对武汉市"看病难""看病贵"问题的原因分析及对策建议

近年来，“看病难”“看病贵”正逐渐成为中国老百姓所面临的普遍问题。2004年武汉市民反映最强烈的社会问题之一就是“看病难”、“看病贵”问题。根据第三次国家卫生服务调查分析数据：中国约有48．9％的居民有病不就医，29．6％的人应住院而不住院。2003年，武汉市武昌区参加了第三次国家卫生服务调查，结果发现将近有一半的患者有病不能及时就诊，特别是城市贫民看不起病，住不起院。这种状况不仅影响了群众身体健康，更不利于社会稳定。“看病难”、“看病贵”已成为构建和谐社会不可回避的一个重大问题。     

合理应用抗菌药物管理工作的经验探讨

目的：探讨合理使用抗菌药物的管理办法。方法：采用“医院感染控制系统工程论”对临床应用抗菌药物实行“监、控、管”三位一体化管理，加强宏观控制，制订合理使用抗菌药物规则及管理制度，实行院科两级考核，限制二线药使用权，全面监测临床用药状况，定期向临床反馈。结果：临床不合理使用抗菌药物现象得到了控制，科室年平均合作率为61．25％，全院一线、价廉、窄谱抗菌药物使用频率为80．56％，单用一种抗菌药物治疗者占75．70％，临床微生物送检率＞80％，月抗菌药物消耗量与药品总消耗量比值下降，最低为28．25％。结论：开展在职教育，实行限制性使用抗菌药物，加强“监、控、管”，是搞好合理应用抗菌药物的有效管理办法。     

体外诱导兔骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的研究

目的 :探讨体外培养骨髓间充质干细胞的方法以及定向诱导分化成心肌样细胞的条件。方法 :常规骨髓穿刺获取细胞悬液 ,应用Percoll液密度梯度离心以及贴壁培养技术分离间充质干细胞。使用不同浓度的 5 -氮胞苷定向诱导分化 ,应用透射电镜观察细胞超微结构和免疫细胞化学技术检测细胞特异性心肌收缩蛋白、舒张蛋白以及连接蛋白的表达。结果 :在 5 aza诱导后第 2 0天 ,约 3 0 %的细胞表达肌钙蛋白T、α 横纹肌肌动蛋白、肌浆网磷酸受钙蛋白和连接蛋白 43。透射电镜观察 ,胞浆内粗面内质网丰富 ,部分内质网正在合成肌丝。结论 :骨髓间充质干细胞具有分化为心肌样细胞的潜能。     

大蒜素对血管内皮细胞脂质过氧化损伤的保护作用

目的 :观察大蒜素对培养的人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)脂质过氧化损伤的保护作用。方法 :将HUVEC分成空白组、对照组和实验组 ,实验组分别用终浓度为 5 μg/ml、10 μg/ml、2 0 μg/ml、5 0 μg/ml的大蒜素培养液预处理后 ,再加入浓度为 0 .0 6mmol/L的联胺 37℃孵育 2h ,用扫描电镜观察细胞的形态 ,同时测定细胞培养液中一氧化氮 (NO)、丙二醛 (MDA)和超氧化物歧化酶 (SOD)的含量。结果 :对照组HUVEC明显受损 ,MDA含量增加 (P <0 .0 1) ,NO、SOD减少 (均为P <0 .0 1) ;实验组与对照组比较 ,HUVEC损伤明显减轻 ,MDA含量降低 (P <0 .0 1) ,NO增加 (P <0 .0 1)、SOD增加 (P <0 .0 1) ,且呈剂量依赖性。结论 :大蒜素对HUVEC脂质过氧化损害具有保护作用。     

缺血缺氧对骨髓间充质干细胞凋亡的影响

目的:研究缺血缺氧培养条件下,骨髓间充质干细胞(MSCs)生物学特点、细胞凋亡改变及对Caspase-3mRNA表达的影响。方法:体外培养SD大鼠MSCs,取生长活性较好的同代细胞进行研究。组1为对照组,常规培养;组2、组3、组4为实验组,分别予缺血缺氧处理2.5,4.5,6.5 h。倒置显微镜下观察MSCs形态,荧光显微镜下观察DAPI染色后胞核改变,Annexin V-FITC/PI双染法检测各组细胞凋亡率,RT-PCR技术分析Caspase-3mRNA表达水平。结果:倒置显微镜下MSCs形态纤长,多呈梭形、纺锤形、成纤维细胞样。对照组细胞核染色均匀,无明显凋亡改变;实验组MSCs细胞核出现染色质凝聚、边缘化,部分细胞核裂解为碎块的凋亡形态学改变。缺血缺氧处理2.5,4.5,6.5 h后MSCs凋亡率分别为(5.30±0.56)%、(9.83±0.87)%(、19.87±1.88)%,与对照组相比,P均<0.05。实验组细胞Caspase-3 mRNA表达较对照组明显上调,且随缺血缺氧时间的延长,其表达水平逐步增加。结论:缺血缺氧培养条件下,MSCs可出现凋亡改变,且细胞凋亡率随缺血缺氧时间的延长呈上升趋势。Caspase-3参与了MSCs的这一凋亡过程,且表达水平随缺血缺氧干预时间延长而逐渐增加。     

艾司洛尔在心肺复苏中的作用及机制

目的 探讨β1-肾上腺素能受体阻滞剂艾司洛尔在大约克猪室颤心脏停搏心肺复苏模型的作用以及潜在的机制.方法 50只健康成年雄性大约克猪在室颤4 min后根据药物干预随机分为假手术组(Sham组)、肾上腺素组(AD组)、肾上腺素和艾司洛尔联合用药组(AD+ES组),监测复苏后72 h心电图,比较各组的心率、血压、冠脉灌注压、自主循环恢复、心功能等指标.死亡动物迅速取材,应用实时荧光定量PCR技术、免疫印迹技术检测左室基底部外膜层心肌钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱδ(calcium/calmodulin dependent protein kinase Ⅱδ,CaMKⅡδ)的mRNA转录水平和蛋白表达水平.结果 两组均有一只动物未能成功复苏.在复苏过程中两组自主循环恢复率、冠脉灌注压的差异无统计学意义.与Sham组相比,AD组和AD+ES组复苏后心功能下降,但自主循环恢复后2 h,AD+ES组射血分数和心输出量显著高于AD组,更接近于Sham组.AD+ES组复苏后72 h恶性心律失常的发生率少于AD组,短期生存率高于AD组,心肌CaMKⅡδmRNA的相对表达量显著低于AD组[(1.76±0.12)vs(1.22±0.10),t=15.07,P=0.0001].两组复苏72 h内心源性死亡动物心肌CaMKⅡδ的mRNA相对表达量＞非心源性死亡动物＞72 h后存活动物.蛋白免疫印迹结果表明各组CaMKⅡδ蛋白表达水平的差异与mRNA表达水平的差异是一致的.结论 肾上腺素和艾司洛尔联合应用改善心肺复苏后心功能,减少恶性心律失常的发生,提高复苏后72 h生存率.下调CaMKⅡδ的mRNA和蛋白表达水平是艾司洛尔减少复苏后室性心律失常发生的潜在分子学基础机制.     

血红素氧合酶-1修饰骨髓间充质干细胞对大鼠梗死心肌炎症细胞因子及心室重构的影响

目的 探讨移植血红素氧合酶-1(Heme Oxygenase,HO-1)修饰的骨髓间充质干细胞(mes-enchymal stem cells,MSCs)对大鼠梗死心肌炎症细胞因子及心室重构的影响.方法 取大鼠骨髓,扩增培养MSCs;HO-1或GFP腺病毒转染、DAPI标记MSCs.结扎大鼠左前降支制造心肌梗死模型1 h后,分别将HO-1-MSCe、GFP-MSCs、PBS注射到大鼠心脏梗死区边缘,移植后第4天,Western Blot检测HO-1蛋白在梗死区边缘的表达,ELISA检测VEGF、bFGF、HGF的表达,RT-PCR检测炎症细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10 mRNA的表达.超声心动图检测大鼠心功能变化.移植4周后,梗死区心肌HE,Masson染色检测左室重构.结果 HO-1-MSCs移植组与GFP-MSCs、PBS移植组相比,HO-1蛋白在梗死区边缘稳定高效表达;细胞因子VEGF、bFGF、HGF表达增加(P<0.05);炎症细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达减少(P<0.05),而IL-10 mRNA表达增加(P<0.05);左室舒张末期和收缩末期内径缩短,左室前壁增厚,心室腔减小,梗死区血管密度上调,胶原形成明显减少.结论 HO-1-MSCS分泌多种生物活性细胞因子,协同HO-1蛋白改善炎症微环境,促进血管生成,减少胶原形成,从而延缓梗死区心窒重构,有效改善心功能.     

心肌内注射碱性成纤维细胞生长因子对兔骨髓间充质干细胞自体移植的影响

目的:了解骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)在心肌梗死的缺血心肌微环境中转化为心肌细胞并改善心功能的可行性,及同时心肌内注射碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)对此过程的影响。方法:将21只兔结扎左前降支制作急性心肌梗死模型,骨穿抽取骨髓,分离培养扩增MSCs。随机分成3组,术后2周进行心肌梗死瘢痕内移植5-溴脱氧尿嘧啶(bromodeoxyuridine,BrdU)标记的MSCs(加或不加bFGF)(MSCs组、MSCs+bFGF组),对照组注射培养基。心肌梗死手术前、手术后3d及移植后4周做超声心动图检测心功能,处死动物取左室标本作冷冻切片,采用免疫荧光法鉴定植入细胞,并检测VIII因子相关抗原以测量毛细血管密度。结果:两细胞移植组左室切片中均可见BrdU染色阳性细胞即植入细胞。对照组未见BrdU染色阳性细胞。VIII因子阳性内皮细胞计数表明MSCs组及MSCs+bFGF组毛细血管密度分别为每高倍视野29±8和31±6,显著高于对照组(21±5)(F=11.971,P<0.01),超声心动图检测证实MSCs组及MSCs+bFGF组移植后4周射血分数显著大于对照组(F=5.850,P<0.05),两细胞移植组间上述各项差异无显著性意义(P>0.05)。结论:缺血心肌内注射MSCs可依赖组织微环境转化为心肌细胞修复梗死心肌,促进血管新生从而改善心功能,可     

干细胞因子对骨髓间充质干细胞的促增殖分化作用

本研究探讨干细胞因子 (SCF)促进骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖及促进其向心肌细胞分化的作用。1.材料与方法 :将SD大鼠随机分成SCF组和对照组 ,每组 12只。SCF组用rhSCF(2 0 μg·kg-1·d-1)连续 5d皮下注射 ,对照组用等剂量的生理盐水连续 5d皮下注射 ,第 7天处死大鼠。取股、胫骨的骨髓液 ,加入培养基 ,接种于 35mm培养皿 ,CO2 培养箱培养。通过不断的换液与传代逐渐纯化扩增MSCs。流式细胞仪检测第 4代MSCs细胞周期。胶原酶加胰蛋白酶共同消化法分离乳鼠的心肌细胞 ,培养 3d。用DAPI(2 5 μg/ml)标记第 4代MSCs ,2h后将DAP…     

心肌直接接触诱导骨髓间充质干细胞成心肌样分化

目的 应用新生大鼠心肌细胞(CM)与骨髓间充质干细胞(MSCs)体外共培养的方法模拟心肌内环境,研究模拟环境下MSCs分化为CM的相关因素及其适宜条件。方法利用CM与MSCs不同比例直接接触和非直接接触共培养的方法模拟心肌微环境,分析MSCs形态和结构蛋白表达等方面的变化。结果直接接触共培养的MSCs与(2M同步搏动,表达心肌特异性肌钙蛋白T,且MSCs与CM等比例培养时分化率最高;而在缺乏直接接触条件下,单纯的CM条件培养液无法单独诱导MSCs的横向分化。结论与CM间的直接接触为诱导MSCs分化为CM的必需条件,共培养的细胞密度对于诱导分化率有影响,条件培养液则非关键因素。