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12.
VEGF165反义RNA表达对人胃癌细胞恶性生物学行为的影响 总被引:12,自引:4,他引:8
目的利用本室构建的反义VEGF165(血管内皮生长因子,vascular endothelial growth factor)真核表达载体,研究VEGF反义RNA表达对人胃癌细胞生物学表型的影响. 方法用阳性脂质体介导的基因转染技术,将VEGF反义RNA重组体转入人胃癌细胞系,观察转染细胞的细胞周期、增殖能力及致瘤生长情况等生物学表现. 结果 VEGF反义RNA重组体转染胃癌细胞后,斑点杂交、间接免疫荧光等分析显示,反义RNA基因转染技术可使VEGF的表达明显减弱;与未转染的细胞相比,G2/M期细胞增加(0.39),而S期细胞减少(0.54);克隆形成率(2.2%)低于未转染细胞(4.0%);肿瘤细胞接种裸鼠后33 d时,VEGF反义RNA表达人胃癌细胞所致的移植瘤体积(345±136) mm3明显小于未转染细胞所致的移植瘤体积(1534±363) mm3. 结论 VEGF反义RNA可以通过抑制肿瘤组织血管生成而防治肿瘤的生长,另外VEGF的表达可能与细胞增殖能力有关. 相似文献
13.
目的 研究凋亡相关基因Bax对胃癌多药耐药性的逆转作用.方法 构建含有人BaxcDNA全长的真核表达载体pBK-Bax.经脂质体导入缺乏Bax蛋白表达的人胃癌多药耐药细胞系SGC7901/VCR中.Western印迹观察Bax基因在转导细胞中的表达,MTT法检测Bax转导细胞与空载体转导细胞对化疗药物的敏感性.结果 成功构建了Bax的真核表达载体,Bax转导细胞能稳定表达Bax蛋白,与空载体转导细胞相比,Bax转导细胞对长春新碱(P<0.01).结论 Bax基因转导对胃癌多药耐药细胞SGC7901/VCR的多药耐药性具有逆转作用Bax基因对人胃癌耐药细胞多药耐药性的逆转作… 相似文献
14.
15.
目的:扩增及克隆人的MAGE-E1基因并利用大肠杆菌进行表达。方法:从人胶质瘤细胞系BT-325中提取总RNA,用RT-PCR从中扩增出MAGE-E1基因片段。将MAGE-E1基因片段插入载体pGEM-T easy中,经全自动序列分析仪测序正确后,再克隆至表达载体pGEX-4T-2中,构建重组表达载体pGEX-4T-2-MAGE-E1,并转化大肠杆菌进行表达。结果:1mmol/L.异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导5h,MAGE-E1蛋白表达即达高峰,SDS-PAGE及凝胶密度扫描分析表明,表达出Mr约41000大小的蛋白,占菌体总蛋白的35%。结论:成功扩增、克隆MAGE-E1基因,并在大肠杆菌中得到稳定高效表达。 相似文献
16.
本文采用分子克隆技术成功地构建了反义核酸表达载体pDOR-Bcl-2 cDNA.以脂质体介导法将重组反义核酸表达载体转染受体细胞SGC7901,并经C418筛选,从2×10~5细胞中筛选出大约150个抗性克隆,转导率大于1‰,随机挑选2个克隆继续筛选与扩增培养,获得了1株稳定的抗性细胞,从而建立了Bcl-2表达阻断的胃癌细胞株,我们命名为7901anBcl-2 cells.通过Southern印迹法、Northern印迹法、Western印迹法检测显示,转导株与非转导株均有Bcl-2 cDNA的表达,但转导株Bcl-2 mRNA及蛋白的表达明显低于非转导株.说明在胃癌细胞中Bcl-2基因处于高表达状态,通过真核表达载体介导的转染,反义Bcl-2可成功地导入胃癌细胞,并有效地阻断Bcl-2表达. 相似文献
17.
目的研究RhoB对胃癌细胞SGC7901增殖调控作用。方法用PCR扩增出RhoB的全长cDNA,构建RhoB可诱导表达载体pGene/V5-His-RhoB;脂质体介导法将调控载体pSwitch及诱导表达载体pGene/V5-His-RhoB先后转入人胃癌细胞SGC7901中,筛选出稳定抗性克隆;Western blot检测米非斯酮诱导后转染细胞中RhoB蛋白的表达。用MTT assay检测RhoB转染细胞株的生长速度、双苯并咪唑染料(Hoechst 33258)活细胞吸收分析法、流式细胞仪(FCM)检测RhoB对胃癌细胞凋亡指数作用。结果成功构建RhoB可诱导真核表达载体pGene/V5-His-RhoB,并经酶切和测序鉴定;转染后经潮霉素B和Zeocin筛选出稳定抗性克隆SGC7901/RhoB;米非斯酮诱导出RhoB蛋白表达,在诱导24小时后蛋白表达最高;细胞增殖试验结果显示,RhoB表达上调后胃癌细胞增殖受到抑制;细胞凋亡检测提示高表达RhoB可明显诱导胃癌细胞凋亡。结论RhoB对胃癌细胞增殖具有负性调控作用,可诱导胃癌细胞出现凋亡。 相似文献
18.
目的探讨环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)和血管内皮生长因子(vascularendothelial growthfactor,VEGF)在人胃癌组织中表达及其相关性。方法应用免疫组织化学SABC法检测53例人胃癌组织中COX-2、VEGF和CD34的表达,并以40例正常胃粘膜标本作为对照。对CD34阳性血管进行微血管密度(microvesseldensity,MVD)计数。对COX-2和VEGF的表达采用半定量计分法判定,并结合临床资料进行统计学分析。结果53例人胃癌组织中,COX-2表达阳性者44例,阳性率为83.0%;VEGF表达阳性者45例,阳性率为84.9%。COX-2表达与VEGF表达相关显著(P<0.05)。并且,COX-2和VEGF的表达与TNM分期(P<0.05,P<0.05)、淋巴结转移(P<0.01,P<0.05)和远处转移(P<0.01,P<0.05)相关。COX-2/VEGF同高表达组中MVD值(79.5±25.8)高于COX-2/VEGF同低表达组中的MVD值(45.0±13.9),差异非常显著(P<0.01)。结论胃癌组织中COX-2与VEGF共表达,并相互协同促进肿瘤血管生成和转移。 相似文献
19.
20.