HCV感染对肝癌一些癌相关基因产物表达的影响

目的 研究丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的致癌机理。方法 以免疫组化ＡＢＣ法对４６例肝细胞癌（ＨＣＣ）及其癌旁肝组织的ＨＣＶＣＰ１０、ＮＳ３及ＮＳ５抗原和rasp２１、c-myc、c-erbB-2、突变型p５３及p１６蛋白进行染色,并将ＨＣＣ分为ＨＣＶ抗原阳性组和ＨＣＶ抗原阴性组,对比分析ＨＣＶ感染对上述癌相关基因蛋白产物表达的影响。结果 ４６例ＨＣＣ患者中,１～３种ＨＣＶ抗原性２０例（４３．５％）,２～３种ＨＣＶ抗原阳性     

幽门螺杆菌感染与APC基因突变的关系

目的　探讨幽门螺杆菌 (Hp)感染与APC基因突变的关系。方法　采用改良的Giemsa染色和PCR方法检测Hp;采用DGGE电泳和DNA测序技术检测APC突变。结果　 6 8例胃癌中检出APC基因突变 15例 ,突变率为 2 2 .1%。APC突变率在肠型胃癌显著高于弥漫型胃癌 (P <0 .0 5 )。将MSI分为高频率MSI(MSI H ,≥ 2个位点 ) 8例、低频率MSI(MSI L ,仅为 1个位点 ) 9例和MSI阴性 (MSS) 5 1例 3组 ,结果APC突变均发生于MSI L和MSS组 ,而MSI H组未发现有APC突变者。APC基因突变在Hp+组和Hp -组及CagA +组和CagA -组检出率均无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论　APC突变参与了LOH途径 ;胃癌粘膜Hp感染与APC基因突变无关     

黏蛋白3羧基末端蛋白酶切的阻断及N-糖基化的抑制对其细胞膜定位的影响

目的探讨大鼠黏蛋白3(rMuc3)羧基端蛋白酶切反应和羧基端内N-糖苷型糖链与细胞膜定位的关系。方法利用脂质体将包含rMuc3羧基端的3个真核表达载体p20、p20t和p20s/a导入COS-1细胞,并采用N-糖苷型糖链合成抑制剂衣霉素处理转染后的COS-1细胞,抑制其表达蛋白质的N型糖链合成。采用免疫荧光定位法,用抗V5抗体和抗Myc抗体检测Muc3蛋白的表达。结果在甲醇固定的COS-1细胞,细胞核周和细胞表面均能检测到完整的Muc3羧基端p20表达产物;在未经甲醇固定的COS-1细胞,免疫荧光仅限于细胞表面。缺失的rMuc3羧基端的p20t表达产物仅能在细胞核周检测到。Muc3羧基端建立的蛋白酶切阴性突变体p20s/a与p20转染细胞的荧光分布相近。衣霉素抑制糖链合成后不影响膜定位。结论Muc3羧基末端蛋白酶切的阻断及N-糖基化的抑制不能影响Muc3的细胞膜定位,影响其定位的因素主要是SEA组件靠近羧基端的区域,包括该分子的跨膜区和胞质内区域。     

肝细胞癌及癌旁组织中丙型肝炎病毒NS3抗原的表达

应用ＳＰ法（链霉菌抗生物素蛋白－－过氧化酶连结法）对肝细胞癌癌组织（４６例）及其癌旁组织（３８）例中丙型炎病毒ＮＳ３抗原的免疫组织化学洒色发现，两者的检出率分别为２３．９％和３９．５％。ＮＳ３抗原阳性染色细胞呈弥漫、灶状和散在分布，阳性染色信号呈细颗粒状，定位于肝细胞和肝癌细胞的胞浆内，抗原表达与局部的病一形态改变之间无明显的联系。结果提示ＮＳ３抗原是丙型肝炎病毒感染后的表达蛋白，而且ＨＣＶ     

肝癌患者HCV感染与癌基因c—erbB—2表达的关系

探讨ＨＣＶ感染与肝癌组织中癌基因ｃ－ｅｒｂＢ－２表达的关系。方法；采用免疫组化ＳＰ法。４６例ＨＣＣ及其３８例癌旁组织中，ＨＣＶＮＳ３抗原的检出率为２１．７％和３４．２％，两者间无显著性差异。癌ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白的检出率分别为４７．８％和４４．７，两者间无显著性差异；肝癌组织中癌基因ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白表达的阳性率与该患者的ＨＣＶ感染无关。     

幽门螺杆菌感染与hMLH1和APC基因突变及hMLH1甲基化异常的关系

目的　探讨幽门螺杆菌 (H .pylori)感染与hMLH1和APC突变及甲基化异常的关系。方法　采用改良的Giemsa染色和PCR方法检测H .pylori;采用二维DNA电泳、DGGE电泳和DNA测序技术检测hMLH1和APC突变 ;采用甲基化特异性PCR检测hMLH1启动子区的甲基化状态 ;采用以PCR为基础的方法检测微卫星DNA不稳 (MSI)。结果　 6 8例胃癌中检出hMLH1基因突变 3例 ,突变率为 4 4 %。APC基因突变 15例 ,突变率为 2 2 1%。hMLH1突变与肿瘤大小、分化程度、组织学类型、浸润深度和临床病理分期无显著相关。APC突变率在肠型胃癌显著高于弥漫型胃癌 (P <0 0 5 )。正常胃黏膜未见hMLH1高甲基化。 6 8例胃癌中检出hMLH1高甲基化 11例 ,占 16 2 % ,均为去甲基化和高甲基化并存。将MSI分为高频率MSI(MSI H ,≥ 2个位点 ) 8例、低频率MSI(MSI L ,仅为 1个位点 ) 9例和MSI阴性 (MSS) 5 1例三组 ,结果 3例hMLH1基因突变均发生于MSI H组 ,而MSI L和MSS组未见 ;APC突变均发生于MSI L和MSS组 ,而MSI H组未发现有APC突变者 ;MSI H组hMLH1高甲基化的检出率显著高于MSI L和MSS组 (P <0 0 1)。hMLH1和APC基因突变及hMLH1甲基化在H pylori阳性组和H pylori阴性组及CagA 组和CagA-组检出率差异均无统计学意义 (P>0 0 5 )。结论　hMLH1突变和     

干扰结肠癌上皮细胞Ascl2的表达致其向杯状细胞表型分化

目的探讨转录因子Ascl2对结肠癌细胞分化的影响。方法采用Ascl2分子干扰质粒和对照质粒对结肠癌HT-29和LS174T细胞进行转染,通过G418筛选建立稳定转染的细胞系,采用RT-PCR和Western blot方法检测干扰Ascl2分子表达对肠杯状细胞标志物Muc2和TFF3表达的影响。结果成功构建了shRNA-Ascl2/EGFP质粒以及对照质粒shRNA-control/EGFP,经测序与预期相符,G418筛选获得shRNA-Ascl2/HT-29、shRNA-Ctr/HT-29、shRNA-Ascl2/LS174T和shRNA-Ctr/LS174T稳定转染细胞。RT-PCR和Western blot检测证实干扰质粒能够有效地抑制HT-29和LS174T细胞内的Ascl2的表达(P<0.01)。RT-PCR检测发现Muc2和TFF3 mRNA表达水平在Ascl2干扰后的HT-29细胞内均明显上调(P<0.05);Muc2 mRNA表达水平在Ascl2干扰后的LS174T细胞内明显上调,差异有统计学意义(P<0.05),但是TFF3 mRNA表达水平在Ascl2干扰后的LS174T内升高不明显(P>0.05)。Western blot检测发现Muc2蛋白质表达水平在Ascl2干扰后明显上调(P<0.05)。结论干扰结肠癌HT-29和LS174T细胞内Ascl2的表达导致其向杯状细胞的表型分化。     

HCV核心抗原在肝细胞癌及癌旁肝组织中的免疫组化研究

ＨＣＶ核心抗原在肝细胞癌及癌旁肝组织中的免疫组化研究汪荣泉周子成杨建明房殿春目前有关丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）相关抗原在肝细胞癌（ＨＣＣ）中表达定位研究作者所见报道不多。因此采用ＳＰ法和ＨＣＶ核心抗原的单克隆抗体、ＨＢｓＡｇ的多克隆抗体对ＨＣＣ及癌旁组织...     

IL-1β对HepG2细胞核受体RXRα蛋白表达的影响

目的研究白细胞介素1β（interleukin 1 beta,IL-1β）诱导人肝癌细胞HepG2维甲酸X受体α（retinoid Xreceptor alpha,RXRα）蛋白核-胞浆转移现象及其基因水平变化。方法 IL-1β处理HepG2细胞,收集不同时间点RXRα总蛋白、胞浆蛋白、核蛋白及mRNA;同时用蛋白酶体抑制剂,MG132预处理HepG2细胞后IL-1β诱导细胞,收集细胞蛋白及mRNA,应用Western blot及实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,real-time PCR）检测RXRα总蛋白、胞浆蛋白、核蛋白及mRNA水平的变化。结果总胞核RXRα蛋白表达量降低（P〈0.05）,胞浆RXRα蛋白表达量增高（P〈0.05）,RXRαmRNA水平在6、12 h升高（P〈0.05）。MG132可以抑制IL-1β对细胞核、胞浆RXRα蛋白表达水平的变化。结论 IL-1β可以诱导HepG2细胞RXRα核-胞浆转移,RXRα核-胞浆转移可能与泛素-蛋白酶体降解途径相关。