mm23-H1基因点突变对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981的GSK-3β激酶活性的影响

背景与目的 我们的前期研究结果表明nm23-H．基因的肺癌转移抑制作用可能与上调Wnt信号通路中关键激酶GSK-3β的活性、进而抑制Wnt信号通路相关。本研究的目的是探讨nm23-H1点突变对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中胞质和胞核的GSK-3β激酶活性的影响，为阐明nm23-H1基因调控肺癌转移相关信号传导通路的分子机制提供实验依据。方法 将原代人低转移大细胞肺癌细胞株NL9980、原代人高转移大细胞肺癌细胞株L9981、空载体转染细胞株L9981-pEGFP、稳定转染nm23-H1基因的细胞株L9981-nm23-H1-pEGFP以及稳定转染在44、96、118、120号位点发生突变后的nm23-H1基因的转基因肺癌细胞株L9981-nm23-H1^S44A-pEGFP、L9981-nm23-H1^P965-pEGFP、L9981-nm23-H1H118F-pEGFP和L9981nm23-H1^S120G-pEGFP作为研究对象，应用免疫共沉淀同位素闪烁计数法测定上述肺癌细胞株胞质和胞核中的GSK-3B激酶活性。结果 nm23-H1基因发生点突变后，所有转基因肺癌细胞株细胞胞质和胞核中的GSK-3β活性均较突变前有所下降。L9981-nm23-H1^S44A-pEGFP、L9981-nm23-H1^P96S-pEGFP、L9981-nm23-H1^H18F-pEGFP、L9981-nm23-H1S120G-pEGFP分别与L9981-nm23-H1-pEGFP比较，胞质与胞核中GSK-3β激酶活性均存在显著性差异（P〈0．05），其中L9981-nm23-H1^P96S-pEGFP与L9981-nm23-H1-pEGFP胞质中GSK-3β活性存在极显著差异（P〈0．01），L9981-nm23-H1^S44A-pEGFP,L9981-nm23-H1^P96S-pEGFP和L9981-nm23-H1H118F-pEGFP与L9981-nm23-H1-pEGFP的胞核中GSK-3B活性存在极显著差异（P％0．01）。结论 ①nm23-H1基因突变能显著影响其对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981胞质和胞核中GSK-3B激酶活性的调控作用；②nm23-H1基因可能通过调控L9981中GSK-3B激酶活性来抑制L9981细胞株中Wnt信号传导。     

LAPTM4B基因多态性与肺癌易感性的关系

背景与目的已有的研究结果显示溶酶体相关4次跨膜蛋白质β（lysosome-associated protein transmembrane 4 beta，LAPTM4B）在肿瘤发生中发挥重要的作用，研究认为LAPTM4B的基因型＊2／＊2与肝癌易感性密切相关。本研究旨在探讨LAPTM4B基因多态性与肺癌易感性的关系。方法以病例对照研究的方法，用基于特异性引物的PCR对131例非小细胞肺癌患者和104例正常人进行LAPTM4B基因分型，用χ^2检验分析肺癌组和对照组基因型频率和其它参数的分布。结果LAPTM4B的等位基因＊1和＊2在肺癌组中的频率分别为74．8％和25．2％，在对照组分别为72．1％和27．9％，二组间等位基因分布频率比较差异无统计学意义（P=0．510）。LAPTM4B的基因型＊1／＊1，＊1／＊2和＊2／＊2在肺癌组分别为53．4％、42．7％和3．8％，在对照组分别为54．8％、34．6％和10．6％，两组间三种基因型分布频率比较差异无统计学意义（P=0．087）。LAPTM4B基因型分布与患者的病理类型和临床分期等均无明显关系。结论本研究未观察到LAPTM4B基因多态性与肺癌易感性之间存在统计学相关关系。     

小鼠Ras激酶抑制剂(KSR)基因氨基端和羧基端真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达

背量与目的已有的实验证据表明，Ras激酶抑制剂（kinase suppressor of Ras，KSR）的功能主要是作为一个支架蛋白组装MAPK及其上游调控子形成多蛋白的复合体。但KSR是否存在激酶活性，一直是争论的焦点。本研究的目的是构建小鼠KSR基因氨基端（N-KSR）和羧基端（C-KSR）的真核表达载体，并观察其在293T细胞中的表达。方法通过PCR方法扩增N-KSR和C-KSR目的片段，利用基因重组技术构建pCMV-Tag2b-N－KSR和pCMV-Tag2b-C－KSR真核表达载体，并进行酶切和测序鉴定。鉴定正确的克隆瞬时转染293T细胞，通过Western blot方法检测目的蛋白的表达。结果通过酶切和测序鉴定，pCMV-Tag2b-N-KSR和pCMV-Tag2b-C-KSR真核表达载体序列正确，编码框正确。转染后的293T细胞经Western blot检测，能够表达目的蛋白。结论成功构建了pCMV-Tag2b-N-KSR和pCMV-Tag2b-C-KSR真核表达载体并可在293T细胞中表达，为以后的研究奠定了基础。     

用健康促进理念搞好部队皮肤病防治

按照总后卫生部“十五”重点课题“军事训练中皮肤病调查和防治研究”的计划,近3年我们对海、陆、空三军3万余名指战员进行了军事训练前后皮肤病患病情况调查。结果表明：我军的卫生条件有所改善,但在现代高技术武器装备的高强度和高难度的军事训练中皮肤病的患病率有所增高,病谱也有些改变。例如我们调查空降兵、基础飞行学员中皮肤病患病情况为;     

Dnmt1基因对胃癌细胞株AGS细胞增殖凋亡的影响

目的:利用RNA干扰(RNAi)技术,以Dnmt1(DNA methyltransferase 1)为靶基因,设计构建重组体pshRNA-Dnmt1,研究其对胃癌AGS细胞增殖凋亡的影响.方法:设计shRNA的寡核苷酸片断,再克隆至载体pTZU6 1中构建重组体pshRNA-Dnmt1,转染胃癌细胞株AGS,用Western Blot检测DNMT1蛋白水平变化,用RT-PCR法评估mRNA水平,MTT法动态监测活细胞数,AO/EB法、电镜和TUNEL观察其促凋亡作用.结果:成功构建重组质粒pshRNA-Dnmt1 后,进行序列分析得到确证. RT-PCR检测结果证实: 重组质粒pshRNA-Dnmt1 对胃癌AGS细胞中Dnmt1基因的转录有着明显抑制作用,转染后24 h抑制率在21.63%左右;48 h为52.97%;72 h为72.06%. Western Blot检测结果表明:pshRNA-Dnmt1 转染AGS细胞后24 h出现DNMT1蛋白表达量减少,抑制率为28.24%;48 h为68.54%;72 h为81.47%. MTT结果提示: 转染后24, 48和72 h细胞数存活率为对照组的79.49%, 51.63%和39.16%. AO/EB法、电镜和TUNEL都看见大量典型的凋亡和坏死细胞,转染后48 h的细胞凋亡率由对照组的5%上升为35%左右.结论:重组质粒pshRNA-Dnmt1 能特异有效地抑制胃癌细胞株AGS内Dnmt1基因的表达,能抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,从而为肿瘤的基因治疗开辟了新途径.     

生物反馈治疗银屑病的探讨

近年来国内外一些研究已证明银屑病属于心身疾病范畴,并采用催眠法及生物反馈治疗取得一定效果[1~3]随着生物-心理-社会现代医学模式的确立,心理治疗尤为重要.生物反馈疗法是心理治疗的一种行为治疗手段,从1990年1月至1892年3月我们应用此疗法治疗了31例寻常型银屑病患者,取得较满意的疗效,现报道如下.     

小剂量性激素治疗痤疮80例

我们从1988年6月~I990年9月对44例伴有月经周期紊乱或乳房发育较差的女性痤疮患者采用小剂量己烯雌酚人工月经周期调节治疗;对36例胡须、腋毛稀少的男性痤疮患者进行小剂量丙酸睾丸酮的短期治疗,取得较满意的结果,现报告如下.     

儿童持久性隆起性红斑一例

患儿女,５岁,头面部、上胸背及四肢伸侧反复出现暗红色斑片、斑块及结节一年。用地塞米松治疗有效,但停药后即复发。近日皮损加重,自觉疼痛伴发热,于１９９４年９月１日入院治疗,初步诊断为持久性隆起性红斑。入院时：Ｔ３８℃,痛苦面容,皮损呈多形性,双耳廓红肿,有硬韧感。面部、胸背部上端、双手指背及四肢伸侧有多个圆形或椭圆形暗红色斑片、斑块。斑块边缘隆起,境界清楚,触之硬韧,分布对称。红肿显著的皮损有阵发性疼痛,部分皮损中央有轻度萎缩及色素沉着。实验室检查：ＷＢＣ１２．８×１０９／Ｌ,ＥＳＲ１０５ｍｍ／１…     

银屑病患者与正常人表皮和真皮的cAMP与cGMTP含量及其意义

本文报告了用放射免疫分析法测定31例银屑病患者和27例正常人的表皮和真皮的环化核普酸含量.还测定其中6例银屑病患者治愈后表皮环化核苷酸含量.     

砷角化症合并多发性皮肤癌一例报告

患者男,38岁,1984年9月初诊.因患寻常型银屑病自1973年7月至1978年9月,6年间断服用“灭癣丸”万余丸.每丸含三氧化二砷1mg,共服砷化物10余克.