人幽门螺杆菌尿素酶抗体诊断试剂盒的研制

幽门螺杆菌 (Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ,Ｈ .ｐｙｌｏｒｉ)为慢性胃炎、消化性胃溃疡的致病菌 ,并且与胃癌的发生密切相关 ,世界卫生组织 (ＷＨＯ)将其列为一级致癌因子 ,早期诊断Ｈ .ｐｙｌｏｒｉ感染并对其治疗和预后的观察具有重要意义。目前 ,临床上用于诊断Ｈ .ｐｙｌｏｒｉ感染的方法主要有胃镜下组织活检、细菌培养、13 Ｃ呼气试验等 ,前者需活检组织 ,病人痛苦大 ,且阳性率低 ,后者需特殊性设备 ,不易推广 ,细菌培养则阳性检出率低 ,而血清学诊断具有灵敏、快速、准确、简便、费用低等优点 ,易在临床上广泛使用。但是 ,…     

EHECO157∶H7志贺样毒素Ⅱ结合亚单位Stx2B的基因克隆、表达与纯化

目的克隆表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7志贺样毒素B亚单位(Shiga liketoxin2B,Stx2B),并对其初步纯化。方法设计引物采用PCR法自EHEC O157∶H7基因组扩增志贺样毒素B亚单位的编码基因stx2b,T-A克隆后构建原核表达质粒pET-22b(+)-stx2b,经测序鉴定后转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,以Tricine-PAGE和Western blot分析目的蛋白的表达,并采用固相镍离子亲和层析纯化重组蛋白。结果扩增的stx2b基因约210bp;原核表达质粒pET-22b(+)-stx2b经酶切和测序鉴定与预期序列一致;并在E.coliBL21(DE3)中得到高效可溶性表达,蛋白表达率约30%;PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量(Mr)约7×103;经固相镍离子亲和层析纯化后,蛋白纯度可达90.1%。结论EHEC O157∶H7志贺样毒素B亚单位的高效表达与初步纯化,有利于进一步的生物学性质研究。     

幽门螺杆菌外膜蛋白18的克隆表达及纯化研究

目的克隆表达幽门螺杆菌（HP）外膜蛋白,为HP的疫苗开发及诊断试剂盒的研究奠定基础。方法用PCR方法从HP临床分离株9806的染色体DNA中扩增出OMP18基因片段,将目的基因插入表达载体pQE30中,重组载体pQE30-OMP18经DNA测序鉴定后,将重组质粒转化大肠杆菌E．coli．M15,IPTG诱导表达。采用镍离子亲和层析纯化蛋白,并用SDS-PAGE和Western blot分析鉴定其表达。结果PCR扩增出长度为537bp的OMP18基因,片段测序分析其与Gen—Bank公布的核苷酸序列相似性达99％;SDS—PAGE显示,重组工程菌经IPTG诱导表达了分子量为20．0kDa的目的蛋白,占总蛋白的20％,经纯化后,目的蛋白纯度达85％以上;Western blot结果表明,该蛋白可与兔抗HP的多克隆抗血清发生特异的抗原抗体结合反应。结论成功构建了OMP18表达载体pQE30-OMP18,并在大肠杆菌中获得高效表达,为HP疫苗有效抗原筛选及诊断试剂的开发奠定基础。     

肠出血性大肠杆菌O157:H7疫苗研究进展

肠出血性大肠杆菌（Enterohemorrhagic Escherichia coli．EHEC）是出血性肠炎的主要病原体．其主要血清型是O157：H7。该菌被确认为致病菌的20多年来世界各地包括中国都有不同规模的暴发流行。EHEC O157：H7感染可使人患腹泻、出血性结肠炎（hemorrhagic colitis，HC），还可在5％～10％的病例中引发溶血性尿毒综合征（hemolytic uremic syndrome，HUS）及血栓性血小板减少紫癜（thrombotic thrombocytopenic purpura，TTP）等严重并发症，严重者可导致死亡。     

肠出血性大肠杆菌O157：H7 TccP基因克隆、表达及其抗原性鉴定

目的克隆表达肠出血性大肠杆菌（EHEC）O157：H7Tir细胞骨架偶联蛋白（TeeP）基因，并研究其抗原性。方法采用PCR法自EHEC0157：H7Sakai菌株基因组扩增TeeP基因，构建TeeP原核表达载体并在大肠杆菌中诱导表达。表达产物经初步纯化后，免疫新西兰白兔，制备兔抗TeeP多克隆抗体。抗体效价及特异性用ELISA法和Westernblotting法进行测定和分析。结果从EHECO157：H7Sakai菌株中克隆出了1014bp的TeeP基因。构建的重组质粒pET28a-TccP在大肠杆菌中获得了高效表达；以TeeP免疫家兔获得了高效价多克隆抗体，Westernblotting分析此抗体能与TeeP发生特异性抗原抗体反应。结论在大肠杆菌中成功克隆表达了TeeP基因，所获TeeP具有良好的抗原性，为进一步研究TeeP在EHECO157：H7致病机制中的作用奠定基础。     

肠出血性大肠杆菌O157 EspA的研究进展

肠出血性大肠杆菌（Enterohemorrhagic Escherichia coli，EHEC）O157：H7曾多次在世界各地，特别是发达国家引起广泛的暴发流行。感染主要导致腹泻、出血性结肠炎（hemorrhagic colitis，HC），并经常伴发溶血性尿毒综合征（Hemolytic ruemic syndrome，HUS）、血栓形成的血小板减少性紫癜（thrombotic thrombocytopenic purpura，TTP）并发症，严重威胁着人类的生命健康。人类感染此菌的途径主要是食用或接触污染的牛肉、蔬菜、水果及水源等。目前，对O157：H7感染尚缺乏有效的防治方法，只能给予对症治疗和适当的抗菌治疗，但研究证明抗菌药物可促使O157：H7大肠杆菌释放Vero毒素，从而使患者并发溶血性尿毒综合征（HUS）的危险性增加。     

治疗性单克隆抗体研究进展及临床应用现状

19世纪末,动物来源的抗血清用于肺炎、白喉、麻疹等传染病的早期治疗,显示了一定效果,但毒副作用大,特别是异源蛋白易产生过敏反应.1975年杂交瘤技术问世,开创了抗体技术的新时代.单克隆抗体(以下称单抗)高度的特异性和均一性使其在实验研究和临床检测中得到了广泛应用.自1982年单抗首次应用于人体治疗以来,应用单抗治疗肿瘤、自身免疫疾病,组织器官移植排斥反应等疾病的报道渐多,同时鼠单抗用于人体的毒副作用也越来越明显,使单抗在人体治疗中的应用受到很大限制.随着分子生物学技术的发展,尤其是抗体库技术、鼠抗体人源化改造技术以及近年利用转基因技术研制完全人抗体的突破,为单抗进入临床治疗提供了良好的应用前景.本文就单克隆抗体人源化改造、抗体库技术、转基因小鼠技术研究进展及目前单抗在临床治疗中的应用现状予以综述.