鲎抗菌肽对隐球菌、枯草杆菌、变形杆菌的抑菌作用

目的:利用鲎试剂生产废料中提取的鲎抗菌肽,了解鲎抗菌肽对隐球菌、枯草杆菌、变形杆菌的抑菌作用。方法:采用酸处理法和SephdexG-50凝胶层析法从鲎试剂生产废料中提纯鲎抗菌肽,然后把鲎抗菌肽加入菌液培养,24 h后观察结果。结果:鲎抗菌肽对隐球菌,枯草杆菌具有一定的抗菌作用,对变形杆菌无效。24 h隐球菌,枯草杆菌的最小抑制浓度分别为2.28μL/mL和45μL/mL。结论:说明鲎抗菌肽具有一定的抗菌作用,可作为新一代的抗菌药物的开发研究。     

鲎素激活FAS途径促使HL-60细胞凋亡的实验研究

目的 鲎素是来源鲎血细胞的一种抗菌肽,它能抑制HL-60细胞生长,诱导细胞凋亡.但是鲎素诱导细胞凋亡的确切机制尚未清晰.本研究探讨鲎素是否可以促进Fas/FasL的表达,诱导HL-60细胞凋亡,揭示鲎素诱导HL-60细胞凋亡的可能机制.方法 Hoechst 33258和PI双荧光染色观察细胞调亡,流式细胞仪检测细胞调亡.Western blotting检测easpase-3,caspase-8活性变化,Fas,FasL,FADD表达变化.结果 鲎素处理HL-60细胞后,细胞调亡,caspase-3,caspase-8被激活,Fas,FasL,FADD表述时间依赖性上调.结论 鲎素诱导HL-60细胞凋亡可能与死亡受体介导的途径相关.     

建立稳定抑制死亡相关蛋白激酶表达的细胞系

目的筛选稳定抑制DAPK表达的PC12细胞系,并观察这些细胞系的生长特性。方法设计、合成4条RNA干扰序列,连接到pDsRed1-N1-U6质粒载体上,扩增后提取质粒转染到PC12细胞,并同时转染1株空载质粒作为对照,然后通过G418筛选细胞克隆,建立稳定增殖细胞系,再通过Western blot筛选最为有效的干扰序列,最后用MTT、流式细胞术等检测转染细胞系的生长特性。结果4条干扰序列均已成功转染并筛选出单克隆细胞系,Western blot实验结果证实,4条干扰序列中有3条对DAPK的表达有明显的抑制作用,其中以第2条干扰序列的抑制效果最为明显。结论成功建立稳定增殖和抑制DAPK表达的细胞系。     

利用CRISPR/Cas9系统构建SIRT1基因敲除的K562细胞株

目的 构建去乙酰化酶SIRT1基因敲除的K562单克隆细胞株,研究SIRT1基因对细胞增殖的影响。方法设计靶向SIRT1酶活性中的sgRNA编码序列,构建CRISPR/Cas9载体并转染K562细胞,嘌呤霉素筛选后单克隆化并扩增;采用基因组测序、PCR和免疫印迹的方法进行基因敲除效果鉴定;对选定的SIRT1基因敲除的单克隆做生长曲线检测。结果 目标质粒测序符合,质粒转染细胞后检测到基因组靶序列位置杂合峰,获得SIRT1基因敲除的单克隆3个,SIRT1基因敲除导致细胞增殖明显减缓。结论 成功构建了SIRT1基因敲除的细胞株,该细胞可作为血液系统疾病研究的有力工具。     

两种药物治疗室性心律失常102例疗效观察

目的 比较胺碘酮与慢心律治疗室性心律失常的临床疗效.方法 将102例室性心律失常患者随机分为治疗组52例和对照组50例.治疗组给予胺碘酮600mg/d治疗,7d后改400mg/d再治疗7d,其后200mg/d,疗程16周;对照组给予慢心律300mg/d,治疗4周后改150mg/d,疗程16周,疗程结束后比较两组临床疗效、毒副作用.结果 胺碘酮治疗室性心律失常有效率高达96.2%,对照组为84%,两组均未见明显毒副作用;两组临床疗效比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 胺碘酮治疗室性心律失常安全有效,疗效优于慢心律.     

应用基因芯片技术筛选曲古菌素A诱导肺腺癌耐药细胞株A549/CDDP差异表达的凋亡基因

目的 应用基因芯片技术筛选曲古菌素A(TSA)处理顺铂耐药肺癌细胞株A549/CDDP后的凋亡相关基因的表达变化,筛选TSA治疗顺铂耐药肺癌的靶分子.方法 TSA处理A549/CDDP细胞24h,以未经TSA处理的A549/CDDP细胞作为对照组,提取两组细胞总RNA并反转录为cDNA,采用NimbleGen全基因组表达芯片检测基因表达情况,以NimbleScan 2.5软件结合GO分析比较TSA处理组与对照组基因表达谱的变化,从差异表达基因中筛选出与凋亡和增殖相关的基因.结果 与对照组相比,共筛选到TSA上调的凋亡相关基因85个以及下调的细胞增殖和生长相关基因43个.GO分析发现,这些基因的分子功能主要是调节细胞凋亡和细胞对化学刺激的抵抗作用,以及参与细胞生长、增殖、细胞生物质量维持等生物过程.TSA不仅激活了线粒体凋亡通路,而且激活了死亡受体相关凋亡通路,下调了与细胞耐药相关的基因BAG3和ABCC2.结论 TSA改变了A549/CDDP细胞中凋亡和增殖基因的表达,这些基因可能在TSA治疗顺铂耐药肺癌中发挥了重要作用.     

鲎素抑制多药耐药细胞HL-60/VCR生长的研究

目的：探讨鲎血细胞来源的多肽鲎素是否能够抑制白血病多药耐药细胞HL-60／VCR细胞的生长。方法：HL-60细胞采用持续低浓度和逐渐增加长春新碱（VCR）浓度间歇诱导，建立多药耐药细胞HL-60／VCR；MTT法检测细胞耐药性及鲎素对HL-60／VCR细胞和HL-60细胞生长的影响；流式细胞仪检测HL-60／VCR细胞P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gP）和多药耐药相关蛋白（multidrugresistance-associatedprotein，MRP）的表达水平。结果：HL~0／VCR细胞对多种化疗药物产生耐药；HL-60／VCR细胞表面P-gP、MRP表达上调，分别为78．3％和58．3％（P〈0．01）。鲎素无论对HL-60／VCR细胞还是对HL-60细胞均有抑制作用，作用呈剂量依赖性。HL-60／VCR细胞和HL-60细胞对鲎素具有相似的敏感性。鲎素能增强HL-60／VCR细胞对VCR的敏感性，但不影响HL-60／VCR细胞表达P-gP和MRP。结论：鲎素具有抗HL-60／VCR细胞耐药性并增加其对VCR敏感性的作用。