人肝癌胰岛素样生长因子Ⅱ基因P2,P4启动子克隆及序列分析

目的克隆人胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)基因P2,P4启动子并进行序列分析,以明确肝癌组织中IGF-Ⅱ启动子碱基序列有无改变及其与转录调控的关系,为后续研究奠定基础。方法根据GenBank数据库提供的IGF-Ⅱ基因全序列及有关文献,应用巢式PCR扩增L-02人胎肝细胞系(正常对照)及8例肝癌组织的IGF-ⅡP2,P4启动子,并采用TOPO TA Cloning kit将PCR产物克隆入pCR2.1-TOPO T载体。目的DNA片段和阳性重组子分别通过琼脂糖凝胶电泳及直接测序鉴定。结果①L-02细胞及8例肝癌组织P2,P4启动子均扩增成功,长度分别为684 bp及1 246 bp;②8例肝癌组织P2,P4启动子碱基序列与L-02相应的DNA序列完全相同,未见突变、缺失等改变,经与GenBank数据库比较,结果完全一致。结论①成功克隆了IGF-ⅡP2,P4启动子;②本组肝癌组织中IGF-ⅡP2,P4启动子序列稳定,未见突变、缺失等改变,可能与IGF-Ⅱ异常表达的转录调控机制无关。     

幽门螺杆菌CagA及VacA基因的研究进展

幽门螺杆菌（Ｈｐ）为革兰染色阴性菌,定植于胃粘膜表面,如果不给予治疗,Ｈｐ感染可持续数十年甚至终生［１,２］．Ｈｐ感染是引起慢性胃炎、十二指肠溃疡和胃溃疡的主要病因,并且是胃癌和胃淋巴瘤发生的一个主要危险因素．然而,感染了Ｈｐ的人群中大约只有１５％的人发生这些疾病,造成上述不同结果的机制尚不十分清楚［３］．感染了Ｈｐ人群的发病,除了与宿主基因易感性和环境因素有关外,还与所感染Ｈｐ菌株的毒力有关［４］．近年随着分子生物学研究技术的发展,发现Ｈｐ菌株在基因水平存在差异．Ｈｐ的某些菌株具有细胞毒素相关…     

临床医学硕士专业学位研究生临床前强化培训的实践与效果

目的　改进研究生的教学方法,为向各教学医院推广临床医学硕士专业学位研究生临床前强化培训方式提供理论依据。方法　将2012级90名临床医学硕士专业学位研究生按专业分为四组,同期进行54学时的临床前强化培训。培训内容包括医患沟通及病史采集、体格检查、病历书写及理论知识4个模块,由具有主治医师以上职称的教师主讲。在实施强化培训前后,由固定的教学专职人员对研究生各项技能与知识进行考核;相关数据将分别行配对t检验、方差分析及非参数检验。结果　各组学生医患沟通及病史采集、全身体格检查、完整病历书写及理论知识考核成绩在培训后均有所提高（P＜0.05）,其中医患沟通及病史采集的培训效果最显著。不同组别研究生的医患沟通及病史采集成绩差异有统计学意义（P＝0.001）。结论　集中进行临床前强化培训,能够使学生更好、更规范地掌握临床基本技能,相应培训方法在各附属医院可尝试推广。     

无症状巨大胰腺假性囊肿1例

患者,男性,50岁,教师.因发现左中上腹包块1个月余于2008年7月9 日收住我院.入院前一月余,患者自触及左上腹一包块(大小具体不详),无触痛,较固定,未予重视,后包块逐渐增大.患者无发热,无腹痛、腹泻、恶心、呕吐、黑便,无尿黄,体重无明显变化.既往史:1993年患急性单纯性胰腺炎,予抗炎、抑酸、补液治疗后好转出院.     

P3启动子调控融合基因质粒构建及在肝癌细胞中表达(英文)

目的：构建人胰岛素样生长因子Ⅱ基因（IGF-Ⅱ）P3启动子驱动单纯疱疹病毒胸苷激酶（tk）与增强型绿色荧光蛋白（EGFP）融合基因穿梭质粒，观察其在肝癌细胞系HepG2及宫颈癌细胞系HeLa细胞中的表达及其作用。方法：应用基因重组技术，构建IGF-Ⅱ P3启动子驱动EGFP与tk融合表达穿梭质粒载体，脂质体转染技术将其转入HepG2及HeLa中，48 h后荧光显微镜下观察荧光表达,RT-PCR法检测tk和EGFP mRNA表达，四甲基偶氮唑蓝（MTT）实验检测转染融合蛋白载体后给予不同浓度的GCV对HepG2及HeLa细胞毒作用。结果:酶切鉴定和测序分析证实重组质粒构建成功；转染此穿梭质粒的细胞中仅有HepG2细胞检测到绿色荧光；RT-PCR检测到tk和EGFP的mRNA仅在HepG2细胞中表达；GCV对转染了携此质粒载体的HepG2细胞有选择性细胞毒作用。结论:成功构建IGF-Ⅱ P3启动子驱动携带tk与EGFP融合基因穿梭质粒载体，转染后对人肝癌细胞系HepG2有选择性杀伤作用，为进一步靶向性肝癌腺病毒基因治疗奠定了基础。     

抗肝癌单链抗体二聚体的制备及其对肝癌细胞株增殖的影响

目的:探讨特异性抗肝癌单链抗体二聚体在毕赤酵母中高效表达、纯化和鉴定其生物学活性的方法,并观察其对肝癌细胞增殖的影响.方法:构建酵母表达我体pGAPZαA-BDM,转化感受态大肠埃希菌DH5a,选择测序正确的阳性克隆进行扩增后,电转化酵母细胞,表达抗体二聚体,对表达抗体进行纯化、二聚体相对分子质量及形成比例和浓度检测,鉴定其对肝癌细胞的结合活性,免疫组化检测二聚体对肝癌组织抗原的特异性,MTT法观察二聚体抗体对肝癌细胞株增殖的影响.结果:测序及SDS-PAGE显示,成功构建及在酵母中表达抗体二聚体BDM,纯化后的抗体经凝肢过滤色谱检测,二聚体的相对分子质量为62×103,二聚体形成比例为92%;表达量为30 mg/L菌液.BDM与3株肝癌细胞结合效价为1:128,高于其亲本单链抗体.免疫组化显示,BDM与肝癌、肝硬化、胃癌、肠癌及正常肝组织反应的阳性率分别为40.0%、11.0%、6.7%、5.0%和0,P值均<0.05;MTT显示,二聚抗体BDM显示较好的抑瘤性,对肝癌细胞株的抑制率为30%,且有浓度依赖性.结论:成功制备高表达量、高特异性、较好的活性及较高稳定性的抗肝癌单链抗体二聚体BDM,其对肝癌细胞株的增殖有明显抑制作用,为后续将该抗体用于肝癌的放射免疫诊断和靶向治疗研究奠定了基础.     

原发性腹主动脉瘤十二指肠瘘1例

腹主动脉瘤消化道瘘是腹主动脉瘤少见但极为严重的并发症,是消化道出血的少见病因。本文报道1例原发性腹主动脉
瘤十二指肠瘘患者,以腹痛、便血、呕血为主要症状,经电子结肠镜、腹部增强CT及血管三维重建等检查确诊,及时行手术等治
疗,病人痊愈。