中西医结合临床专业研究生科研素质培养模式探讨

中西医结合临床专业研究生是具有我国特色的医学研究生培养模式,其目标是培养中西医兼通的高层次、应用型复合人才。在立足培养合格研究生的前提下,学生科研素质的培养是不可或缺的。为加强科研素质培养,需在导师队伍建设、学生培养目标、专业课程选择及创新能力培养等方面建立完善的教学管理机制。     

DEN诱导大鼠肝癌形成中miR-199a的表达机制及健脾解毒法的干预作用

目的:探讨中药复方健脾解毒方对二乙基亚硝胺(DEN)诱导的大鼠肝癌的预防作用及其调控miR-199a的表达机制.方法:♂Wistar大鼠,随机分为正常组(n=25)、模型组(n=40)及中药预防组(n=40).除正常组外,其他组在1-12wk用含DEN 80 mg/L的饮水[mg/(kg·d)]以诱癌,中药组同时给予含生药1.75 g/mL的健脾解毒方灌胃(10 mL/kg),正常组给予10 mL/kg生理盐水灌胃,每日1次,共12wk.于4、8、12、16 wk时相点,各组随机取5只大鼠处死取肝,20 wk将剩余大鼠全部处死取肝,观察肝脏外观,计算死亡率和腹水生成率,比较肝脾指数,肝组织进行HE染色,应用Realtime PCR检测肝组织miR-199a的表达.结果:在20 wk实验结束时,正常大鼠无死亡,而模型大鼠死亡率为42.5%(17/40),预防组死亡率为17.5%(7/40),16.20 wk时模型组腹水发生率为87.5%(7/8),预防组为44.4%(8/18),与模型组有差异性(P<0.05).正常组没有肿瘤形成,模型组和预防组在16 wk后成瘤率均为100%.16 wk模型组肝癌Ⅲ级发生率为100%(5/5),而预防组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级肝癌发生率分别为40%(2/5)、40%(2/5)及20%(1/5),两组比较有差异(P<0.05).与模型组比较,中药预防组有显著降低肝脾指数的作用(均P<0.01).PCR结果显示.模型组肝组织miR-199a较正常组明显上调,中药预防组除16 wk外均有显著下调miR-199a表达的作用(均P<0.01).结论:健脾解毒方有预防DEN诱导大鼠肝癌发生的作用,其机制可能部分与下调miR-199a的表达有关.     

浅议提高国家自然科学基金项目中标的管理举措

上海中医药大学附属普陀医院自2004年成为上海中医药大学附属医院以来，总计中标国家自然科学基金11项。在医院科研管理工作中，一贯坚持“院兴科教、科教兴院”宗旨，在营造科技文化氛围、培育严谨科研作风、夯实学科基础、培养精英人才、加强激励机制、打造科研品牌等方面，做了大量工作，取得了一定成绩。本文从医院科研管理的角度，就提高医院国家自然科学基金项目的中标率进行了初步探讨。     

偏侧猴PD模型STN慢性高频电刺激对脑内多巴胺系统的影响

目的探讨丘脑底核(STN)慢性高频电刺激对猴偏侧帕金森病(PD)模型脑内多巴胺(DA)系统的影响。方法采用单侧颈内动脉注入1-甲基-4-苯基-1,2,3,6四氢吡啶(MPTP)建立猴偏侧PD模型2只,体内植入脑深部电刺激(DBS)系统,行右侧STN慢性高频电刺激。在电刺激前后不同时间点采用微透析技术检测纹状体区细胞外液的多巴胺(DA)及其代谢产物高香草酸(HVA)含量,腰穿取脑脊液标本测量脑脊液中DA、HVA含量,单光子放射计算机断层扫描(SPECT)检测脑内纹状体区巴胺转运体(DAT)及多巴胺D2受体(D2R)的变化。结果猴偏侧PD模型在给予单侧STN慢性高频电刺激后纹状体区DA、HVA明显增高。SPECT显示在有效刺激后纹状体区DAT特异性摄取率增高,D2R特异性摄取率下降。脑脊液中多巴胺及其代谢产物的含量与术前相比无明显差异。结论通过微透析检测提示在给予STN有效慢性高频电刺激后提高了纹状体区DA及其代谢产物的升高,DAT特异性摄取率增高,D2R特异性摄取率下降提示纹状体区的代谢活性有明显升高,这可能是STN-DBS治疗帕金森病的重要机制之一。     

COX-2介导MDR1/P-gp调控人结肠癌细胞多药耐药的研究

背景与目的:肿瘤多药耐药(multidrug resistance,MDR)是导致临床上结直肠癌化疗失败的重要原因之一,环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)过表达与肿瘤多药耐药的发生密切相关,但其引起多药耐药的作用机制尚不清楚.本研究通过调节人结肠癌HCT8/V多药耐药细胞COX-2的表达,以探讨COX-2对人结肠癌细胞多药耐药性的影响及其对P-糖蛋白(P-glycoprotein,p-gp)的调控作用.方法:应用COX-2基因重组慢病毒载体和COX-2特异性抑制剂NS-398(20 μ mol/L)上调及抑制人结肠癌HCT8细胞和多药耐药细胞HCT8/V的COX-2的表达,MTT法检测COX-2对HCT8和HCT8/V细胞化疗药敏感性的影响,Real-time PCR(RFQ-PCR)、Westernblot等方法检测多药耐药基因MDR1和P-gp的表达.结果:人结肠癌耐药细胞HCT8/V对多种化疗药具有耐药性,其COX-2、MDR1 mRNA和P-gp的表达水平明显高于HCT8细胞(P<0.01).感染COX-2过表达慢病毒(COX-2-GFP-Lentivirus)后,HCT8细胞对长春新碱的半数抑制浓度(IC50)由(18.2±7.1)μg/mL上升至(122.5±13.4)μg/mL长春新碱(t=11.9,P<0.01),MDRI mRNA和P-gp的表达水平显著增加(P<0.01);抑制COX-2表达后,HCT8/V细胞对VCR的半数抑制浓度IC50由(191.1±18.2)μg/mL下降至(32.2±7.5)μg/mL(t=14.0,P<0.01),MDR1 mRNA和P-gp的表达水平分别下降了53.3%和42.5%(P<0.01).结论:COX-2通过介导MDR1/P-gp的表达调控人结肠癌细胞多药耐药,抑制COX-2过表达对于逆转结肠癌多药耐药具有重要意义.     

MALAT1、COX-2、β-catenin、MMP-3、MMP-9等基因在结直肠癌发生发展中的意义

 目的 探讨人肺腺癌转移相关转录因子1（MALAT1）、环氧合酶-2（COX-2）、β-连环素（β-catenin）、基质金属蛋白酶（MMP）-3、MMP-9等基因在结直肠癌发生发展中的意义。 方法 收集新鲜结直肠癌组织标本及其对应癌旁组织标本各30例,采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）方法检测MALAT1、COX-2、β-catenin、MMP-3、MMP-9的mRNA表达水平,并与患者性别、年龄、癌胚抗原(CEA)、细胞免疫因子（CD4和CD8）、临床分期、肿瘤侵袭转移程度等进行相关性分析。 结果 MALAT1、COX-2、β-catenin、MMP-9在癌组织和癌旁组织中的表达差异均有统计学意义（P<0.05）,MMP-3则无统计学意义（P>0.05）。MALAT1、COX-2、MMP-9和β-catenin在癌组织中的表达量分别是癌旁组织表达量的2.22倍、1.86倍、2.16倍、0.58倍 (P<0.01)。MALAT1（癌/癌旁）的表达差异与β-catenin（癌/癌旁）的表达差异呈负相关（r＝-0.346,P=0.030）,MMP-9（癌/癌旁）的表达差异与β-catenin（癌/癌旁）的表达差异则呈正相关(r=0.312,P=0.047)。COX-2（癌/癌旁）与MMP-9（癌/癌旁）在男女患者之间的差异均有统计学意义（P=0.047;P=0.018）;COX-2（癌/癌旁）在CEA上升与未见改变的患者之间的差异也有统计学意义（P=0.021）。结论 MALAT1、COX-2、MMP-9、β-catenin在结直肠癌的发生发展中有重要意义,而MMP-3无重要参考价值;MALAT1和β-catenin的负相关性及MMP-9和β-catenin的正相关性说明其在结直肠癌的发生发展中存在一定的相互作用关系;COX-2（癌/癌旁）和MMP-9（癌/癌旁）在男女患者中的差异提示二者影响男女患结直肠癌的概率;检测COX-2可在一定程度上辅助肿瘤标志物CEA对结直肠癌的诊断。     

健脾解毒方介导JNK/SAPK信号通路调控人结肠癌细胞多药耐药

目的:探讨健脾解毒方(JPJD)介导JNK/SAPK信号通路对人结肠癌细胞多药耐药的调节机制。方法:人结肠癌细胞HCT8和多药耐药细胞HCT8/V常规培养,应用Western Blot检测健脾解毒方药物血清对P-糖蛋白(P-gp)以及c-Jun氨基端激酶(JNK)信号通路中c-Jun63/73磷酸化水平;RFQ-PCR检测MDR1 mRNA的表达;电感耦合等离子质谱法(ICP-MS)检测细胞内奥沙利铂(L-OHP)药物浓度的改变。结果:人结肠癌多药耐药细胞HCT8/V的P-gp和c-Jun的磷酸化表达明显高于HCT8细胞;与对照组比较,健脾解毒方药物血清作用48h后HCT8/V细胞的c-Jun的Ser63/73磷酸化、P-gp、MDR1 mRNA水平显著降低(P0.01),细胞组内L-OHP浓度明显增高(P0.01)。结论:健脾解毒方通过降低c-Jun的Ser63/73磷酸化,抑制JNK信号通路的激活,降低P-gp的表达,逆转HCT8/V细胞的多药耐药。     

RGD修饰的载蟾毒灵纳米粒在裸鼠人大肠癌模型中的靶向性研究

目的 探讨bufalin-mPEG-PLGA-PLL-cRGD体内药物靶向分布规律,为大肠癌的临床治疗提供实验依据和方法.方法 建立荷C26结肠癌裸鼠模型,并随机分为两组:Dir-bufalin-mPEG-PLGA-PLL纳米组和Dir-bufalin-mPEG-PLGA-PLL-cRGD纳米组,经尾静脉给药.药物注射后3、19h后采用活体成像系统测定裸鼠活体的荧光强度.结果 注射纳米粒3、19h后,与Dir-bufalin-mPEG-PLGA-PLL纳米粒相比,注Dir-bufalin-mPEG-PLGA-PLL-cRGD纳米粒的荷瘤裸鼠肿瘤部位显示出较高的荧光强度.结论 Dir-bufalin-mPEG-PLGA-PLL-cRGD纳米粒能更有效地靶向大肠癌.本实验制备的载药纳米粒的体内荧光活体成像实验数据表明,该纳米粒有助于提高大肠癌的治疗效果.     

马钱子碱纳米微粒抗肝细胞癌作用的实验研究

目的 观察马钱子碱纳米微粒的抗肝细胞癌作用.方法 采用超声乳化法研制羧基化聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物马钱子碱纳米微粒,体外观察其对肝癌细胞SMMC-7721生长的影响;采用Western blotting和FQ-PCR检测药物作用72 h对肝癌细胞凋亡相关蛋白Fas蛋白和mRNA表达水平的影响.结果 马钱子碱纳米微粒平均粒径(146±96) nm,载药率:4.2％,包封率:67％.随药物浓度的增加,肝癌细胞生长抑制作用明显,呈现剂量依赖性.5-FU、马钱子碱和马钱子碱纳米微粒对肝癌细胞生长的IC50分别为16.7 μg/ml、90.3 μg/ml和164.9 μg/ml,三者之间差异显著(P＜0.05).与空白纳米微粒相比,马钱子碱纳米微粒显著诱导肝癌细胞Fas蛋白和mRNA表达,且320 μg/ml剂量诱导表达显著高于160 μg/ml (P＜0.05).结论 马钱子碱纳米微粒显著抑制肝癌细胞生长,诱导肝癌细胞凋亡,可能与上调肝癌细胞Fas蛋白和mRNA表达有关.马钱子碱纳米微粒是一种具有潜在发展前景的肝癌治疗药物.