S-1联合DDP腹腔恒温循环热灌注治疗胃癌合并腹水的临床疗效观察

目的：观察替吉奥（S-1）联合顺铂（DDP）腹腔循环热灌注化疗治疗胃癌合并腹水的临床疗效及不良反应。方法134例患者随机分为试验组（循环热灌注组,n＝67）和对照组（普通热灌注组, n＝67）。S-1均按体表面积给药,服药2周,停药1周,DDP腹腔给药,d190 mg,d860 mg。试验组经恒温循环热灌注仪给药,对照组加入预热的41～43℃0.9%生理盐水100 ml直接腹腔注入。21 d为1周期,2周期后参照 WHO 标准评价客观疗效及不良反应。结果实际可评价134例,试验组腹水有效控制率为67.16%（45/67）,对照组为47.76%（32/67）,差异有统计学意义（P＜0.05）。临床受益反应率为82.1%（55/67）,对照组临床受益率为67.2%（45/67）,差异有统计学意义（P＜0.05）。两组不良反应主要为白细胞减少、贫血、恶心、呕吐等,组间无统计学差异（P＞0.05）。结论与传统治疗方法相比,S-1联合DDP恒温循环热灌注治疗胃癌合并恶性腹水能取的更好的疗效且不增加毒副反应,值得进一步研究应用。     

中和性马抗体对SARS-CoV感染的防治作用

目的探讨马抗SARSCoV中和性抗体是否对SARSCoV感染有防治作用。方法用SARSCoV(BJ01株)免疫马匹,从免疫马血清中制备IgGs及其F(ab’)2片段。通过细胞病变法(CPE)、MTT法和空斑形成实验(PFU)等方法,在体外培养的VeroE6细胞中检测F(ab’)2片段对SARSCoV感染的预防性和治疗性作用。再在Balb/c小鼠体内模型中,用CPE法和定量RTPCR方法检测该抗体的保护性效应。结果CPE、MTT和PFU三种方法证实来自三匹马的血清F(ab’)2的中和滴度均达到1∶1600以上。体内实验证实,50μg的F(ab’)2片段可以完全中和1×104TCID50SARSCoV。结论马抗SARSCoV抗体在体内外均能有效地中和SARSCoV和预防其感染宿主细胞,为马抗体将来在大的灵长类动物或人体内进行实验提供实验依据。     

pE6/p53/GFP重组真核表达载体的构建及其对肺腺癌细胞周期的影响

目的构建放射诱导启动子序列所调控的wt-p53抑癌基因的真核表达载体pE6-p53／GFP,并研究其功能。方法全基因合成方法获得放射敏感性增强子E6;PCR法从pcDNA3．1（＋）／p53质粒中扩增p53 cDNA全长序列;双酶切IRES2-EGFP双顺反子表达载体,获得IRES2-EGFP报告基因片段,以pCI-neo为载体构建重组pE6／p53／GFP。重组体经双酶切、测序鉴定其正确性。采用脂质体法将重组质粒转染H1299（p53^-/-）细胞,G418筛选出稳定表达细胞株。RT-PCR分析基因整合;Western blot方法分析不同放射剂量后P53蛋白表达情况及持续时间;流式细胞技术分析E6对肺腺癌细胞周期的影响。结果正确构建pE6／p53／GFP重组质粒,并在被转染细胞核内检测到p53基因表达;4Gy照射12h后p53基因表达显著增强;放疗后转染组细胞发生显著G1期阻滞,克隆形成率下降。结论成功构建了放射反应元件E6控导的pE6／p53／GFP重组质粒。     

BTLA蛋白胞外区片段的制备及鉴定

目的克隆人的BTLA蛋白分子的基因胞外区片段(Extracellular region of BTLA，exBTLA)，并在Flp-In CHO系统表达、纯化，用于单克隆抗体的制备或直接进行功能研究。方法用RT-PCR方法制备exBTLA基因，以哺乳细胞高效表达质粒载体pSec／WG为载体构建重组融合exBTLA-Ig Fe／pSec／WG质粒。重组体经双酶切鉴定后，再通过测序鉴定克隆的正确性。采用脂质体法将重组质粒转染Flp-In CHO细胞，G蛋白亲和层析法纯化蛋白。用Western blotting检测BTLA基因胞外区表达的特异性。结果正确构建了exBTLA／pSec／WG重组质粒，并在转染细胞所分泌的上清液中检测出了蛋白片段的表达。利用亲和层析法成功纯化出特异的exBTLA蛋白。结论成功地构建了exBTLA／pSec／WG重组质粒，纯化出exBTLA蛋白，为下一步mAb制备及其功能研究提供实验依据。     

B/T淋巴细胞间抑制信号研究进展

B7-CD28家族共刺激信号分子在T淋巴细胞激活、抑制机体耐受及产生理想的T细胞免疫应答等方面起着关键作用。B7-CD28家族共信号分子已经被集中的研究,并且引起免疫调控领域充分的重视。CD80/CD86/CD28/CTLA-4经典途径的新功能的发现以及这一家族包括B7-H1/B7-DC/PD-1,B7-H2/ICOS,B7-H4和BTLA的新途径的确定,都拓宽了我们对T细胞介导的免疫应答和免疫耐受调控的理解。本文就CTLA-4、PD-1和BTLA对T细胞应答的负性调节以及在维持外周耐受中起作用的研究进展作一综述。     

胎儿窘迫危象120例相关危险因素分析

目的 分析胎儿窘迫危象的高危因素及妊娠结局.方法 回顾性分析120例胎儿窘迫危象患者的临床资料,统计分析相关高危因素,并观察患者妊娠结局.结果 120例患者中,羊水Ⅲ度污染构成比最高,为46.67％；其次为脐带异常和产程延长,分别为40.83％和25.83％;胎膜早破21例(17.50％),羊水过少29例(15.83％),孕妇贫血7例(14.17％),胎儿心率异常11例(9.17％)；其他系统疾病和胎盘异常较低,分别为8.33％和5.83％.经积极治疗,108例患者解除窘迫危象,至足月而终止妊娠,其中自然分娩51例,剖官产57例.12例未至足月者,1例胎儿死亡,11例胎儿经剖宫产终止妊娠.结论 胎儿窘迫危象的高危因素有羊水污染、脐带异常和产程延长等,应该采取积极的治疗改善患儿预后.     

舒尼替尼一线治疗转移性肾细胞癌临床疗效分析

目的:观察舒尼替尼一线治疗转移性肾细胞癌疗效及安全性。 方法:2010年4月-2012年4月我科收治转移性肾细胞癌患者31例,采用舒尼替尼行靶向治疗（50mg,pd,4/2方案）。服药期间进行不良事件管理及随访,每间隔2周期行疗效评价,随访截止至2013年8月,Kaplan-Meier分析总体生存期及无进展生存期。结果:随访8-35个月,平均22.3个月,可评价31例,PR 9例(29.0%),SD 14例(45.2%),PD 8例（25.8%）,疾病控制率为74.2%,客观反应率为29%。中位无进展生存期12个月（95%CI:9.2-14.8个月）,中位总生存期21个月(95%CI:17.9-24.1个月)。不良事件多为Ⅰ/Ⅱ级,Ⅲ/Ⅳ级少见,常见的为腹泻、乏力、高血压及造血系统毒性等。41.9%的患者需调整给药剂量或暂时停药,不良事件经管理后可缓解。结论:舒尼替尼治疗转移性肾细胞癌疗效好,安全性较高,是转移性肾细胞癌较好的治疗选择之一。     

PD-L1蛋白的表达、纯化与鉴定

目的克隆人PD-L1的基因,纯化Flp-In CHO系统表达PD-L1蛋白.方法用RT-PCR方法制备PD-L1基因,以哺乳细胞高效表达质粒载体pSec/WG为载体构建重组PD-L1/pSec/WG质粒,重组体用载体上的通用引物为测序引物,鉴定克隆的正确性.再将鉴定过的重组质粒用脂质体法转化转染Flp-In CHO细胞收集上清,G蛋白亲和层析法纯化蛋白.用免疫印迹法鉴定转化细胞所分泌上清的PD-L1基因的表达.结果正确构建了PD-L1/pSec/WG重组质粒,并且在转化细胞所分泌的上清中检测出了PD-L1基因的表达.亲和层析法成功纯化出PD-L1蛋白,分子量为40×10 3.结论成功地构建了PD-L1/pSec/WG重组质粒,纯化出PD-L1蛋白,可进行下一步mAb制备,进一步研究其功能.     

恒温循环热灌注化疗治疗恶性胸腔积液临床研究

 目的 观察恒温循环热灌注化疗对恶性胸腔积液的治疗效果、治疗后患者生活质量的改善及其不良反应.方法 将我科确诊恶性胸腔积液患者180例,随机分为治疗组(90例)和对照组(90例),治疗组行胸腔恒温循环热灌注化疗,对照组仅行胸腔热灌注化疗.两组均胸腔内注入顺铂(DDP),首剂90 mg,后每次60 mg,每周1次,共6次.结果 治疗组控制胸水有效率(CR+PR)为94.4%,对照组为64.4%,两组间比较差异有统计学意义(P<0.01).治疗组与对照组生活质量好转率分别为85.56%和62.22%( P<0.01).不良反应方面,消化道反应与血液学毒性,两组间差异均无统计学意义 (P=1.000).结论 采用胸腔恒温循环热灌注化疗方法治疗恶性胸腔积液疗效确切,安全性高,值得在临床广泛推广.     

放射敏感性启动子调控Apoptin基因表达对肺腺癌细胞的杀伤作用研究

目的构建放射敏感性启动子调控的凋亡素(Apoptin)基因的真核表达质粒pE6-Apoptin-EGFP,探讨其在X线调控下对肺腺癌细胞A549的杀伤作用。方法分别以限制性内切酶EcoRⅠ/NotⅠ双酶切质粒pE6-p53-EGFP及pApoptin-EGFP,电泳分离,回收目的线性DNA片段,T4连接酶连接,构建重组质粒pE6-Apoptin-EGFP,测序、鉴定。脂质体介导瞬时转染肺腺癌细胞A549,RT-PCR、荧光显微镜等检测照射前后融合蛋白表达,流式细胞仪检测放射诱导前后转染细胞的凋亡变化。结果成功构建重组质粒pE6-Apoptin-EGFP,并在被转染A549细胞中检测到Apoptin基因表达;经放射诱导的pE6-Apoptin-EGFP/A549细胞及对照组pE6-EGFP/A549细胞的凋亡率分别为(32.48±3.56)%和(10.67±2.42)%,未经放射诱导的pE6-Apoptin-EGFP/A549细胞及对照pE6-EGFP/A549细胞的凋亡率分别为(6.33±1.21)%、(4.25±0.87)%;与其它3组相比,放射诱导的pE6-Apoptin-EGFP/A549细胞凋亡率明显增高,具有非常显著统计学差异(P<0.01)。结论放射敏感性启动子调控的Apoptin基因表达可在放射线调控下在A549细胞中有效表达并诱导凋亡,为进一步研究非小细胞肺癌的放射-基因联合治疗奠定了基础。