卵巢癌尿液代谢物构成与临床分期相关性分析

目的探讨卵巢癌患者尿液代谢物构成与临床分期的相关性。方法收集2010-12-01-2012-09-30山东大学齐鲁医院56例原发性上皮性卵巢癌住院患者和15名健康志愿者晨尿,提取其代谢物,用高效液相色谱-质谱联用技术（HPLC-MS）对代谢物进行检测,用主成分分析（PCA）和偏最小二乘法-判别分析（PLS-DA）对质谱数据进行分析,并对筛选出的代谢物进行数据库检索和比对,及单因素方差分析和最小显著差t检验。结果尿液样品经HPLC-MS检测后用PCA进行分析,结果显示健康人和不同临床分期卵巢癌患者的样品点在得分图中存在分离趋势。用PLS-DA作进一步分析,分类结果较PCA得到明显改善,R2X=0.757,R2Y=0.977,Q2Y=0.87,表明该模型稳定性和预测性较好。通过对变量投影重要性（variable importance in projection,VIP）和相关系数得到的差异点进行非配对双尾t检验,及对有统计学意义的差异点进行数据库检索和比对,筛选出体现健康人与不同临床分期卵巢癌患者之间代谢差别的尿中代谢物,分别为N-乙酰神经氨酸-9-磷酸、5′-甲硫腺苷、尿酸-3-核苷、假尿嘧啶核苷、L-缬氨酸、琥珀酸、L-脯氨酸及β-烟酰胺单核苷酸。单因素方差分析显示,这些化合物在正常人和不同临床分期的卵巢癌患者尿液中相对含量,差异有统计学意义,P〈0.05;且随着卵巢癌患者病情的发展呈现增高趋势。结论不同临床分期卵巢癌患者尿液代谢物构成存在差异,卵巢癌患者尿液代谢物构成与临床分期有相关性。     

地钱素C衍生物F41对子宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响

目的对地钱素C(MC)羟基衍生物进行筛选,寻找具有高抗肿瘤活性的MC衍生物,并初步探讨其抗肿瘤的细胞与分子生物学机制。方法用MTT法观察56种MC羟基衍生物对子宫颈癌HeLa细胞的毒性作用,筛选其中细胞毒作用最强的MC衍生物,并比较其与MC对HeLa细胞存活的抑制作用。用倒置显微镜、DAPI染色和DNA梯带检测其对细胞凋亡的影响。用流式细胞术检测其对细胞周期的影响。用Western印迹法检测其对细胞周期和凋亡相关蛋白表达的影响。结果在56种MC衍生物中,F41对HeLa细胞毒性最强,抑制HeLa细胞存活的IC50为(11.31±2.13)μmol·L-1,明显低于MC〔IC50为(17.19±3.28)μmol·L-1〕(P<0.01)。F41和MC与HeLa细胞作用24,48和72h,F41对HeLa细胞存活的抑制作用均明显强于MC(P<0.05)。形态学和DNA梯带检测显示,F41处理后,HeLa细胞皱缩变小,有空泡和凋亡小体出现,胞核浓缩变小,DNA电泳呈梯状条带。流式细胞分析显示,F41 15μmol·L-1处理HeLa细胞24h,G2/M期细胞占总细胞的比例为(43.8±3.0)%,明显高于对照组的(13.1±1.6)%(P<0.01);G1期细胞比例为(34.8±3.8)%,明显低于对照组的(63.6±5.5)%(P<0.01)。Western免疫印迹结果表明,F41可使HeLa细胞内磷酸化细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶1水平降低,细胞周期蛋白B1和P53蛋白表达增多。结论 F41可诱导HeLa细胞凋亡,抑制HeLa细胞分裂,其抗肿瘤活性可能强于MC。     

宫颈癌HeLa细胞摄取ACM-LDL及游离ACM的比较研究

目的比较宫颈癌HeLa细胞对阿克拉霉素-低密度脂蛋白复合物(ACM-LDI)及游离ACM的摄取量及ACM-LDL对HeLa细胞DNA及RNA合成的抑制作用.方法采用保温交换法制备ACM-LDL复合物,观察在相同的作用时间下,HeLa细胞对ACM-LDL及游离ACM的摄取量,应用流式细胞仪测定HeLa细胞内DNA、RNA的含量.结果①相同时间内,宫颈癌HeLa细胞摄取ACM-LDL复合物数量显著高于ACM;②细胞对复合物的摄取量可因天然LDL的竞争抑制而减少;③细胞对复合物的摄取受LDL受体(LDLR)饱和度的限制;④复合物对HeLa细胞DNA、RNA的合成具有较强的抑制作用.结论LDI与ACM结合,对LDL和ACM的结构、理化性质及代谢特征均无影响,以LDI为化疗药物载体,可提高宫颈癌细胞内的药物含量,增加药物的抑癌效果.     

宫颈癌HeLa细胞摄取ACM—LDL及游离ACM的比较研究

目的：比较宫颈癌HeLa细胞对阿克拉霉素－低密度脂蛋白复合物（ACM－LDL）及游离ACM的摄取量及ACM0LDL对HeLa细胞DNA及RNA合成的抑制作用。方法：采用保温交换法制备ACM－LDL复合物,观察在相同的作用时间下,HeLa细胞对ACM－LDL及游离ACM的摄取量,应用流式细胞仪测定HeLa细胞内DNA,RNA的含量。结果：（1）相同时间内,宫颈癌HeLa细胞摄取ACM－LDL复合物数量显著高于ACM;（2）细胞对复合物的摄取量可因天然LDL的竞争抑制而减少;（3）细胞对复合物的摄取受LDL受体（LDLR）饱和度的限制;（4）复合物对HeLa细胞DNA,RNA的合成具有较强的抑制作用。结论：LDL与ACM结合,对LDL和ACM的结构,理化性质及代谢特征均无影响,以LDL为化疗药物载体,可提高宫颈癌细胞内的药物含量,增加药物的抑癌效果。     

子宫颈鳞癌及腺癌细胞抗氧化能力的比较

目的比较子宫颈鳞癌及腺癌细胞对氧化应激的抵抗并探讨其机制。方法①H2O2处理子宫颈鳞癌(Siha、SW756)及腺癌(Hela、GH329)细胞,噻唑蓝(MTT)法检测两型细胞的增殖水平;②用250、250、650及800μmol/L H2O2分别处理子宫颈鳞癌(Siha、SW756)及腺癌(Hela、GH329)细胞,流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平,酶标仪检测细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)和氧化型谷胱甘肽(GSSG)水平,分光光度计检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)及谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性。结果在不进行处理的情况下,子宫颈鳞癌(Siha、SW756)细胞较子宫颈腺癌(Hela、GH329)细胞有较低的ROS水平、GSH含量及GSH/GSSG比值,较高的GSSG水平及SOD和GPx活性。在氧化应激条件下,子宫颈鳞癌(Siha、SW756)细胞的GSH水平及GSH/GSSG比值明显下降,SOD、CAT和GPx活性升高;子宫颈腺癌(Hela、GH329)细胞的GSH水平及GSH/GSSG比值略有下降,SOD、CAT和GPx活性升高。结论子宫颈鳞癌及腺癌细胞处于不同的氧化还原状态,子宫颈鳞癌细胞较子宫颈腺癌细胞抗氧化能力弱,这可能与H2O2处理后鳞癌细胞ROS较腺癌细胞增多明显及两型细胞抗氧化系统有不同的应答有关。     

Ⅰ型与Ⅱ型子宫内膜癌细胞抗氧化能力的比较

 目的 比较Ⅰ型和Ⅱ型子宫内膜癌细胞对氧化应激的抵抗并探讨其机制。  方法  ① H₂O₂处理Ⅰ型和Ⅱ型子宫内膜癌细胞,噻唑蓝（MTT）法检测两型细胞的增殖水平;② 120μmol H₂O₂和800μmol H₂O₂分别处理Ⅰ型和Ⅱ型子宫内膜癌细胞,流式细胞仪检测细胞内活性氧（ROS）水平,酶标仪检测细胞内还原型谷胱甘肽（GSH）和氧化型谷胱甘肽（GSSG）水平,分光光度计检测细胞内超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）及谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）活性 结果 在不进行处理的情况下,Ⅰ型子宫内膜癌细胞较Ⅱ型子宫内膜癌细胞ROS水平及CAT活性较低,GSH水平、GSH/GSSG比值及SOD和GPx活性较高（P＜0.01）。在氧化应激条件下,Ⅰ型子宫内膜癌细胞GSH水平及GSH/GSSG比值下降,SOD和CAT活性降低（P＜0.01）;Ⅱ型子宫内膜癌细胞GSH、GSSG水平明显升高,GSH/GSSG比值略有升高,SOD、CAT和GPx活性升高（P＜0.01）。  结论  Ⅱ型子宫内膜癌细胞与Ⅰ型子宫内膜癌细胞相比较,其本身ROS水平较高,细胞内抗氧化系统及抗氧化酶系统对氧化刺激可进行有效应答,细胞不易受到氧化损伤。     

小鼠肝癌H22细胞LDL受体活性的研究

目的：观察小鼠肝癌Ｈ２２细胞ＬＤＬＲ活性。方法：对大鼠肝癌Ｈ２２细胞和正常肝细胞进行受体结合的Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析和单点分析。结果：①Ｈ２２细胞对ＬＤＬ的亲和性和正常肝细胞相同，但Ｈ２２细胞Ｂｍａｘ明显增多；②Ｈ２２细胞对ＬＤＬ的非特异性结合、内移和降解能力与正常肝细胞相同。结论：小鼠肝癌Ｈ２２细胞ＬＤＬＲ活性增高，其对ＬＤＬ的内移和降解功能未变，     

FIZZ1对α-肌动蛋白和Ⅰ型胶原在大鼠支气管哮喘模型中表达的影响

支气管哮喘（简称哮喘）患者的气道慢性炎症可导致上皮细胞损伤，成纤维细胞活化并分化为表达α-肌动蛋白（α-SMA）的肌成纤维细胞和胶原沉积，因此，α-SMA和Ⅰ型胶原是哮喘早期气道重塑中的重要指标。FIZZ1是2000年首次在过敏性炎症中发现的独立新基因。我们试图检测大鼠哮喘模型Ⅱ期肺泡上皮细胞（AECⅡ）中FIZZ1表达水平、肺组织内α-SMA和成纤维细胞内Ⅰ型胶原含量，揭示FIZZ1与早期气道重塑的关系。     

哮喘小鼠气道上皮TSLP表达及激活DCs加重气道炎症的研究

目的 研究支气管哮喘小鼠气道上皮中胸腺间质淋巴细胞生成素(TSLP)表达,探讨其对哮喘小鼠肺部炎症的影响.方法 BALB/c小鼠分为生理盐水对照组、哮喘模型组和TSLP中和抗体干预组.通过气道反应性和肺组织病理学评价哮喘模型;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测支气管肺泡灌洗液(BALF)上清中IL-4、IL-5和IL13的含量;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定肺组织中TSLP mRNA的表达;免疫组化及Western blot法测定肺组织中TSLP蛋白的表达;流式细胞术检测BALF中树突状细胞(OCs)表面CD40、CD80、CD86的表达水平.结果 小鼠气道反应性增高和肺组织病理学检查结果均符合哮喘的典型表现证实造模成功;哮喘组BALF中IL-4、IL-5和IL-13的水平显著高于正常组(P<0.05),且TSLP与其成正相关;与正常对照组相比,哮喘组气道上皮TSLPmRNA和蛋白高表达,两组间差异有统计学意义(P<0.05);哮喘组BALF中DCs表面CD40、CD80、CD86表达明显高于正常组(P<0.05).TSLP中和抗体干预后,BALF中DCs表面CD40、CD80、CD86表达明显减低,并进一步减少IL-4、IL-5和IL-13的表达.结论 哮喘气道上皮中TSLP表达增高,TSLP通过上调DCs表面CD40、CD80、CD86的表达,激活DCs诱导CD4~+T细胞向Th2分化发育,与加重哮喘的气道炎症有关;TSLP抗体干预可阻断DCs的活化,减少Th2细胞因子的分泌,这些因素可能与减轻哮喘炎症反应有关,为哮喘治疗途径提供新的思路.     

N-乙酰半胱氨酸对子宫颈癌细胞紫杉醇耐药性的影响

目的   建立耐紫杉醇(PTX)子宫颈癌细胞株,观察N-乙酰半胱氨酸(NAC)对子宫颈癌细胞紫杉醇耐药的影响。方法   用PTX处理并培养Hela细胞,建立耐PTX子宫颈癌细胞株Hela/PTX。观察和检测其细胞形态、细胞生长曲线、耐药指数、氧化还原状态及紫杉醇耐药基因1(Txr1)的表达。用NAC处理Hela/PTX细胞,观察NAC对其PTX耐药的影响。结果   用PTX处理Hela细胞10个月后, 可获得在500μg/L PTX中生长状态良好的Hela/PTX细胞。Hela/PTX细胞体积偏大,胞浆内颗粒较多,群体倍增时间是亲代细胞的1.32倍, 对PTX具有显著耐药性,耐药指数为122.69。与Hela细胞相比,Hela/PTX细胞有高水平的活性氧(ROS)和Txr1 mRNA,但还原型谷胱甘肽(GSH)水平及超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性却有不同程度的降低,而氧化型谷胱甘肽(GSSG)水平和GSH/GSSG比值则无明显变化。NAC处理后,Hela/PTX细胞ROS和Txr1 mRNA水平下降,对PTX敏感性增加。结论   耐紫杉醇Hela/PTX细胞氧化还原状态失衡,Txr1表达增加。NAC能降低ROS水平,减少Txr1表达,可逆转其对PTX的耐受。