肠出血性大肠杆菌O157∶H7疫苗研究进展

肠出血性大肠杆菌(EnterohemorrhagicEscherichia co-li,EHEC)是出血性肠炎的主要病原体,其主要血清型是O157∶H7。该菌被确认为致病菌的20多年来世界各地包括中国都有不同规模的暴发流行。EHEC O157∶H7感染可使人患腹泻、出血性结肠炎(hemorrhagic colitis,HC),还可在5%~10%的病例中引发溶血性尿毒综合征(hemolyticuremic syndrome,HUS)及血栓性血小板减少紫癜(throm-botic thrombocytopenic purpura,TTP)等严重并发症,严重者可导致死亡。EHEC O157∶H7的感染因具有暴发流行趋势、强烈的致病性与致死性以及抗生素治疗可能会加…     

肠出血性大肠杆菌O157∶H7紧密黏附素免疫保护性片段的基因克隆与表达

目的　克隆表达肠出血性大肠杆菌 (EHEC)O1 5 7∶H7紧密黏附素 (intimin)免疫保护性片段 (intiminC30 0 )。方法　设计引物采用PCR法自EHECO1 5 7∶H7基因组扩增紧密黏附素及其免疫保护性片段的编码基因eae与eaeC30 0 ,T A克隆后构建原核表达质粒pET 2 8a(+) eae及pET 2 8a(+) eaeC30 0 ,经测序鉴定后转化E .coliBL2 1 (DE3) ,IPTG诱导表达 ,PAGE检测。结果　PCR法自EHECO1 5 7∶H7基因组扩增出了约 2 80 0bp和 90 0bp的目的片段 ;原核表达质粒pET 2 8a(+) eae及pET 2 8a(+) eaeC30 0经酶切及测序鉴定与预期序列一致。转化E .coliBL2 1 (DE3)后IPTG诱导目的蛋白表达率约 2 5 %和 30 %;PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量 (Mr)约 96× 1 0 3和 35× 1 0 3,破菌后电泳证实目的蛋白均以包涵体形式表达。结论　EHECO1 5 7∶H7紧密黏附素免疫保护性片段经基因克隆后获得了较高的表达量 ,为进一步的生物学性质及免疫学特性研究奠定了基础。     

新型免疫调节肽佐剂CEL-1000

CEL-1000是一种新型的免疫调节肽，它在抗疟疾、人类免疫缺陷病毒（HIV）、单纯疱疹病毒（HSV）感染和肿瘤疫苗的研制方面具有潜在的佐剂活性，能促进1型辅助性T淋巴细胞（Th1）型免疫应答。     

肠出血性大肠杆菌O157：H7的分子生物学检测方法研究进展

肠出血性大肠杆菌O157：H7是一种新型人类病原菌，由它引起的感染严重威胁着人类健康和生命。对其进行分子流行病学调查，可为该病的预防、诊断和治疗提供有力的依据和参考。现就目前常用的几种大肠杆菌O157：H7的分子生物学检测技术作一简介。     

幽门螺杆菌粘附素基因hpaA研究

目的 克隆表达幽门螺杆菌鞭毛粘附素基因hpaA,筛选Hp疫苗有效抗原成分。方法采用PCR技术从幽门螺杆菌基因组中扩增hpaA基因,克隆至表达载体pET-28a(+)中,IPTG诱导表达重组蛋白HpaA(rHpaA),鉴定rHpaA蛋白的表达形式。结果 pPHA重组菌以包涵体形式表达rH-paA,表达量约占全菌的35％。纯化后的rHpaA免疫家兔获得了高效价的兔抗HpaA抗血清,且该抗血清能够与不同Hp菌株中相应分子量条带发生抗原抗体反应,并能在一定程度上抑制由Hp引起的RBC凝集现象。结论 Hp鞭毛粘附素HpaA在重组大肠杆菌中能够高效表达,且具有良好的免疫反应性。     

3种方法对鼻疽伯克霍尔德菌和类鼻疽伯克霍尔德菌的鉴定

目的 用3种检测方法对同源性较高的鼻疽伯克霍尔德菌和类鼻疽伯克霍尔德菌进行鉴定,比较该3种检测方法的鉴定效果.方法 分别利用基于MALDI-TOF-MS的蛋白指纹图谱方法、双重荧光定量PCR方法和16S rRNA基因序列分析方法对5株鼻疽伯克霍尔德菌和5株类鼻疽伯克霍尔德菌进行鉴定,综合判断鉴定结果,并与传统的形态学和生化鉴定结果比较,寻找更适合于该两种菌的鉴定方法.结果 在10株受试菌株中,2株排除是鼻疽伯克霍尔德菌和类鼻疽伯克霍尔德菌的可能,剩余8株之中,MALDI-TOF-MS方法正确鉴定了6株,双重荧光定量PCR方法正确鉴定了8株,16SrRNA基因序列分析方法正确鉴定4株.结论 MALDI-TOF-MS的蛋白指纹图谱方法和双重荧光定量PCR方法对鼻疽伯克霍尔德菌和类鼻疽伯克霍尔德菌具有很好的鉴定能力,16S rRNA基因序列分析方法不适合用于该2种菌的鉴定.     

BALB/c小鼠口服重组幽门螺杆菌热休克蛋白A疫苗的免疫应答

目的评价重组热休克蛋白A(rHspA)作为幽门螺杆菌(Hp)口服疫苗成分的效果.方法采用重组Hp保护性抗原HspA与粘膜免疫佐剂(霍乱毒素,CT;大肠不耐热肠毒素B亚单位,LTB)共口服免疫BALB/c小鼠,ELISA分析小鼠血清、胃肠粘液中IgA、IgA抗体水平,体外培养脾淋巴细胞在Hp刺激下的增殖情况以及IL4、IFN-γ的变化.结果单纯口服rHspA组产生的抗体水平与对照组(PBS)相差不显著,而rHspA 佐剂组与对照组相差非常显著.rHspA 佐剂组小鼠脾淋巴细胞体外培养,在Hp抗原刺激作用下出现明显的增殖反应;不加佐剂免疫组分泌IFN-γ水平增加,IL-4水平未发现增加;而加佐剂免疫组除IFN-γ水平增加外,IL-4水平也发现显著增加.结论BALB/c小鼠口服rHspA和CT以及LTB混合制剂能有效激发机体产生全身和局部特异性的体液免疫应答和细胞免疫应答.     

结核分枝杆菌Rv0341蛋白编码基因iniB的多态性分析

目的研究结核分枝杆菌假设蛋白Rv0341编码基因iniB的多态性,确认其保守性,分析依赖利福平结核分枝杆菌(依R菌)在利福平(R)培养管中Rv0341高表达的可能原因。方法用大肠埃希菌做为阴性对照,提取依R菌(14株)、耐R菌(23株)、R敏感的结核分枝杆菌(12株)、结核分枝杆菌标准株H37Rv及BCG(共51株)的细菌基因组DNA,利用PCR自基因组DNA中扩增iniB基因,通过ApaⅠ/EcoRⅤ、KpnⅠ/SmaⅠ双酶切,琼脂糖凝胶电泳检测其带型,对iniB基因进行限制性片段长度多态性分析并测序。结果实验组中iniB基因的酶切图谱完全相同,测序结果亦证实iniB基因无突变。结论 iniB基因在对R依赖、耐药和敏感等不同类型的结核分枝杆菌中是相对保守的;依R菌在Rv0341蛋白表达方面的差异可能是RNA转录差异或利福平诱导的结果。     

类鼻疽伯克霍尔德菌胞内运动相关蛋白BimA的生物学特性研究进展

类鼻疽伯克霍尔德菌是一种热带医学病原体,现被美国CDC提升为I类致病菌严加防范.类鼻疽伯克霍尔德菌所导致的疾病称为类鼻疽,致死率和复发率都很高,广泛流行于东南亚及我国南海周边地区,已成为严峻的公共卫生问题.作为一种兼性胞内菌,类鼻疽伯克霍尔德菌的胞内运动能力为其逃逸机体免疫和细胞间的扩散提供了重要基础.胞内动力相关蛋白A(BimA)是一种类鼻疽菌自分泌的,与其胞内运动相关的关键分子,它通过操控肌动蛋白实现干预细菌的胞内运动,在类鼻疽菌的感染和致病中发挥着重要作用.全面,深入地了解BimA在类鼻疽菌感染中的作用机制对寻找有效预防和控制该病原的传播等方面具有重要意义.本文即综述了BimA蛋白的生物学特性分析,结合研究报道探讨其主导细菌胞内运动,干扰宿主胞内免疫,实现细菌胞间传播的机制及意义.     

抗Stx2B单链抗体基因的构建及在大肠杆菌中的分泌表达

目的 构建重组志贺样毒素亚Ⅱ结合亚单位（Stx2B）单链抗体基因,并在大肠杆菌中进行分泌表达。方法借助连接肽（Gly4Ser）3将已成功扩增的抗Stx2B单抗1A5轻、重链可变区基因（VL、VH）连接成单链抗体（ScFv）基因VH-Linker-VL,并在VH5’端和VL3’端引入SfiⅠ和Not Ⅰ酶切位点,克隆至经改造的分泌性表达载体pCANTAB6His之中,转化EcoliHB2151,IPTG诱导表达。亲和层析纯化抗体蛋白后,以SDS-PAGE、ELISA等方法分析鉴定表达产物。结果经限制性酶切鉴定及DNA测序分析,证实基因构建正确。SDS-PAGE、ELISA分析表明ScFv基因在大肠杆菌中成功表达,表达产物的相对分子质量（Mr）为27000,与理论预期值相符,且可与相应抗原特异结合。结论成功实现了抗Stx2B单链抗体的原核分泌表达,为探讨O157菌的感染机制及防治研究奠定了基础。