肝豆灵片对Wilson病模型TX小鼠血管损伤因子及ICAM-1、VCAM-1表达的影响

目的探讨肝豆灵片(GDL)对Wilson病模型TX小鼠血管损伤因子、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)及血管细胞黏附分子(VCAM-1)表达的影响。方法将40只TX小鼠采用随机数字表法分为模型组,GDL高、中、低剂量组,青霉胺组,每组8只。另选取8只正常的DL小鼠作为对照组。对照组及模型组小鼠灌胃生理盐水,肝豆灵各剂量组及青霉胺组灌胃对应剂量肝豆灵及青霉胺。各组均连续灌胃4周。ELISA法检测血浆同型半胱氨酸(Hcy)、血管假血友病因子(vWF)、血栓调节蛋白(TM)、血管内皮细胞蛋白C受体(EPCR),HE染色、透射电镜观察大脑中动脉区域脑组织中内皮血管形态学变化,免疫组织化学观察大脑中动脉区域脑组织中内皮血管ICAM-1、VCAM-1表达变化。结果与对照组比较,模型组Hcy、vWF、TM、EPCR水平升高(P<0.01),ICAM-1、VCAM-1表达明显增高(P<0.01)。与模型组比较,青霉胺组Hcy、vWF、TM、EPCR水平变化差异无统计学意义(P>0.05),GDL高、中剂量组Hcy、vWF、TM、EPCR数值降低(P<0.05,P<0.01),GDL低剂量组Hcy水平下降(P<0.01);同时GDL高、中、低剂量组和青霉胺组ICAM-1、VCAM-1表达减少(P<0.05,P<0.01)。与青霉胺组比较,GDL高、中剂量组Hcy、TM、EPCR数值降低(P<0.01,P<0.05),GDL高剂量组vWF水平下降(P<0.05);同时GDL高、中量组ICAM-1、VCAM-1表达减少(P<0.05,P<0.01)。与对照组比较,模型组小鼠存在血管损伤变化,各用药组血管损伤较模型组轻。结论 WD动物模型TX小鼠存在血管损伤,肝豆灵具有一定的血管保护作用,可以减轻血管内皮损伤。     

针刺治疗急性期无先兆偏头痛的临床疗效

目的观察针刺对急性期无先兆偏头痛病人视觉模拟评分(VAS)、血清降钙素基因相关肽(CGRP)、P物质(SP)的影响。方法将60例急性期无先兆偏头痛病人随机分为治疗组与对照组,各30例,通过双模拟研究技术,治疗组给予针刺百会、神庭、双侧风池、太阳、率谷、头维和口服布洛芬安慰剂治疗;对照组给予口服布洛芬片和针刺非经非穴治疗。比较两组治疗前、治疗后20 min、治疗后40 min、治疗后1 h、治疗后2 h VAS评分及血清CGRP、SP水平变化。结果与治疗前比较,两组治疗后各时间VAS评分较治疗前均下降;治疗后20 min、治疗后40 min,治疗组VAS评分低于对照组(P<0.01);治疗后1 h、治疗后2 h,两组VAS评分比较,差异无统计学意义(P>0.05);组别与时间因素存在交互作用(P<0.01)。治疗后,两组血清CGRP、SP水平较治疗前均下降(P<0.05),且治疗组低于对照组(P<0.01)。治疗后20 min、治疗后40 min,治疗组有效率均高于对照组(P<0.01)。结论干预因素、时间和两者的交互作用下,针刺治疗急性期无先兆偏头痛可快速起效,疗效好,病人血清CGRP和SP水平降低提示针刺可减少三叉神经节中神经肽释放,调控神经源性炎症,抑制痛觉传导通路激活,从而起到抗偏头痛作用。     

肝豆扶木汤对CuCl2诱导的HepG2细胞氧化损伤的保护作用和机制

目的 基于磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路探讨肝豆扶木汤（GDFMD）对氯化铜（CuCl₂）诱导的人肝癌细胞（HepG2）氧化损伤的保护作用。方法 HepG2细胞分为空白组,模型组,GDFMD组,PI3K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235（10 nmol·L^-1）组,GDFMD+NVP-BEZ235（10 nmol·L^-1）组。采用200 μmol·L^-1 CuCl₂构建模型组铜负荷HepG2细胞,酶联免疫吸附测定法（ELISA）观察细胞超氧化物歧化酶（SOD）,谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性和丙二醛（MDA）含量;免疫荧光观察细胞微管相关蛋白1轻链3（LC3）蛋白表达水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞磷酸化PI3K（p-PI3K）/PI3K,磷酸化Akt（p-Akt）/Akt,磷酸化mTOR（p-mTOR）/mTOR,Beclin-1,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ,p62表达;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测细胞PI3K,Akt,mTOR,Beclin-1,LC3Ⅰ,LC3Ⅱ,p62 mRNA表达。结果 与空白组比较,模型组细胞SOD,GSH-Px活性下降,MDA含量显著升高（P<0.01）;与模型组比较,10% GDFMD含药血清组SOD,GSH-Px活性升高,MDA含量下降（P<0.05,P<0.01）;NVP-BEZ235组GSH-Px活性下降,MDA含量升高（P<0.05）。与空白组比较,模型组p-PI3K/PI3K,p-Akt/Akt,p-mTOR/mTOR,p62表达水平显著降低,Beclin-1,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达水平显著升高（P<0.01）;与模型组比较,10% GDFMD组p-PI3K/PI3K,p-Akt/Akt,p-mTOR/mTOR,p62表达水平升高,Beclin-1,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达水平下降（P<0.05,P<0.01）;NVP-BEZ235组p-PI3K/PI3K,p-mTOR/mTOR表达水平下调,Beclin-1,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达水平升高（P<0.05,P<0.01）。与10% GDFMD组比较,10% GDFMD+NVP-BEZ235组p-Akt/Akt,p-mTOR/mTOR表达水平下降,Beclin-1,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达水平升高（P<0.05,P<0.01）。与空白组比较,模型组LC3Ⅱ蛋白表达显著升高（P<0.01）;与模型组比较,10% GDFMD组LC3Ⅱ蛋白表达降低,与10% GDFMD组比较,10% GDFMD+NVP-BEZ235组LC3Ⅱ蛋白表达升高。各组PI3K,Akt,mTOR mRNA相对表达量差异无统计学意义,与空白组比较,模型组p62 mRNA相对表达量显著降低,Beclin-1,LC3Ⅰ,LC3Ⅱ mRNA相对表达量显著升高（P<0.01）;与模型组比较,10% GDFMD组p62 mRNA相对表达量升高,Beclin-1,LC3Ⅰ,LC3Ⅱ mRNA表达水平下调（P<0.01）;NVP-BEZ235组Beclin-1 mRNA相对表达量升高（P<0.05）。与10% GDFMD组比较,10%GDFMD+NVP-BEZ235组Beclin-1,LC3Ⅱ mRNA相对表达量升高（P<0.01）。结论 GDFMD能抑制CuCl₂诱导的HepG2细胞过度自噬,减轻细胞氧化损伤,其机制可能与激活PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。     

肝豆状核变性中西医研究进展

肝豆状核变性（WD）是由于ATP7B基因突变导致的铜代谢障碍性疾病，临床表型丰富多样，发病机制异常复杂，属于少数经过积极规范治疗可以取得较好临床疗效的罕见病。目前国内有关本病的系统性综述较少，笔者通过查阅与WD相关国内外文献，从中医学和西医学两个层面对WD的发病机制和治疗方法进行总结归纳。总得来看，西医认为ATP7B基因突变是本病发生的根本原因，ATP7B基因突变可影响机体铜转运功能，造成铜代谢障碍，过量铜沉积于机体内，促使氧化应激发生、导致线粒体功能缺陷、引起细胞死亡等等。目前WD常用的西医治疗方法仍以药物为主，驱铜药物是临床首选，常联合保肝及抗氧化治疗，手术治疗是慢性肝病终末期WD患者常用的方式，而基因治疗为WD患者提供了可能的潜在选择。而中医则认为，先天禀赋不足，铜毒蓄积是本病根本病因，湿热内蕴、痰瘀互结为主要病机，在疾病的不同阶段，病机有所不同，临证当予以明辨。目前中医药治疗主要以滋补肝肾、温补脾肾治其本，清热利湿、化痰祛瘀、疏肝理气治其标，标本同治，方为根本。在辨证论治的基础上，形成了治疗WD的专病专方，如肝豆灵、肝豆汤、肝豆扶木汤，在临床得到了广泛的运用。中、西医各有优势，又各有不足，中西医并重，优势互补，强强结合。因此，中西医结合的WD治疗方案被逐渐推广和应用，展现出巨大的治疗潜力。该文通过对WD的中西医病因病机及治疗进行归纳梳理，以期为该病的临床诊治提供参考。