冷冻影响肝癌细胞HLA和B7分子表达的实验研究

目的：探讨冷冻治疗后机体免疫功能提高的机制。方法：应用流式细胞仪检测人肝癌细胞经0℃或－20℃冷冻后,HLA和B7分子表达率和平均荧光强度的变化。结果：0℃组与对照组比较,HLA－Ⅰ分子和B7－2分子的表达率和平均荧光强度均无明显变化;HLA－Ⅱ分子和B7－1分子的表达率增高,平均荧光强度增强。－20℃组与对照组比较,HLA－Ⅰ、HLA-Ⅱ、B7-1和B7－2分子的表达率均增高,平均荧光强度均增强。－20℃组和0℃组比较,HLA－Ⅱ和B7－1分子的表达率和平均荧光强度均无显著性差异;HLA－Ⅰ和B7－2分子表达率均增高,平均荧光强度均增强。结论：0℃和－20℃冷冻可增强人肝癌细胞HLA和B7分子的表达,这可能是冷冻治疗提高机体免疫功能的机制之一。     

一种新的中性鞘糖脂显色方法

为了建筑一种新的简单的中性鞘糖脂显色法,作者按改良的Hakomori法纯化组织中性鞘糖脂,分别应用传统的二苯胺喷雾法和碘显色进行显色并比较了两种方法的敏感性。结果显示,传统的二苯胺喷雾法显色中性鞘糖脂呈蓝色,碘显色法显色呈棕黄色,两种方法各组分位置相同,但后者较前者敏感、快速、简便。说明碘显色法作为一种新的中性鞘糖脂显色法,具有简单、经济、快速、敏感、无毒的优点,且可重复显色。     

CMH为KBv200耐药相关中性鞘糖脂

为了研究耐药细胞株KBv200中性鞘糖脂表达的规律,采用改良的Hakomori法提取、纯化了KB及其耐药细胞株KBv200的中性鞘糖脂,行高效薄层层析,分析其含量的异同;并以糖脂合成抑制剂PPMP抑制KBv200中性鞘糖脂的合成,观察了其对KBv200耐药性的逆转作用。结果发现：KBv200的CMH和CDH表达较KB强,尤以CMH为著,PPMP能抑制KBv200细胞CMH的合成,并能逆转KBv200对长春新碱（VCR）的耐药性。说明CMH为HBv200耐药相关中性鞘糖脂,抑制耐药细胞CMH的合成可能是逆转肿瘤多药耐药的一种新方法。     

肿瘤耐药相关鞘糖脂CMH对人树突状细胞B7表达的影响

为了探讨肿瘤耐药相关鞘糖脂CMH在耐药肿瘤细胞免疫逃避中的作用,用柱层析的方法分离纯化了KBv200细胞的耐药相关中性鞘糖脂CMH,采用流式细胞仪技术检测CMH作用前后人树突状细胞（DC）B7抗原的表达。结果显示,CMH明显地抑制DC B7抗原的表达,说明肿瘤耐药相关鞘糖脂可能是通过对DC的影响而抑制机体的免疫反应。     

牛脑中性鞘糖脂Glob-N的分离鉴定

为了探索一种新的中性鞘糖脂（ｎｅｕｔｒａｌ ｇｌｙｃｏｓｐｈｉｎｇｏｌｉｐｉｄｓ,Ｎ－ＧＳＬｓ）单一组分的纯化分离鉴定方法,将通过改良的Ｈａｋｏｍｏｒｉ方法提取的牛脑中性鞘糖脂经过加压柱层析,梯度甲醇／氯溶液洗脱。所得的产物行＾１Ｈ－ＮＭＲ和＾１３Ｃ０ＮＭＲ测定。     

Glob-N对胶质瘤细胞株SWO-38生长的体外实验研究

为了探讨正常及肿瘤相关中性鞘糖脂对肿瘤细胞生长的调控作用。方法：采用改良的Ｈａｋｏｎｏｒｉ方法提取,纯化正常人脑,牛脑,正常人”Ｏ“型血红细胞膜的Ｎ－ＧＳＬｓ,运用柱层析的分析分离正常人脑,牛脑,红细胞膜的红细胞糖甙 脂及人有存二己糖神经鞘氨醇,ＭＴＴ法检测各种来源的Ｇｏｌｂ－Ｎ及人脑ＣＤＨ对胶质瘤细胞株ＳＷＯ－３８生长的影响。一种不同来源的Ｇｏｌｂ－Ｎ均能抑制ＳＷＯ－３８细胞的增殖,其中以正常人     

表柔比星壳聚糖微球联合微波消融治疗小鼠肝移植瘤

背景：原发性肝癌的手术切除率较低,肝癌的局部治疗成为重要手段。经皮微波消融治疗能达到原位灭活的目的,但不能彻底杀灭瘤细胞。缓释剂型化疗药物可形成局部较高药物浓度及发挥较持久作用,目前已多被应用于原发性肝癌的治疗。目的：观察负载表柔比星的壳聚糖微球联合微波消融局部治疗荷肝癌小鼠皮下移植瘤的效果。方法：采用W/O型乳化-固化法制备表柔比星-壳聚糖微球,扫描电镜观察壳聚糖微球的表面形态,粒径大小。紫外分光光度计分析载药微球的包封率、载药量及药物累积释放率。将24只H22皮下肝癌荷瘤小鼠分成4组,各组皮下肝癌肿瘤分给予以下治疗：单纯微波治疗;微波治疗后第2天给予瘤内注射生理盐水;微波治疗后给予瘤内注射表柔比星;微波治疗后联合瘤内注射载药微球,监测荷瘤小鼠肿瘤体积变化并计算抑瘤率。结果与结论：壳聚糖微球平均粒径约为105 μm,粒径大小较一致,包封率约为80%,载药率约为11%,2周的累积缓释率为84%。微波联合瘤内注射生理盐水、表柔比星、载药微球的抑瘤率分别为8%,20%,47%。表明壳聚糖微球是一种有效的表柔比星局部缓释剂型,联合微波消融治疗有较强的抑瘤作用。关键词: 表柔比星;壳聚糖;载药缓释微球;微波;小鼠皮下肝癌;控制释放载体材料doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.08.013     

双特异抗体对肿瘤浸润淋巴细胞细胞毒性增强效应

近年来研究表明,部分肿瘤组织中分离TIL细胞.单用IL-2难以诱导出高的抗癌活性.双特异性抗体中能识别T细胞抗原受体复合物的抗CD3单抗不仅能促进TIL细胞增殖,而且能增强其抗瘤活性;而识别肿瘤细胞表面抗原的抗肿瘤单抗,则引导TIL定向杀伤肿瘤靶细胞.本文选择了抗CD3单克隆抗体和抗肺癌单克隆抗体制成双特异性抗体,探索其对TIL细胞杀伤肺癌细胞增强效应,现报告如下:首先采用SPDP化学偶联法将纯化后抗CD3单抗和抗肺癌单抗ALTO4以二硫键连接成ALTO4-CD3双特异性抗体.再分离得到TIL细胞,并经间接免疫荧光法证实制得TILCD3~ 细胞占65%.采用间接免疫荧光法检测显示AL-TO4-CD3能同时与A549和TIL细胞特异地结合,而且通过其桥梁作用,显著增加TIL和A549细胞结合率;通过MTT比色     

双特异抗体导向骨髓中活化T细胞清除骨髓中肿瘤细胞

先用抗CD3单抗和IL-2激活肺癌患者骨髓中的T淋巴细胞,然后按不同比例将人肺癌细胞株PC84045细胞掺入到骨髓细胞中,再加入能同时识别CD3抗原和人肺癌细胞表面抗原的双特异抗体CD3-ALTO4,在IL-2和IL-3存在下共同培养3d后测试.在T细胞与PC84045癌细胞之比为8:1时,对PC84045肺癌细胞净化效率为4Logs,16;1时为5Logs,并在NC裸鼠体内证实清除效果是确切的.净化后的骨髓CFU-GM、BFU-E收获率均>85%(P>0.05;P>0.05);而且净化后的骨髓中的T细胞仍保持着对PC84045肺癌细胞很强的杀伤能力(P<0.01).双特异抗体CD3-ALTO4能有效地导向骨髓中活化T细胞清除污染的肿瘤细胞,造血干细胞无明显损伤.本文方法处理的骨髓细胞还保持着高度特异的细胞毒活性,移植这样的骨髓细胞将会在体内进一步清除化疗残存的肿瘤细胞,加速移植后免疫功能再建,降低复发.     

胃癌相关寡糖蛋白纯化及对正常人NK和LAK细胞活性的影响

本文采用一种植物血凝素-PHA亲和层析法从胃癌组织中提取胃癌相关寡糖蛋白,SDS-PAGE示纯化后胃癌相关寡糖蛋白以分子量40-45KD的成份含量最高;ELISA结合抑制法检测59例胃癌患者及33例良性消化道疾病患者血清,发现胃癌患者血清中胃癌相关寡糖蛋白表达水平明显增高,阳性率达71.2%,探索其对细胞免疫功能影响时,显示胃癌相关寡糖蛋白对正常人NK细胞及LAK细胞活性呈现显著的抑制作用,在1.0μg/ml浓度下,抑制率分别为40.84±6.21%和35.47±4.21%,推测在胃癌患者血清中升高的胃癌相关寡糖蛋白可能是一种使机体细胞免疫功能受损的免疲抑制因子。