcet病葡萄膜炎存在弱相关性，但均未见统计学差异(分别为RR=2.07，χ2=0.759，P＞0.25；RR=2.67，χ2=1.395，P＞0.10)。 结论 提示HLA-B51(HLA-B*5101)是BehcetWT5”病的易感基因，并与葡萄膜炎有一定的相关性。 （中华眼底病杂志，2004，20：203-205）     

甲胎蛋白特异性小干扰RNA重组腺病毒载体的构建

背景：RNA干扰技术的应用，关键在于能够采用1个有效的基因转移系统将小干扰RNA转入至靶细胞，目前广泛应用的是构建小干扰RNA表达载体。 目的：利用AdMax腺病毒载体系统构建表达人甲胎蛋白-小干扰RNA的腺病毒载体。 设计、时间及地点：开放性实验，于2007-03/10在山东大学附属济南市中心医院中心实验室完成。 材料：穿梭质粒pDC316-EGFP-U6为本元正阳基因技术公司产品；AdMax KitD试剂盒与低代数HEK293细胞为Microbix Biosystems Inc.（Canada）公司产品。 方法：选择针对甲胎蛋白 mRNA的特异性小干扰RNA靶序列，设计合成为相应的双链DNA，并将其与酶切线性化的pDC316-EGFP-U6载体片段连接，构建好的穿梭质粒pDC316-EGFP-U6-AFP-siRNA和腺病毒骨架质粒pBHGlox_E1,3Cre共转染HEK293细胞，同源重组产生重组腺病毒。 主要观察指标：对重组腺病毒进行聚合酶链反应鉴定及扩增、纯化、滴度测定。 结果：构建的穿梭质粒载体经聚合酶链反应鉴定和测序分析，证实与设计一致。重组腺病毒Ad-AFP-siRNA经聚合酶链反应和绿色荧光蛋白表达检测证实构建成功，测定滴度为1.4×109 nfu/L。 结论：实验成功构建了Ad-EGFP-U6-AFP-siRNA重组腺病毒。     

检测骨髓增生异常综合征的ETV6/JAK2融合基因产物的意义

目的:探讨在骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)患者中检测ETV6/JAK2融合基因产物的临床意义.方法:对66份来自MDS患者的骨髓标本进行骨髓细胞培养,制备染色体,做核型分析,对涉及9p24与12p13易位的患者检测ETV6/JAK2融合基因产物.结果:66例MDS中检出染色体畸变24例,染色体畸变率36%;其中低危MDS的染色体畸变率为25%(5/20);高危MDS的染色体畸变率为63%(19/30),两者比较差异有统计学意义(P＜0.01).涉及9p24和12p13易位1例,为RAEB-t患者,核型为46,XX,-6,t(9; 12;22) (p24;p13;q11), mar.行逆转录PCR检测ETV6/JAK2融合基因产物( ).该患者在诊断MDS后5个月死于感染.结论:对MDS患者进行骨髓的ETV6/JAK2融合基因产物检测有助于了解病情的严重程度,便于指导治疗.     

可溶性白细胞介素-2受体水平与肺癌分期和转移的关系

可溶性白细胞介素-2受体(sIL-2R)来自活化淋巴细胞膜白细胞介素-2受体(mIL-2R)的a链成分,由255个氨基酸残基组成。sIL-2R从细胞膜脱落进入血循环,故正常人血清及尿中均存在微量的sIL-2R。我们采用夹心ELISA法测定了29例患者肺癌患者血清中的sIL-2R水平,旨在探讨sIL-2R与肺癌分期和转移的关系。1　资料与方法肺癌组29例均经临床及各种辅助检查确诊,其中男17例(年龄45～80岁,平均68岁,>60岁者13例)、女12例(年龄40～70岁,平均56岁,>60岁者6例)。肺癌分期为～期8例,期8例,期13例。对照组20例,男女各半,均为健康献血员。两组均取空腹…     

骨髓增生异常综合征患者ETV6基因重排分析及其临床意义

目的 用信号分离原位杂交（Split-signal FISH）技术分析骨髓增生异常综合征（MDS）患者ETV6基因重排情况，并初步探讨其与MDS分期和预后的关系。方法 用常规细胞遗传学和Splitsignal FISH技术分析58例MDS患者ETV6基因重排，对涉及9p24、12p13平衡易位的患者以ETV6F1、ETV6F2和JAK2R1、JAK2R2为引物进行RT—PCR。用χ^2检验和时序检验对患者的ETV6重排与MDS分期、预后之间关系进行分析。结果 检出ETV6基因重排4例（6．9％），其中1例（1．7％）经RT-PCR证实形成了ETV6／JAK2融合基因。平均随访12个月，4例（100％）重排患者全部转为急性白血病，中位生存时间7个月，另外54例患者10例（17％）转为急性白血病，中位生存时间28个月。4例重排患者均为MDS难治性贫血伴原始细胞增多（RAEB）阶段，另外54例有17例（31．5％）为MDS晚期阶段。结论 ETV6基因雷排在MDS中有较高表达率（6．9％）．并与MDS的分期和预后密切相关。     

人类白细胞抗原 G在卵巢恶性肿瘤组织中的表达

目的探讨免疫抑制分子人类白细胞抗原G(HLA G)在卵巢恶性肿瘤组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学SP法,应用抗HLA G单克隆抗体4H84,检测45例原发性卵巢恶性肿瘤和36例卵巢良性肿瘤组织中HLA G蛋白的表达。应用逆转录酶聚合酶链式反应(RT PCR)法分析新鲜卵巢良、恶性组织中HLA G mRNA的表达。结果①免疫组织化学显示,30例卵巢恶性肿瘤组织中有HLA G的表达阳性（66.67%）, HLA G在卵巢恶性肿瘤组织中的表达明显高于良性组织（P＜0.01）;②浆液性囊腺癌、粘液性囊腺癌、子宫内膜样癌间HLA G分子的阳性率差异有统计学意义（P＜0.05）,HLA G阳性率与年龄、临床分期、病理分级、淋巴结转移无关;③RT PCR结果表明卵巢恶性肿瘤组织中有HLA G mRNA的表达,而卵巢良性肿瘤及卵巢瘤样病变组织中则无HLA G mRNA的表达。结论卵巢恶性肿瘤组织中HLA G mRNA及HLA G蛋白的表达异常,提示在卵巢恶性肿瘤的发生发展中免疫抑制起到重要作用。     

抗结核抗体及结核感染T细胞斑点试验在结核病诊断中的应用

目的探讨抗结核抗体(38kD-IgG)及结核感染T细胞斑点试验（T SPOT-TB）在结核病临床诊断中的价值。方法以上述2种方法单项及联合检测活动性结核病患者83例（菌阳结核患者43例,菌阴结核患者40例）,非结核对照者50例（其中有呼吸系统疾病者15例,健康查体者35例）,共计133例。结果38kD-IgG及T SPOT-TB试验检测菌阳结核的阳性率分别为79.1%和93.0%,联合检测阳性率为97.7%;2种方法单项检测菌阴结核的阳性率均为72.5%,联合检测阳性率提高到92.5%。50名非结核对照中,2种试验特异性分别为70.0％和94.0%,联合检测特异性为66.0％。结论对于菌阳患者,T SPOT-TB试验敏感性较高（93.0%）,但与38kD-IgG方法相比,统计学上差异无统计学意义（χ²=3.49, P>0.05）;T SPOT-TB试验的特异性明显高于38kD-IgG试验（χ²=9.76, P<0.01）;2种方法联合检测能显著提高菌阴结核患者阳性检出率,与单项检测方法相比,差别有统计学意义（χ²=5.54, P<0.05）因此,联合检测对于菌阴结核患者的诊断,具有实用价值。     

STAT3真核表达质粒的构建及对胃癌细胞增殖的影响

目的 构建人信号转导和转录激活因子3（STAT3）真核表达载体,研究STAT3基因对人胃癌细胞株MGC803的影响。方法 构建pcDNA3-STAT3真核表达质粒,经脂质体介导转染胃癌细胞株MGC803。RT-PCR和Western blotting检测转染后STAT3、P-STAT3(Y705)、P-STAT3(S727)、Survivin 和 PCNA在MGC803细胞中mRNA和蛋白水平的表达,CCK-8法检测pcDNA3-STAT3对细胞MGC803的影响。结果 测序及酶切鉴定证实,真核表达质粒pcDNA3-STAT3构建成功。Western blotting和RT-PCR实验结果证实,与转染空载体组相比,转染重组质粒组STAT3、P-STAT3(Y705)、P-STAT3(S727)、Survivin 和 PCNA在蛋白水平和mRNA水平的表达均明显升高,差异有统计学意义（P＜0.05）。CCK-8实验结果显示,与转染空载体组相比,转染重组质粒组人胃癌细胞株MGC803增殖能力明显升高,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 真核表达质粒pcDNA3-STAT3可以提高STAT3基因在人胃癌细胞株MGC803中的表达,并且增强胃癌细胞的增殖能力。     

SLE患者外周血B淋巴细胞CD69异常表达的临床意义

为观察系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血B淋巴细胞在植物血凝素(PHA)刺激前后早期活化标志CD69的表达变化，2000年以来我们做了相关检测。现报告如下。