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目的克隆人凝血因子Ⅷ(Human Coagulation FactorⅧ,rhFⅧ)基因cDNA,利用bac-to-bac杆状病毒表达系统制备具有高凝血活性rhFⅧ。方法利用PT-PCR和overlap PCR技术扩增人FⅧ基因,亚克隆至转移载体pFastBac HTB,进一步转化至感受态细菌DH10Bac(含穿梭载体Bacmid)中,同源转座、氨苄青霉素及蓝白斑筛选阳性克隆质粒Bacmid/rhFⅧ;PCR法鉴定重组质粒后转染昆虫细胞Sf9;利用病毒感染High five细胞进行蛋白表达,通过SDS-PAGE、Western blot及凝血活性检测方法分析蛋白表达。结果完成了rBac-rhFⅧ重组杆状病毒的制备,实现了rhFⅧ在昆虫细胞中的重组表达,rhFⅧ相对分子质量为184 kDa左右,SDS-PAGE和Western blot检测结果与预期一致,同时具有良好的促凝血作用。结论利用杆状病毒-昆虫表达系统成功制备了具有一定促凝血活性的rhFⅧ,为人凝血因子Ⅷ进一步的开发及应用奠定了基础。 相似文献
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大气中苯系物气相色谱分析现况 总被引:2,自引:0,他引:2
大气中苯系物为一类芳香烃类化合物,包括苯、甲苯、二甲苯、乙苯、苯乙烯等多种,主要来自石油化工及其生产排放的有毒气体,具有毒性及致癌性,在环境保护、劳动卫生及环境卫生方面广泛受到重视。苯系物的检验目前广泛应用的方法是气相色谱法,方法的改进主要在色谱分离和检测两方面,在分离方面文献采用了不同的填充柱和毛细管柱,在检测方面从氢火焰检测器到质谱、微波诱导等离子体光离子化等特殊检测器都有广泛应用。以下按色谱柱和检测手段等两个方面的应用现况进行阐述:1 色谱柱苯系物的分离采用填充柱的方法较普遍,应用也比较早… 相似文献
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