脂质体介导的聚集素反义寡核苷酸对膀胱癌EJ细胞的作用

目的探讨clusterin对膀胱癌EJ细胞生物学特征的影响. 方法应用脂质体包裹的clusterin反义寡核苷酸转染EJ细胞,阻断其表达,通过3′端末端标记、MTT试验、伊红排斥实验等方法观察clusterin反义基因对EJ细胞增殖、凋亡、坏死等生物学行为的影响. 结果转染clusterin反义寡核苷酸组(反义组)EJ细胞凋亡增加,第5天达峰,凋亡率80%,与转染clusterin正义寡核苷酸组(正义组)比较,差异有显著性意义(P<0.05).反义组细胞死亡率增加,以转染后1～4 d明显(13.8%～33.3%),显著高于相应正义组(P<0.05).反义组细胞增殖活性降低,以转染后第6、7天明显,显著高于相应正义组(P<0.05). 结论 clusterin是重要抗凋亡因子,其表达与膀胱癌细胞的生存、增殖、抗凋亡发展密切相关.     

肾癌差异表达基因克隆的研究

目的 克隆并鉴定肾癌与正常肾之间差异表达的基因。方法 应用抑制性消减杂交技术构建人肾癌组织与正常肾组织差异表达的cDNA消减文库,并从中克隆鉴定出肾癌差异表达的基因。结果 构建成功了高消减效率的人肾癌cDNA消减文库,对其中5个克隆插入的cDNA片段进行测序后经Genbank检索表明,5个片段均为未知新序列,其中GYIZ-RCC18为3个拷贝,提示以上5个cDNA征段可能来自3个新基因。Northern杂交分析显示,GYIZ-RCC18在肾癌组织中有明显表达,而在正常肾组织中无表达,这证明GYIZ-RCC18是肾癌相关的新基因。结论 人肾癌cDNA消减文库的建立为进一步筛选,克隆肾癌特异性表达的新基因奠定了基础。     

环磷酰胺联合甲泼尼龙治疗Graves病合并糖尿病疗效分析

目的:探讨环磷酰胺联合注射用甲泼尼龙琥珀酸钠治疗Graves病合并糖尿病的临床效果。方法:选取2016年2月~2019年1月收治的Graves病合并糖尿病患者79例,按随机数字表法分为观察组(40例)与对照组(39例)。两组均积极控制血糖水平,对照组予以注射用甲泼尼龙琥珀酸钠治疗,观察组予以环磷酰胺联合注射用甲泼尼龙琥珀酸钠治疗。比较两组疗效、不良反应发生情况,比较治疗前、治疗3个月后促甲状腺素受体抗体、甲状腺刺激免疫球蛋白及促甲状腺素水平。结果:观察组治疗总有效率97.50%高于对照组的79.49%(P<0.05);治疗3个月后观察组血清促甲状腺素受体抗体、甲状腺刺激免疫球蛋白水平低于对照组,血清促甲状腺素水平高于对照组(P<0.05);观察组不良反应发生率7.50%与对照组的5.13%对比,无显著性差异(P>0.05)。结论:环磷酰胺联合注射用甲泼尼龙琥珀酸钠治疗Graves病合并糖尿病患者疗效显著,能有效调节患者血清促甲状腺素受体抗体、甲状腺刺激免疫球蛋白及促甲状腺素水平,且不良反应少,安全性高。     

肾癌相关基因GYLZ-RCC18对肾癌细胞系GRC-1抗死亡作用机制的研究

目的：应用反义基因转染技术探讨肾癌相关新基因GYLZ－RCC18与肾癌细胞死亡（包括坏死及凋亡）之间的关系,并探讨肾癌基因疗法的新途径。方法：用脂质体包裹的新基因GYLZ－RCC18第一编码区起始处的20个碱基的反义和正义寡核苷酸导入肾癌细胞系GRC－1,应用流式细胞技术和伊红排斥实验连续检测GYLZ－RCC18反义寡核苷酸对肾癌细胞凋亡、坏死的影响。结果：导入GYLZ－RCC18反义寡核苷酸后,可大量杀伤GRC－1细胞并明显促进GRC－1细胞坏死,于第4天达到杀伤高峰约60％;同时可连续8d诱导凋亡峰,最高于第2天达约约22．5％,两种作用 曲线形状和峰值不完全一致。结论GYLZ－RCC18是肾癌相关的重要的新的癌基因,GYLZ－RCC18的表达可通过两种不同的机制即抗癌细胞坏死机制和抗凋亡机制发挥对肾癌细胞的保护作用,GYLZ－RCC18可能对肾癌细胞生存和耐药至关重要,通过导入反义基因的方法阻断肾癌细胞中GYLZ－RCC18的表达,可有效地杀伤肾癌细胞,对此新基因的研究将有助于为肾癌的基因的基础研究和临床治疗提供新的思路和途径。     

肾癌抑制性消减杂交文库的构建及意义

目的　应用抑制性消减杂交技术构建人肾癌组织与正常肾组织间差异表达的cDNA组成的消减文库。　方法　分别从肾癌组织和正常肾组织提取polyA RNA ,合成双链cDNA ,经RsaI酶切后将肾癌cDNA分为两组并加上不同的DNA接头 ,再与过量正常肾组织cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR ,PCR产物与T/A载体连接并转化大肠杆菌构建成cDNA消减文库 ,文库扩增后随机挑取克隆进行酶切、测序及同源性分析。　结果　文库共包含 4 14个阳性克隆 ,随机挑取 2 6 5个阳性克隆提取质粒并酶切分析 ,其中 2 4 6个克隆有插入片段。将其中 4 0个克隆进行测序 ,表明 1个克隆为新基因片段 ,其余 39个源于 35个已知基因。　结论　该消减杂交文库质量可靠 ,它的成功构建为进一步筛选、克隆肾癌差异表达基因提供了依据     

Clusterin对膀胱癌细胞抗凋亡作用机制的研究

目的：探讨新的抗细胞凋亡因子Clusterin对膀胱癌EJ细胞的作用机制。方法用丝裂霉素（MMC）诱导膀胱癌EJ细胞凋亡，采用流式细胞术（FCM）检测不同浓度的Clusterin对抗EJ细胞的凋亡率。结果：小剂量Clusterin可以特异性抑制MMC诱导的EJ细胞凋亡作用。结论Clusterin通过抗凋亡机制作用于膀胱癌EJ细胞，可能与膀胱癌细胞的复发、耐药等临床特性有关、此项研究对阐明膀胱癌发生发展的生物学机制以及临床应用Clusterin抗体的治疗胱癌提供帮助。