新流行期汉城型汉坦病毒全S及部分L与M基因核苷酸序列测定及研究

目的：为获得SED型病毒基因组更为详尽的资料,也为局部爆发的原因提供科学的资料。方法：病毒分离、McAbs分型RT－PCR扩增及核苷酸序列测定。结果:首次测出我国SEO型病毒较为完整的S片段及部分L片段和M片段并与76－118、Seoul、SR11（在全S片段）;76－118、C4、L99、Seoul（在L片段）;10A、A9、C1－1、JB3、L99、SD227、SD70、SED（M片段）株核苷酸同源性进行比较,分别为64．2％、91．89％、96．8％及70．8％、72．0％、95．3％、95．9％及97．3％、63．0％、66．0％、93．0％、94．3％、96．3％、97．3％、94．7出的氨基酸同源性分别为：80．5％、95．4％、97．36％、及75．6％、75．1％、97．7％、97．36％及96．0％、78．8％、79．8％、94．9％、98．0％、97．0％、98．0、97．0％。结论：①不存在病毒基因组间的重排,即基因重排不是造成此次HFRS流行的原因。②SEO型病毒表现出明显的地理聚集现象。③选用与本地区流行的汉坦病毒型别相同的疫苗是行之有效的防止措施。     

Dig和Biotin标记的流行性出血热病毒cDNA探针敏感性比较

为评价异羟基洋地黄毒甙配基(Digoxigenin)探针(下简称Dig探针)与生物素(Biotin)探针的敏感性,本文采用斑点杂交及组织切片的原位杂交两种方法检测流行性出血热病毒(EHFV)核酸。将已知含量的EHFV cDNA点在硝酸纤维膜上,分别用Dig探针及Biotin探针与其杂交。用此方法Dig探针能测出0.1Pg EHFV cDNA,而Biotin探针只能测出1.0pg的FHFVcDNA。两种探针与含有EHFV长爪沙鼠脑的石蜡切片作原位杂交,结果Dig探针杂交阳性信号明显比Biotin探针强。表明Dig探针比Biotin探针敏感。     

用原位杂交检测肾综合征出血热病毒RNA

作者应用生物素标记的肾综合征出血热(HFRS)R_(22)株病毒M片段cDNA为探针,通过原位杂交检测培养细胞中HFRS病毒RNA,获得了满意的结果。     

肾综合征出血热病毒抗原性的单克隆抗体分析Ⅱ

采用汉坦病毒和日本B-1株病毒的多株McAb,对从中国流行性出血热疫区,比利时、瑞典流行性肾病流行区,以及美国、英国等地分离的20株肾综合征出血热病毒的抗原性进行比较分析,可清楚地将上述毒株分为Ⅰ,Ⅱ和Ⅲ型,大致对应于按宿主动物来源分型的姬鼠型,大鼠型和(?)型.     

与流行性出血热有关动物血清中IgG之间的抗原关系及其应用

目前进行流行性出血热(EHF)宿主动物血清流行病学调查,多采用双层间接免疫荧光法,但此法需制备相应的动物IgG的抗血清为中间抗体。EHF流行病学调查涉及的动物种类较多,分别制备各种动物IgG的抗血清困难较大。本文研究了与流行性出血热有关的多种动物血清IgG之间的交叉抗原关系,以便选用尽可能少的IgG抗血清检查宿主动物中的抗EHF病毒抗体,以利推广应用。现将试验结果报告如下。     

汉坦病毒A9株M基因片段全长cDNA克隆及其在痘苗病毒中的瞬时表达

采取反转录一聚合酶链反应（ＰＣＲ），分３个片段扩增Ｉ型汉坦病毒（野鼠型）中国毒株Ａ９株Ｍ基因片段，分别克隆入ＰＧＥＭ－Ｔ载体中。选择３个正向插入的ＴＡ９ＩＢ、ＴＡｇＣＤ、ＴＡｇＥＡ克隆，选用ＣｌａＩ、ＥｃｏＲＶ进行酶切、连接，获得了１个在ＰＧＥＭ－Ｔ载体中插入３．６ｋｂ的Ａｇ株Ｍ基因片段ｃＤＮＡ克隆，酶切图谱分析证实播入片段正确。将Ａ９Ｍ片段在痘苗病毒／Ｔ７噬菌体ＲＮＡ聚合酶瞬时（Ｔｒａｎｓｉｅｎｔ）表达系统中进行表达，用抗汉坦病毒糖蛋白单克隆抗体进行免疫荧光检测，观察到很强的特异性荧光，证明ＡｇＭ基因ｃＤＮＡ能进行表达。     

以新型杆状病毒载体在昆虫、哺乳动物细胞中表达克里米亚-刚果出血热病毒核蛋白基因

目的 构建可以在哺乳动物细胞中高效表达的新型杆状病毒载体，并利用其将克里米亚—刚果出血热病毒(CCHFY)中国分离株(新疆出血热病毒，xHFY)BA88166的核蛋白(NP)基因在昆虫和哺乳动物细胞中进行表达。方法 将人巨细胞病毒(CMv)立即早期(IE)启动子连接至杆状病毒载体PFastBacl多角体启动子下游形成新载体PCB1，然后将xHFY NP基因克隆至该载体，通过重组质粒转染和病毒感染，检测其在哺乳动物细胞(COS—7和vero)及昆虫细胞中的表达。结果 连接至PCB1的xHFV NP基因均能在相应的细胞中获得良好表达；以重组杆状病毒感染的vero细胞可以作为抗原检测xHF血清，与ELISA的检测结果完全一致，并与临床诊断有很好的平行性。结论 新型杆状病毒载体能够驱动外源基因在昆虫和哺乳动物细胞中高效表达，不仅能方便快速地制备诊断抗原，还具有发展重组病毒疫苗和基因治疗的潜力。     

野鼠型与家鼠型出血热不同临床病型病人系列血清中特异性抗体(IgA、IgM和IgG)的比较研究

我国流行性出血热(FHF)主要分野鼠型和家鼠型二种,两型EHF 的宿主动物、流行病学特征和临床表现都有不同[1～5],两型EHF 病毒的抗原性亦存在差异[6]。我们调查了两型EHF 不同临床病人系列血清中特异性IgA、IgM 和IgG 抗体的产生时间、高峰期、高峰期的抗体水平和持续时间,并比较不同临