一种大鼠肺静脉平滑肌细胞快速培养方法的建立及评价

目的 通过改进原代大鼠肺静脉平滑肌细胞(pulmonary vein smooth muscle cells,PVSMCs)的培养方案,以期建立快速、方便、高细胞活力的肺静脉平滑肌细胞培养方法,为肺静脉在肺血管相关疾病研究中提供适合的细胞模型.方法 体视镜下显微分离大鼠肺静脉,胶原酶消化后获取原代PVSMCs,分别用低糖DMEM培养基、DMEM-F12培养基、高糖DMEM培养基作为培养液,观察PVSMCs的生长情况和细胞形态,对平滑肌α-actin进行免疫荧光鉴定,并用实时荧光法检测PVSMCs对高钾溶液引起的细胞内钙浓度升高的反应,评价细胞活力.结果 PVSMCs在3种培养基中的生长速率比较:DMEM-F12＞高糖DMEM＞低糖DMEM.DMEM-F12中培养的PVSMCs可见细胞质中有典型的、并行排列的、绿色荧光显色的平滑肌α-actin蛋白,细胞核呈蓝色荧光,细胞纯度达95％以上,而阴性对照只见染蓝光的细胞核.细胞对高钾溶液具有良好反应.结论 DMEM-F12培养基中PVSMCs生长速率最大,细胞符合平滑肌细胞免疫结构特征,并具有良好的细胞功能.DMEM-F12培养基更适合PVSMCs的培养.     

原发性高血压血瘀证患者活化血小板、胰岛素抵抗及动态血压变化特点

目的:观察原发性高血压血瘀证患者活化血小板、胰岛素抵抗、动态血压变化,并与非血瘀证及健康体检者相对照。方法:①选择2001-03/2002-12厦门市中山医院老年科住院或门诊就诊的原发性高血压患者60例,男38例,女22例,年龄60～80岁。均对检测项目知情同意。高血压血瘀证组22例,男13例,女9例;年龄63～80岁。高血压非血瘀证组38例,男25例,女13例,年龄63～80岁。选择同期本院体检健康人30名为对照组,男20名,女10名;年龄60～80岁。均对检测项目知情同意。②采用无创携带式全自动监测仪监测24h收缩压变异性。采用EPICX-XL型流式细胞仪测定外周血活化血小板的表面分子标志物血小板α-颗粒膜糖蛋白、血小板溶酶体膜糖蛋白的阳性表达率。分别用葡萄糖氧化酶法及放射免疫法测定空腹血糖和空腹胰岛素,胰岛素敏感指数=ln[1/(空腹血糖×空腹胰岛素)]。计算体质量指数[体质量(kg)/身高2(m2)]。③两组差异用成组数据t检验,采用多元逐步回归分析,并进行直线相关分析。结果:原发性高血压患者60例和健康人30名均进入结果分析。①高血压患者、高血压血瘀证组、高血压非血瘀证组患者空腹胰岛素、血小板α-颗粒膜糖蛋白阳性表达率及血小板溶酶体膜糖蛋白阳性表达率明显高于对照组(P<0.05～0.01)。高血压组和高血压血瘀证组患者胰岛素敏感指数明显低于对照组(P<0.05,0.01)。高血压血瘀证组患者血小板溶酶体膜糖蛋白阳性表达率明显高于高血压非血瘀证(P<0.05)。②原发性高血压患者血小板α-颗粒膜糖蛋白阳性表达率与胰岛素敏感指数呈显著正相关(r=0.440,P<0.05),血小板溶酶体膜糖蛋白阳性表达率与胰岛素敏感指数无明显相关性(r=-0.17,P>0.05)。③以24h动态收缩压变异性为应变量,以血小板溶酶体膜糖蛋白阳性表达率、血小板α-颗粒膜糖蛋白阳性表达率及体质量指数为自变量X建立逐步回归方程Y=-4.42 0.750×血小板α-颗粒膜糖蛋白阳性表达率 0.747×体质量指数。以24h动态收缩压变异性为应变量Y,Y=0.963 0.836×血小板溶酶体膜糖蛋白阳性表达率,表明动态收缩压变异性与活化血小板和体质量指数关系密切。结论:原发性高血压血瘀证患者存在着明显血小板活化及胰岛素抵抗的异常,血小板溶酶体膜糖蛋白、血小板α-颗粒膜糖蛋白、胰岛素敏感指数可能是血瘀证微观辨证的指标之一。     

CyclinD1、p16的表达与大肠癌生物学行为的关系

目的：研究cyclinD1和p16在大肠癌中的表达及临床意义。方法：应用流式细胞术（FCM）方法测定大肠癌和正常对照组结肠标本的cyclinD1和p16基因蛋白，蛋白表达量以荧光指数（fluorescent index，FI）表示。结果：大肠癌组织cyclinD1、p16基因蛋白的FI值与正常大肠黏膜组织比较差异有显著性（P〈0．01，P〈0．02）。CyclinD1、p16的异常表达与肿瘤组织学类型、Duke’s分期、淋巴结转移密切相关（P〈0．01）。结论：大肠癌的发生与cyclinD1高表达和P16低表达均有关，cyclinD1和p16基因可作为大肠癌早期诊断、临床生物学行为和预后评估的重要指标。     

一次性输液器在膀胱冲洗的应用

-248. [5]吴起县统计局.吴起县统计年鉴.吴起,1999、2004.1999年,朱鎔基总理等国家领导人先后在陕西、甘肃、四川等地考察,并提出"退耕还林(草),封山绿化,以粮代赈,个体承包"的十六字方针后,这3个省率先展开了退耕还林工作,从而揭开了全国性退耕还林的序幕。位于陕西省延安市     

经颅磁刺激运动诱发电位在肌萎缩侧索硬化中的应用

目的：探讨经颅磁刺激运动诱发电位（TMS—MEP）在肌萎缩侧索硬化（ALS）患者上运动神经元损害评价中的作用。方法：对符合E1 Escorial诊断标准的20例ALS患者（ALS组）和15名健康对照者（健康对照组）进行双小指展肌、胫前肌TMS-MEP测定。运动诱发电位（MEP）中枢性损害的判断标准为中枢运动传导时间（CMCT）延长、安静状态双侧皮层刺激MEP未引出或易化状态至少一侧皮层刺激MEP未引出;CMCT侧间差增大为可疑异常。对两组患者的MEP中枢异常进行比较。结果：ALS患者小指展肌易化状态、安静状态CMCT、胫前肌易化状态CMCT与对照组比较显著延长。ALS患者TMS—MEP中枢性损害的出现率为60％,主要表现为CMCT延长和MEP引不出,分别占50％（10／20）和50％（10／20）,如将CMCT侧间差增大者计入,则总异常率提高到75％。按诊断级别分组后,临床确诊、拟诊和可能的ALS患者的MEP中枢性损害出现率分别为87．5％、71．4％和60．0％,单纯CMCT侧间差增大而无其他异常,仅见于拟诊或可能的ALS患者。结论：对于拟诊或可能的ALS,MEP中枢性异常可以帮助确立上运动神经元受累。单纯CMCT侧间差增大可能发生于早期患者,有助于发现轻度或亚临床上运动神经元病损。     

人肥大细胞类糜蛋白酶分泌型真核表达载体的构建

目的构建人肥大细胞类糜蛋白酶（MC—Chy）分泌型真核表达载体。方法以MC-Chy基因的质粒pDEST17／CMA为模板,通过PCR扩增出融合有免疫球蛋白K链信号肽的人MC—Chy基因,定向克隆至真核表达载体pcDNA3．1,通过PCR、酶切和DNA测序鉴定。结果PCR扩增出免疫球蛋白K链融合人MC-Chy基因,DNA序列测定结果显示目的基因片段正确插入真核表达载体pcDNA3．1。结论成功构建了人MC-Chy分泌型真核表达载体,为下一步重组类糜蛋白酶的制备及其功能的深入研究奠定了基础。     

血小板内皮细胞黏附分子-1基因多态性与急性心肌梗死的相关性研究

目的 研究血小板内皮细胞黏附分子-1(PECAM-1)基因单核昔酸多态性及其单倍型与急性心肌梗死(AMI)易感性之间的关系;同时分析PECAM-1基因型及血清水平与AMI的相关性.方法 以180例AMI患者和200例健康对照者为研究对象,应用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)和DNA测序的方法 对PECAM-1基因Leu125Val、Asn563Ser和Gly670Arg单苷酸多态性进行基因分型,同时采用酶联免疫吸附法检测血清PECAM-1水平.用SHEsis软件分析PECAM-1基因的连锁不平衡及单倍型频率.结果 PECAM-1基因Asn563Ser和Gly670Arg多态性在AMI患者和正常人群中分布差异无统计学意义(P>0.05),而PECAM-1基因Leu125Val多态性在两组人群中的分布差异存在统计学意义(P<0.05).等位基因频率的相对风险分析发现,Val等位基因携带者患AMI的风险是Leu等位基因的1.480倍[比值比(OR)=1.480,95%可信区间(CI)为1.111～1.972,P=0.007];携带Val等位基因的AMI患者血清PECAM-1水平显著高于不携带者(P<0.01).联合基因型分析发现,PECAM-1基因Leu125Val、Asn563Ser和Gly670Arg单核苷酸多态性存在着强烈的连锁不平衡,与对照组比较,Val-Ser-Arg基因单倍型携带者显著增加了AMI的发病风险(OR=1.489,95%CI为1.118～1.984,P=0.006).结论 PECAM-1基因Leu125Val多态性和Val-Ser-Arg单倍型与AMI的发病具有相关性,其中Val等位基因可能足AMI的遗传易感基因,携带Val等位基因的个体可能通过促进PECAM-1的高度表达进而增加了AMI的发病风险.     

凭祥市长途卡车司机艾滋病知识及高危行为影响因素分析

目的了解广西边境长途卡车司机艾滋病知识和高危行为及其影响因素,为下一步的宣传和防治工作提供依据。方法于2010—2016年每年的5—6月,按照《全国艾滋病哨点监测实施方案操作手册》的要求开展监测工作,在凭祥市浦寨边境贸易城的停车场对长途卡车司机进行问卷调查,并采集血样进行艾滋病病毒(HIV)、梅毒、丙型肝炎病毒(HCV)抗体检测,分析其艾滋病知识和相关高危行为的影响因素。结果共调查2 800名长途卡车司机,其中包括越南籍司机152名,艾滋病知识总知晓率为96.14%,最近一年商业性行为的发生率为12.75%,最近一次发生商业性行为时安全套使用率为92.16%。多因素分析结果显示:年龄、文化程度、国籍是艾滋病知识知晓程度的影响因素;年龄、国籍以及梅毒感染会影响长途卡车司机最近一年是否发生商业性行为;年龄、国籍是长途卡车司机最近一次发生商业性行为时是否使用安全套的影响因素。结论应该针对不同年龄段的广西边境长途卡车司机人群进行差异化的艾滋病知识宣传教育,应特别加强对越南籍司机的干预工作,以防控艾滋病在该群体的传播和流行。     

成人水痘误诊2例

水痘(varicella)是由水痘带状疱疹病毒(varicellazoster virus)引起的急性具有高度传染性的发疹性疾病。本病以皮肤黏膜上分批出现的斑疹、丘疹、疱疹和结痂为特征,并可伴有发热等全身症状。而成人于皮疹出现前1～2d的前驱期中全身症状明显,因此在前驱期易造成误诊、漏诊。我院2007年1月内相继接诊2例成人水痘,报告如下。     

云南省人和家畜立克次体病血清流行病学调查

目的 云南省地处我国西南部,与缅甸、老挝、泰国等接壤,属亚热带地区,素有植物王国之称,特有地理特征及气候条件易于各种媒介滋生,是各种媒介源传染病高发地区,尤其是立克次体病.以往资料显示该地区存在有恙虫病、斑疹伤寒、斑点热以及Q热等立克次体病,然而缺乏系统的流行病学资料,特别是新发立克次体病如无形体病和埃立克体病的资料十分有限.值得注意的是,近年来,当地临床及疾控部门报告每到夏秋季节,不明原因发热病人聚增,临床医生高度怀疑立克次体病,因为多数病人非特异的外斐实验阳性(OX19≥1∶160或OX2≥1∶160或OXK≥1∶160),且临床应用抗立克次体药物有效.为了解当地人群及家畜动物立克次体感染状况,2009年3-5月,中国疾病预防控制中心传染病预防控制所立克次体研究室与云南省疾病预防控制中心联合进行了现场血清流行病学调查.方法 实验设计按地理位置,选择东北寻甸回族彝族自诒县、西北玉龙纳西族自治县以及南部思茅地区3个调查点,分别代表山区半山区、丘陵、林区等地貌.按卫生部下发《人粒细胞无形体病预防控制技术指南(试行)的通知》问卷,按注册户口单、双号随机开展以家庭为单位的问卷调查.调查包括年龄、职业、居住地区、是否接触动物、是否被蜱叮咬等.每名调查对象抽取3 mL静脉血分离血清,--20℃当地保存,然后72 h航空运送至中国疾病预防控制中心传染病预防控制所立克次体研究室进行实验室检测.按WHO推荐的间接免疫荧光(IFA)法检测8种常见立克次体包括莫氏立克次体、黑龙江立克次体、恙虫病东方体Karp型、贝氏苛克斯体、横赛巴尔通体、Hainanl斑点热群立克次体、查菲埃立克体及人粒细胞无形体.Excel录入数据,SAS9.1软件统计分析不同地区人群、不同年龄组及性别间抗体阳性率以及不同地区不同种类家畜抗体阳性率.具体方法使用x2检验,P＜0.05具有统计学意义.结果 寻甸、玉龙及思茅3个地区成人立克次体血清抗体检测结果发现莫氏立克次体、巴尔通体及贝氏苛克斯体血清IgG抗体阳性率较高,分别为16.5％(39/237)、6.3％ (15/237)和9.3％ (22/237).同样,儿童莫氏立克次体IgG抗体阳性率最高(12.4％).而家畜动物莫氏立克次体IgG抗体总阳性率高达61.5％.8种立克次体在不同地区分布没有统计学意义,但存在随年龄增加而增加的趋势.结论 对于新发蜱传人粒细胞无形体及查菲埃立克体,尽管人群抗体阳性率很低,但家畜动物抗体流行率较高,因此,有必要进一步调查监测这类传染病的相关媒介、宿主以及发热病人.通过本次调查,我们强调加强当地临床不明原因发热病人的诊断及鉴别诊断,及时应用特效抗生素,避免病人多器官受累甚至死亡具有重要的临床及公共卫生意义.