食管腺癌组织中核干细胞因子表达的研究

目的研究核干细胞因子在食管腺癌中的表达情况,探讨其与食管腺癌临床病理的关系。方法应用RT—PCR和Western blotting方法检测40例食管腺癌中核干细胞因子的表达情况。结果核干细胞因子阳性表达率在食管腺癌中为95％（38／40）,而癌旁组织无核干细胞因子表达,差异有显著性（P〈0．05）;核干细胞因子阳性表达率与患者年龄、性别、肿瘤大小、TNM分期及有无淋巴结转移无关,与肿瘤分化程度有关（P〈0．05）。结论核干细胞因子在食管腺癌中异常表达,有望为食管腺癌的早期诊断和治疗提供新的手段。     

人正常胃肠道、生殖道粘膜中MUC5AC核粘蛋白及其mRNA定位的研究

目的：提示ＵＭＣ５ＡＣ基因在人胃肠道和生殖道粘膜组织中的表达异质性及其特点,为进一步研究其与疾病关系提供正常的形态学基础。方法：应用免疫组织化学和原位杂交方法。结果：ＭＵＣ５ＡＣ基因编码的核旧白及ｍＲＮＡ主要分布于正常胃粘膜表面１／３,包括粘膜的上皮层和胃腺的中上部,呈细颗粒状,位于阳性细胞的胞内,核周明显,胃窦、胃阍的表达无区别。十二指肠、空肠、结肠及宫颈组织内无表达,胆囊粘膜内灶状分布的阳性着     

hPOT1 RNA干扰对人胃癌BGC823细胞TRF1、TRF2和Tankyrase1表达的影响

目的 观察人端粒保护蛋白(hPOT1)RNA干扰对胃癌BGC823细胞端粒重复序列结合因子1(TRF1)、端粒重复序列结合因子2(TRF2)、端锚聚合酶(Tankyrase1)转录水平的影响.方法 采用半定量RT-PCR方法检测TRF1、TRF2和Tankyrase1在mRNA表达水平的改变.结果 hPOT1RNA干扰抑制细胞中hPOT1表达后,TRF1表达明显上调,TRF2和Tankyrase1明显下调.结论 人胃癌BGC823细胞中hPOT1表达下调伴随TRF1表达明显上调、TRF2和Tankyrase1表达明显下调,提示hPOT1和TRF1、TRP2、Tankyrase1三个端粒相关蛋白之间具有较为密切的联系,并且相互制约、相互影响.     

转录因子Ascl2调控Acss1/3的表达影响结直肠癌患者预后

转录因子Ascl2作为WNT信号靶基因,可影响结直肠癌（CRC）前体细胞干性特征,探讨其能否调控短链脂肪酸β-氧化而影响CRC患者的预后。方法 下载稳定干扰Ascl2表达的CRC LS174T细胞（sh-Ascl2/LS174T）的mRNA及miRNA差异表达数据（GSE69036和GSE34926）分析其靶基因;应用RT-PCR方法和Western 印迹定量检测sh-Ascl2/LS174T及对照细胞中的Ascl2、Acss1和Acss3的mRNA表达水平,以及Ascl2和Acss1蛋白表达水平,从GSE44076表达数据和UALCAN数据比较在正常结直肠粘膜、CRC组织和不同临床病理分期的肿瘤组织的表达水平差异;TCGA数据库下载548例CRC患者基因 mRNA表达量及相关临床信息,用Spearman等级相关分析表达相关性,Kaplan-Meier法进行生存分析,Cox回归分析评估危险因素。结果 sh-Ascl2/LS174T细胞中Acss1的mRNA较对照细胞下调2.08倍,miR-4282表达水平下调2.069倍。RT-PCR定量检测sh-Ascl2/LS174T细胞中Acss1的mRNA和miR-4282水平明显下降(P＜0.01), Acss3的mRNA水平明显升高(P＜0.05);Acss1和Ascl2蛋白水平较对照细胞均明显下降。CRC组织Ascl2和Acss1的mRNA水平明显高于癌旁结直肠粘膜组织(P＜0.001),而Acss3明显低于癌旁结直肠粘膜组织 (P＜0.001);CRC组织中Ascl2与Acss1的mRNA表达水平呈正相关,与Acss3的表达水平呈负相关(均P＜0.001)。Ascl2和Acss3表达水平与疾病特异性生存期（DSS）、总体生存期（OS）、无进展生存期（PFS）无关,Acss1高表达组比低表达组的DSS (P=0.0389)和OS (P=0.04)明显降低。Ascl2与Acss1基因异常表达、Ascl2、Acss1和Acss3基因异常联合表达与CRC患者的DSS存在显著的联系(P=0.0377和P=0.0161),Ascl2、Acss1和Acss3三个基因的联合异常表达是影响CRC患者DSS的危险因素之一(P=0.043)。结论Ascl2对CRC细胞中的Acss1/3的表达可能具有调控作用而导致其短链脂肪酸β-氧化的重编程,它们的联合异常表达可以一定程度预测CRC患者的预后     

可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体重组腺病毒载体的构建及其在肝癌细胞株中的表达

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）能诱导30余种人类肿瘤细胞凋亡，在抗肿瘤治疗中具有广阔应用前景。目的：构建携带可溶性TRAIL基因的复制缺陷型重组腺病毒载体，鉴定其在肝癌细胞株中的表达。方法：以重叠延伸聚合酶链反应（PCR）扩增白细胞介素（IL）-2信号肽和TRAIL膜外区融合片段，克隆于腺病毒穿梭质粒pAdTrack—CMV，转化含复制缺陷型腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的大肠杆菌pAdBJ5183，经细菌内同源重组产生重组腺病毒Ad-IL-2-TRAIL，以脂质体法转染HEK293细胞包装病毒，感染肝癌细胞株HepG2．荧光显微镜下观察增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的表达。结果：成功构建了携带可溶性TRAIL基因的复制缺陷型重组腺病毒载体。病毒感染HepG2细胞48h后，超过95％的细胞中出现绿色荧光。结论：所构建的复制缺陷型重组腺病毒Ad—IL-2-TRAIL可在肝癌细胞中高效表达可溶性TRAIL，为进一步行肿瘤TRAIL基因冶疗提供了实验依据。     

消化道癌患者胃肠道粘膜中MUC2和MUC3基因的表达

应用免疫组织化学和原位杂交方法检测人消化道癌患者胃肠道粘膜中的ＭＵＣ２和ＭＵＣ３基因蛋白产物和ｍＲＮＡ的表达，以提示ＭＵＣ２和ＭＵＣ３基因在人消化道癌患者胃肠道粘膜中的表达规律，结果发现，胃粘膜中无ＭＵＣ２和ＭＵＣ３基因产物的表达，ＭＵＣ２核粘蛋白及ｍＲＮＡ主要存在十二指肠和结肠杯状细胞周及核上，柱状细胞中无表达。ＭＵＣ３核粘蛋白及其ｍＲＮＡ主要存在十二指肠和结核的杯状细胞和柱状细胞胞浆内，而杯状     

胃癌及癌前病变组织中MUC1基因的表达及其意义

目的:揭示胃癌及肠化组织中的 MUC1基因的表达与临床病理行为之间的联系。方法:用 BC1抗体和免疫组织化学 SP 法检测人正常胃肠道粘膜、肠化粘膜以及胃癌组织中 MUC1基因核心蛋白的表达。结果:人正常胃粘膜组织中广泛分布 MUC1基因产物(100%),而肠化组织及胃癌组织的表达阳性率分别为75.9%、63.0%;胃癌组织中 MUC1基因表达与癌组织大小(P<0.01)、淋巴结转移(P<0.05)和临床分期(P<0.01)有明显的相关;胃癌组织中 MUC1基因表达程度与淋巴结转移及临床分期相关(P<0.05),随着 MUC1基因表达的增强,淋巴结转移减少,临床Ⅰ—Ⅱ期的比例增多,不同类型肠化中 MUC1基因表达无差异(P>0.05)。结论:上述结论强烈提示用 BC1抗体检测的 MUC1基因是胃癌进展有用标志,与胃癌的临床病理行为密切相关,而与肠化分型无关。     

Barrett食管黏膜微细形态改变和CDX2蛋白的表达

目的 研究食管黏膜微细形态的改变和CDX2蛋白表达在Barrett食管（BE）诊断中的意义。方法 采用高清晰内镜观察BE及非BE的胃食管反流疾病（GERD）患者的齿状线附近黏膜的小凹及微细血管形态变化，并采用免疫组化方法检测CDX2蛋白的表达。结果 48例BE中，40例可观察到食管下段的栅状血管末端有不同程度的下移现象，而60例非BE的GERD患者均未发现有血管下移现象；放大内镜下BE黏膜可分为绒毛型、条纹型和小点型，绒毛型肠上皮化生（肠化）检出率显著高于条纹型及点状（P〈0.01）；CDX2蛋白不但在肠化的杯状细胞表达，而且在BE和非BE的柱状上皮中亦有表达，绒毛状上皮CDX2表达的阳性率显著高于条纹状（P〈0.01）和点状上皮（P〈0．05）。结论 观察食管黏膜微细形态有助于对BE的诊断、分型及了解其相关病理背景，CDX2蛋白是一种具有较高敏感性的肠上皮特异标志物，有助于判断早期肠化的发生，对BE的早期诊断可能有重要价值。