大肠杆菌不耐热肠毒素的粘膜免疫机理

大肠杆菌不耐热肠毒素（ＬＴ）是由Ａ、Ｂ两种亚单位组成的ＡＢ５型蛋白，其中Ａ亚单位具有ＡＤＰ－核糖基化活性，Ｂ亚单位具有与肠粘膜上皮细胞膜上的神经节苷脂结合的作用。它能引起人和猪等动物的腹泻。另外，它还是强有力的粘膜免疫原和粘膜免疫佐剂。了解其粘膜免疫机理，对于发展ＥＴＥＣ菌苗和粘膜免疫佐剂具有重要意义。本文分别从ＬＴ的粘膜免疫原性和佐剂效应两方面对其粘膜免疫机理作一讨论。     

幽门螺杆菌适应性球形变异相关蛋白的筛选及鉴定

目的对幽门螺杆菌（Hp）在有氧胁迫条件下由螺旋体转变成球形体的适应性调节蛋白进行筛选及鉴定。方法运用双向电泳技术比较Hp螺旋体与球形体的全菌蛋白表达谱,差异蛋白进行胶内酶切,肽混合物使用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪（MALDI-TOF-MS）进行质谱分析,将肽质量指纹谱数据输入互联网上的蛋白质数据库进行检索。结果获得7个与Hp球形变异相关的适应性调节蛋白,即翻译延长因子Tu（EF-Tu）、丙酮酸-黄素蛋白氧化还原酶（POR）、黄素氧化还原蛋白（FldA）、尿素酶G（UreG）、热休克蛋白10（Hsp10）烷基化氢化氧化酶（Ahp）、超氧化物歧化酶（SOD）。结论共筛选出7个与Hp球形变异相关的适应性调节蛋白,对有氧胁迫下Hp球形体的形成机制研究和抗Hp药物靶位和疫苗候选靶位的筛选具有参考价值。     

有氧胁迫下幽门螺杆菌球形体形成的比较蛋白质组学研究

目的研究有氧胁迫下幽门螺杆菌（H．pylori）由螺旋体转变成球形体的适应性调节蛋白。方法运用双向电泳技术比较H.pylori螺旋体与球形体的全菌蛋白表达谱，差异蛋白进行胶内酶切，肽混合物使用基质辅助激光解吸／电离飞行时间质谱仪（MALDI—TOF—MS）进行质谱分析，将肽质量指纹谱数据输入互联网上的蛋白质数据库进行检索。结果获得6个与H．pylori球形体形成相关的适应性调节蛋白，即翻译延长因子Tu、丙酮酸-黄素蛋白氧化还原酶、黄素氧化还原蛋白、尿素酶G、烷基化氢化氧化酶、超氧化物歧化酶。结论上述蛋白的鉴定对深入研究有氧胁迫下H．pylori球形体的形成机制，筛选具有潜在价值的抗H．pylori药物靶位和疫苗候选表住具有参考价值。     

单纯疱疹病毒1型特异性表位的串联表达及免疫性质的研究

目的:串联重组表达单纯疱疹病毒1型(HSV-1)特异性表位,以获得具有抗原反应性能用于HSV-1鉴别诊断的抗原。方法:采用DNA重组技术将HSV-1特异性表位gG112-127进行串联,获得不同倍数重复串联的基因片段。将含有不同重复倍数的基因片段与表达载体连接,转化至宿主细胞JM109,异丙基-硫代-β-D-半乳糖苷诱导,SDS-PAGE分析其表达,W estern印迹分析其抗原反应性。结果:获得了4×、8×、16×、32×重复串联的阳性重组子。其中8×重组子在JM109细菌中得到了17.5%的表达,其表达产物主要以包涵体形式存在。W estern印迹显示此重组蛋白能与HSV-1抗血清发生抗原抗体反应,而不与HSV-2抗血清发生抗原抗体反应。结论:HSV-1-gG112-127重组蛋白可作为HSV-1特异性检测的抗原来鉴别诊断HSV-1和HSV-2的感染。     

大肠杆菌表达人幽门螺杆菌尿素酶B亚单位跨膜区成份

目的 重组表达人幽门螺杆菌尿素酶B亚单位跨膜区成份。方法 采用DNA重组技术将尿素酶B亚单位3’端732bp基因片段克隆至pET11C载体上，转化宿主菌BL21（DE3）E.coli,IPTG诱导，SDS-PAGE及Western-blot分析表达情况。结果 成功构建了含UreB0.7kb片段的重组质粒pET-UreB0.7，并表达了具有免疫反应性的分子量约28000u的重组蛋白，表达率为19.8%。结论 重组的尿素酶B亚单位跨膜区成份为研究其相关生物学特性奠定了重要基础。亦可作为Hp疫苗的成分用于Hp感染的预防和治疗。     

单克隆抗体技术的启发式教学

单克隆抗体技术为20世纪生物学研究的三大实验技术之一，极大地推动了生命科学的发展。但此技术操作一个流程需数月时间，不适于安排教学实习，一般仅限于理论讲授，这给学生掌握此技术带来了一定困难。作者通过以下教学方式的改进，使学生易于掌握，收到了一定的效果。     

肠出血性大肠杆菌O157:H7的分子生物学检测方法研究进展

肠出血性大肠杆菌O157:H7是一种新型人类病原菌,由它引起的感染严重威胁着人类健康和生命。对其进行分子流行病学调查,可为该病的预防、诊断和治疗提供有力的依据和参考。现就目前常用的几种大肠杆菌O157:H7的分子生物学检测技术作一简介。     

肠出血性大肠埃希菌O157∶H7黏附HeLa细胞模型的建立

目的建立肠出血性大肠埃希菌O157：H7体外黏附HeLa细胞模型，为进一步研究其致病机制奠定基础。方法以细菌黏附HeLa细胞数量为指标，分别评价细菌数量、细菌与细胞孵育时间对细菌黏附数量的影响，得到最佳条件，最后肌动蛋白荧光染色（FAS）试验鉴定模型。结果加入细菌为1×10^5CFU，细菌与细胞孵育4h时，黏附细胞的数量最佳，FAS检测发现该条件下细菌能够引起细胞特异性黏附、擦拭（attaching＆effacing，A／E）损伤，模型建立成功。结论成功建立O157：H7体外黏附HeLa细胞模型，为进一步研究其致病机制提供了条件。