骨髓间充质干细胞神经分化中Wnt信号通路的基因芯片分析

目的通过Wnt信号通路PCR基因芯片观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)转导Wnt-3a并诱导向神经细胞分化后相关基因的表达变化,寻找Wnt信号通路中调控BMSCs神经分化的靶基因。方法密度梯度离心加差速贴壁法体外分离和纯化BMSCs,原代培养2周后传代。观察细胞形态特征。基于GatewayTM技术构建双表达慢病毒载体,将Wnt-3a转导至BMSCs。设置转导组、未转导组及对照组,其中转导组和对照组转导Wnt-3a,转导组为扩增后的BMSCs-Wnt-3a,对照组取同时期BMSCs-Wnt-3a,未转导组未转导Wnt-3a。诱导转导组和未转导组细胞神经分化,倒置相差显微镜下观察细胞形态。采用基因芯片技术检测Wnt信号通路基因的改变,用RT-PCR来验证相关基因的上调或者下调。结果找到2 959个基因上调,4 623个基因下调。在Wnt信号通路的89个基因当中,与神经系统发育和分化相关基因有不同的变化。从中挑选了2个基因做RT-PCR验证,结果表明与芯片结果一致。结论 Wnt通路激活后,下游的基因转录,促进神经分化。     

桡神经-正中神经端侧吻合在桡神经长段缺损修复中的应用

交通、工矿事故等严重创伤和神经源性肿瘤切除等造成的桡神经缺损,由于缺乏有效的治疗手段多造成患肢功能障碍.令人可喜的是,相关基础研究表明,神经端侧吻合后正常的神经可发出侧支长入到损伤神经断端,并沿髓鞘生长重新恢复其传导功能,从而促进受损神经的功能恢复.此结果为端侧吻合修复周围神经缺损提供了理论支持.近年来的相关临床应用报道亦逐渐增多.自1999年1月至2007年12月之间,我们采用正中神经-桡神经端侧吻合修复桡神经长段缺损19例,现就疗效进行评价和分析.     

骨科临床实习教学的实践和探索

骨科临床实习教学在外科教学中一直都占有比较重要的地位,为提高骨科临床实习教学效果,本文总结了骨科临床实习带教的实践经验,分别从完善骨科临床教学模式、补充骨科新进展、应用骨科教学警示病例及提高医学生医德修养等方面探讨了骨科临床实习教学的改进方法。     

依达拉奉体外诱导大鼠骨髓基质干细胞分化为神经元样细胞的电生理研究

目的探讨新型氧自由基清除剂依达拉奉诱导大鼠骨髓基质干细胞分化为神经元样细胞的电生理特性。方法Ficoll-Paque分离液离心分离大鼠骨髓基质干细胞,体外扩增,含依达拉奉的无血清L-DMEM诱导。观察细胞形态变化,Western-blot检测分化前后细胞膜离子通道蛋白表达,全细胞膜片钳检测细胞电生理特性。结果分化的骨髓基质干细胞胞体收缩,突起伸出;钠、钾、钙膜蛋白分化前后均有表达,分化后钾、钠、钙膜蛋白表达上调;分化后细胞静息电位值增大,外向电流增大,尤以外向整流钾电流显著。结论依达拉奉诱导大鼠骨髓基质干细胞分化的细胞具有神经细胞电生理特性。     

阿仑磷酸钠联合金天格胶囊治疗绝经后骨质疏松临床观察

摘 要 目的： 观察阿仑磷酸钠联合金天格胶囊治疗绝经后骨质疏松（PMOP）的临床疗效。方法: 98例PMOP患者随机分为阿仑磷酸钠片组（阿仑磷酸钠片70 mg,po,每周1次）32例、金天格胶囊组（1.2 g,po,tid）32例和联用组（阿仑磷酸钠片70 mg,po,每周1次+金天格胶囊1.2 g,po,tid）34例,连续治疗6个月,比较3组患者治疗前后的临床症状评分、骨密度(BMD)、血钙、血磷、碱性磷酸酶（AKP）及肝肾功能等各项指标的变化数据。结果: 治疗6个月后,联用组症状评分下降幅度明显优于阿仑磷酸钠片组和金天格胶囊组（P<0.0５）;3组的BMD均较治疗前明显上升,且联用组改善更明显（P<0.05）。结论: 阿仑磷酸钠联合金天格治疗PMOP的效果显著,能够有效改善临床症状,明显增加骨密度,值得推广应用。     

前后路联合手术治疗多节段颈胸段脊柱结核

目的探讨前后入路联合手术治疗多节段颈胸段脊柱结核的效果。方法对2003年以来8例患C6～T3椎体结核的病例，抗结核治疗2周后，进行前路病灶清除植骨术联合后路椎弓根固定术治疗，观察脊柱稳定性及脊髓功能恢复情况。结果所有患者经术后随访植骨部位均骨性愈合，感觉、运动功能均有不同程度改善，胸背部疼痛或不适明显缓解，无复发，近期疗效均较满意。结论前路手术可有效清除病灶、植骨，后路手术可固定多节段颈胸段脊柱，前后路联合治疗多节段颈胸段脊柱结核效果满意。     

髂骨螺钉联合磷酸钙骨粉在腰骶椎结核中的应用

目的　探讨后路病灶清除、髂骨螺钉联合椎弓根螺钉内固定、抗生素-磷酸钙骨粉填充椎间隙的方法治疗腰骶椎结核。 方法　回顾性分析42例腰骶椎结核患者两种不同手术方法的临床资料,男19例,女23例,年龄19~75岁,平均38岁。病变节段为L4/5~S1/2,术前后凸成角5°~18°,平均9°。治疗组21例经后路一期病灶清除、髂骨螺钉联合腰椎椎弓根螺钉内固定、椎间隙及骨缺损区填充抗生素/磷酸钙骨粉;对照组21例采用前路病灶清除、自体髂骨植入和椎体钉棒固定。随访6个月~2年,平均12个月。 结果　术后治疗组3~6个月骨缺损区修复、植骨融合,平均融合时间4个月;对照组融合时间5~9个月,平均7个月。治疗组术后后凸成角0~4°,平均2°;对照组术后后凸成角3~11°,平均7°(P＜0.05)。疗效按Chen 等标准评定,治疗组优17例,良2 例,总优良率90.5%; 对照组优13例,良3例,总优良率76.2%。术后末次随访结果显示脊柱病变节段稳定,病例无复发。 结论　一期后路病灶清除、抗生素-磷酸钙骨粉填充椎间隙及骨缺损区、髂骨螺钉联合椎弓根螺钉内固定重建脊柱稳定的方法治疗腰骶椎结核是一种有效的手术方式。     

腰椎间盘突出症合并腰椎不稳治疗中Quadrant系统的应用

背景：腰椎间盘突出症手术后仍有10%-30%的患者症状缓解不明显,统称为腰椎术后失败综合征,而腰椎不稳是其中的一个重要原因。目的：探讨Quadrant系统下后路腰椎管减压、椎间盘摘除、椎间融合和椎弓根螺钉固定治疗腰椎间盘突出症合并腰椎不稳可行性和有效性。方法：2011年12月至2012年10月应用Quadrant系统行后路腰椎管减压、椎间盘摘除、椎间植骨加融合器置入、椎弓根螺钉固定治疗腰椎间盘突出症合并腰椎不稳患者62例,男38例,女24例。年龄37-69岁,平均年龄为53.7岁,治疗后随访评价治疗效果。结果与结论：手术时间为90-210 min,平均时间145 min。术中失血量50-300 mL,平均失血量120 mL。治疗后住院时间5-9 d,平均住院时间6 d。手术切口均一期愈合。随访3-10个月,平均7.2个月。JOA评分治疗前为(10.25±2.34)分,治疗后1个月及末次随访时分别为(18.31±3.12)分和(25.35±2.61)分。与治疗前比较均有显著性差异(P <0.01)。目测类比评分治疗前为(8.24±1.15)分,治疗后1个月及末次随访时分别为(2.97±1.12)分和(1.13±0.39)分。与治疗前比较均有显著性差异(P <0.01)。末次随访时采用改良Macnab标准评价临床效果,优53例,良9例。证明Quadrant系统下后路腰椎管减压、椎间盘摘除、椎间融合和椎弓根螺钉固定治疗腰椎间盘突出症合并腰椎不稳,是一种安全有效的微创治疗方法。     

Wnt-3a/eGFP双表达基因慢病毒载体的构建及其在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达

目的构建双表达基因慢病毒载体pLV.EX3d.P/puro-EF1A>Wnt-3a>IRES/eGFP,用携带目的基因Wnt-3a及示踪基因增强型绿色荧光蛋白(eGFP)的慢病毒转导大鼠骨髓间充质干细胞(rat bone marrow mesenchymal stem cells,rBMSCs),建立能够持续激活Wnt信号通路的体外细胞模型。方法基于GatewayTM技术构建双表达基因慢病毒载体,经293FT包装并释放出病毒转导rBMSCs,检测Wnt-3a以及β-catenin的表达水平。结果经测序证实目的基因Wnt-3a及示踪基因eGFP片段按正确方向重组入目的载体中。用含Wnt-3a/eGFP的病毒上清转导rBMSCs,转导率超过85%。RT-PCR证实rBMSCs-Wnt3a过表达wnt-3a和β-catenin。结论携带目的基因Wnt-3a及示踪基因eGFP的慢病毒可以稳定转染rBMSCs,构建了能够持续激活Wnt信号通路的体外细胞模型。     

碟脉灵注射液对坐骨神经损伤后NGF mRNA表达的影响

目的探讨碟脉灵注射液对大鼠坐骨神经损伤后神经再生的影响。方法将72只SD大鼠分为碟脉灵注射液组（A组）;神经生长因子组（NGF,B组）和对照组（生理盐水,C组）,每组24只。麻醉下暴露右侧坐骨神经,在坐骨结节远侧0.8cm处造成坐骨神经挤压伤,术后A组损伤处给予碟脉灵注射液,B组给予NGF,C组给予生理盐水。术后2d、7d、2w、4w、8w,取紧邻挤压伤部位远侧神经干,应用原位杂交的方法和图像分析处理系统定量测定神经组织中神经生长因子 mRNA（NGF mRNA）的表达。结果A组和B组大鼠坐骨神经挤压伤后第2周起,坐骨神经组织中NGF mRNA表达明显增加,至伤后第4周达到高峰,对照组NGF mRNA表达低,A、B两组与对照组之间的差异具有显著性（P〈0.05）。结论碟脉灵注射液可以促进挤压伤后大鼠坐骨神经NGF mRNA表达,其作用与NGF相仿。