检测3种发热性疾病IgM抗体的微孔板蛋白质芯片的研制

〔目的〕针对风疹、麻疹、流行性乙型脑炎3种病毒建立能同时1次检测3种病毒IgM抗体的微孔板蛋白质芯片。〔方法〕将风疹、麻疹和乙脑3种病毒的特异抗原阵列于PVDF微孔板内,建立了在1个反应孔内能同时检测风疹、麻疹、乙脑等3种IgM抗体的蛋白质芯片检测方法。以ELISA实验为对照,通过对239份临床血清样本的分析,系统评价了该芯片系统的灵敏性和特异性。〔结果〕该芯片检测风疹、麻疹、乙型脑炎病毒的灵敏性分别为91.67%、100%、94.12%,特异性分别为99.53%、99.50%、99.10%,与ELISA实验的总符合率依次为98.74%、99.58%、98.74%。〔结论〕本研究建立的微孔板蛋白质芯片检测方法具有准确、简便、快捷、高通量等特点,具有良好的应用前景。     

珠海口岸鼠间肾综合征出血热病毒的分子流行病学研究

[目的]了解珠海口岸地区鼠间肾综合征出血热汉坦病毒（HV）感染状况及其病毒型别。[方法]选取珠海8个口岸地区，从2006年5月-2007年4月采用鼠笼法捕鼠，计算鼠密度和鼠种构成；应用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）检测鼠血清汉坦病毒IgG抗体；应用HV型特异性引物进行RT—PCR扩增及核苷酸序列测定，并进行基因分型。[结果]共发现6种鼠类，分别为褐家鼠、黄胸鼠、小家鼠、黄毛鼠、板齿鼠、臭嗣鼯，以臭莉鼯为优势鼠种群（38．3％），其次为褐家鼠（26-3％）；鼠密度为4．10％；鼠血清抗体阳性率为2．65％（3／113）；鼠肺带病毒率为1．43％（2／140）；从2只褐家鼠的肺组织检测出汉城型汉坦病毒。[结论]珠海口岸鼠间存在着汉城型汉坦病毒，应继续加强口岸的肾综合征出血热预防控制工作的力度。     

珠海登革病毒分离株的型别鉴定与序列分析研究

[目的]了解珠海市部分人群和入境船员中登革热的流行情况和珠海市流行的登革病毒株的型别和序列特征。[方法]分别采用胶体金快速法、酶联免疫吸附试验(ELISA)对登革热抗体进行检测；采用细胞培养和逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)技术进行病毒鉴定,并对其结构蛋白基因序列进行克隆、测序及同源性分析。[结果]来自东南亚国家船舶的船员血清中登革病毒IgM抗体检出率为4．40％,IgG抗体为20．33％,其阳性样本经RT-PCR扩增,结果为阴性。而对本室保存的2001年珠海散发的登革热患者阳性血清,经用C6/36细胞培养分离出1株登革病毒,用登革病毒通用引物和Ⅱ型特异性引物,扩增出相应的片段,证实为登革Ⅱ型病毒；该分离株(DV2-1)的基因序列与其他9株登革Ⅱ型病毒进行系统发育关系的分析,结果显示分离株(DV2-1)与GD08/98株、FJ11/99株、16681株位于相近的分支,其中与1998年广东流行株GD08/98株系统进化关系最近。[结论]2001年珠海地区登革热的散发流行为登革Ⅱ型病毒所致,推测其可能是输入性传染。     

ERIC-PCR用于珠海口岸霍乱弧菌的分子分型研究

目的针对珠海口岸分离的霍乱弧菌进行分子分型研究。方法选择46株菌株(包括45株霍乱弧菌和1株弧菌属细菌),采用肠杆菌基因间重复一致序列—聚合酶链反应技术(Enterobacteial Repetitive Intergenic Consensuspolymerase chain reaction,ERIC-PCR)扩增细菌的基因组DNA,对产生的指纹图谱进行聚类分析。结果 ERIC-PCR绘制的基因组指纹图条带清晰可辨且有一定的多态性,聚类分析结果显示ERIC-PCR将46株菌株分为22个聚类群,其中从珠海口岸供澳水产品中分离的30株O1群霍乱弧菌非流行株被细分成12个聚类群。ERIC-PCR能有效区分O1群、O139群和非O1/非O139群霍乱弧菌血清群,也能完全区分霍乱弧菌流行株与非流行株。结论 ERIC-PCR是一种有效的、具有高识别力的霍乱弧菌分型方法。本研究获得的霍乱弧菌分子分型数据为珠海口岸霍乱的防控提供了有价值的基础资料。