氧化性低密度脂蛋白诱导浓度和时间对肝癌HepG2细胞胆固醇积累的影响

目的 探讨氧化性低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)促进肝癌HepG2细胞中胆固醇蓄积的最适浓度和最适作用时间。方法 将肝癌HepG2细胞接种于含10%的胎牛血清和1%双抗(青霉素、链霉素)的高糖DMEM培养基中,置于5%浓度的CO₂培养箱中培养,每3天进行一次细胞传代,取对数增长期的细胞用于实验研究。实验分为5组,空白对照组和ox-LDL组(75 mg/L、50 mg/L、25 mg/L、12.5 mg/L)。每组9个样,分3个小组,每个小组3个样,3个小组分别培养24 h、48 h和72 h后测定细胞内胆固醇的积累并用油红O染色法定性观察。应用统计学软件SPSS Statistics 17.0进行t检验分析,数据以均数±标准差表示,对胆固醇定量检测结果进行统计分析,当P<0.05时认为差异具有统计学意义。结果 与空白对照组比较,经过ox-LDL不同浓度和不同时间诱导后,总胆固醇含量(total cholesterol,TC)、游离胆固醇含量(free cholesterol,FC)及胆固醇酯与总胆固醇比值(the ratio of cholesterol ester and total cholesterol,CE/TC)均有一定程度的升高。尤以50 mg/L ox-LDL诱导48 h时[空白对照组：TC (98.21±2.85) mmol/L、FC (56.25±0.55)mmol/L、CE/TC 42.64±1.50; ox-LDL组：TC (146.7±3.59)mmol/L、FC (79.9±0.55) mmol/L、CE/TC 49.9±3.49]变化最明显。与空白对照组比较,ox-LDL组胞浆内有不同程度红色脂滴存在,且发现ox-LDL 50 mg/L作用48 h时,因含有过多脂滴而形成了红色聚集的脂团,而未加ox-LDL的空白对照组细胞内无明显脂滴颗粒。结论 ox-LDL不同诱导浓度和不同诱导时间对肝癌HepG2细胞内胆固醇(TC 、FC 、CE/TC)积累都有促进作用,而ox-LDL对肝癌HepG2细胞内胆固醇积累的影响最适浓度和时间为50 mg/L诱导48 h。     

EBV相关性胃癌患者血浆miRNAs表达谱的研究

目的探讨EBV相关性胃癌(EBV-associated gastric carcinomas,EBVaGCs)患者血浆中EBV-miRNAs表达水平及其临床意义。方法收集226例胃癌患者和56例非EBV感染相关的肿瘤患者外周血,采用RT-PCR检测EBV-DNA,荧光定量Real-time RTPCR分析EBV-miRNAs表达谱,结合组织病理和影像学检查结果分析这些miRNAs的临床意义。结果在胃癌患者中,有177例EBV阴性胃癌和49例EBVaGCs患者。在EBVaGCs中,EBV-miR-BART5的表达水平是RNU6B的3.5倍,而EBV-miR-BART1、miRBART1-2、miR-BART7及miR-BART10分别为2.4、2.0、3.1、2.9倍。EBV-miRNAs在低分化胃癌中均高表达,EBV-miR-BART5和miR-BART7在中高分化胃癌表达差异具有统计学意义(P0.05),但EBV-miR-BART1、miR-BART1-2和miR-BART10表达差异无统计学意义(P0.05)。85.7%(42/49)EBVaGCs患者二程化疗后症状缓解,12.2%(6/49)局部侵袭,2.0%(1/49)淋巴结转移;而64.4%(114/177)EBV阴性胃癌患者二程化疗症状缓解,20.3%(36/177)局部侵袭,10.7%(19/177)淋巴结转移,4.5%(8/177)远处转移。结论 EBV-miR-BART5和miR-BART7可作为EBVaGCs无创诊断、治疗和预后的生物标志物;EBVaGCs患者预后比EBV阴性胃癌好。     

EB病毒微小RNA在鼻咽癌患者中表达的意义

目的研究探讨EB病毒微小RNA在鼻咽癌中的表达情况,以便于找到诊断和防治鼻咽癌的生物标志物。方法选取45例鼻咽癌患者和37例鼻咽炎患者为研究对象,借助实时荧光定量PCR技术并以miR-U6作为内参物,对上述疾病病灶中的EB病毒miRNAs(包括EBV-miR-BART4*和EBV-miR-BART18-3P)的表达情况进行研究分析。结果经统计分析可知,EB病毒的两种miRNAs在鼻咽炎组织中的表达数值分别是(28.43±3.16)和(26.73±3.08),而在鼻咽癌组织中的表达数值分别是(40.51±4.82)和(41.66±3.46),可见其在鼻咽癌组织中的表达水平明显高于鼻咽炎组织,两者具有显著的差异性(P<0.01)。结论 EB病毒微小RNAs可通过较显著的表达水平导致鼻咽癌的发病和病灶转移,因此可将其作为鼻咽癌诊断防治中潜在的生物分子标志物。     

莪术油对肺腺癌A549细胞周期及组织蛋白酶K表达的影响

目的 :探讨莪术油对A549细胞增殖抑制作用及组织蛋白酶K表达的影响。 方法 : MTT法观察莪术油对A549细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测细胞周期阻滞;Western blot检测组织蛋白酶K的表达情况。 结果: 莪术油作用后①MTT法结果显示莪术油在60 mg ·L^-1~200 mg ·L^-1对A549细胞增殖有抑制作用, IC50随作用时间的延长显著前移。②流式细胞术结果出现凋亡峰,与未处理组细胞相比,给药组细胞G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例降低。③Western blot结果显示,莪术油处理细胞24 h后,组织蛋白酶K表达明显上调,100 mg ·L^-1达最大值。 结论 : 莪术油能抑制肺腺癌A549细胞增殖,阻滞细胞周期的作用,其机制可能与上调组织蛋白酶K表达水平有关。     

何首乌不同提取方法的药效学研究

何首乌是常用中药,也是贵州省地道药材,资源丰富,产量高,质量优良.首乌主要含卵磷脂、蒽醌类、多糖类化合物等.主要药理作用有:降血脂和抗动脉粥样硬化作用,对心血管系统的作用(减慢心率、增加冠脉流量等),抗衰老作用,对抗环磷酰胺所致的白细胞下降等作用.关于何首乌及其复方的研究报道相当多,本文着重从何首乌及其复方不同提取物的药效学研究方面进行简要综述.     

黄精首乌有效部分均匀设计组合对高脂血症大鼠抗脂质过氧化的影响

近年来研究表明,黄精、首乌中主要含有多糖、蒽醌等有效成分,且很多单味中药及其多糖具有抗自由基作用[1～3].但将有效部分提取出来,通过均匀试验设计,研究其不同组合在抗氧化酶活性方面的改变,而达到定向地改进中药提取工艺并使有效部分达到最佳组合的研究尚不多见.     

新疆红花挥发油GC-MS分析及药理作用的分子机制

目的:分析新疆红花挥发油化学成分及药理作用的分子机制。方法:采用水蒸气蒸馏(hydrodistillation,HD)法提取新疆红花中的挥发油,通过气相色谱-质谱(gas chromatography-mass spectrometer,GC-MS)联用仪鉴定其化学成分,采用峰面积归一化法测定其化学成分的相对含量。基于中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)在线下载挥发油活性成分(相对含量1)的MOL2结构,建立小分子配体库,通过Swiss Target Prediction进行靶标预测,构建主要化学成分-靶标网络模型,筛选关键蛋白,基于admet SAR和Swiss ADME对CYP450亚酶活性进行预测。通过比较毒理基因组学数据库(comparative toxicogenomics database,CTD)筛选关键基因参与的疾病,构建关键基因-疾病网络模型。关键蛋白验证基于系统对接(Systems Dock)在线软件,将新疆红花挥发油部分化学成分与羧酸酯酶1(CES1),碳酸脱水酶1(CA1),碳酸脱水酶2(CA2)进行能量匹配。结果:通过质谱库及文献检索确定48个化合物,主要化学成分(7,9-二十二烷酮、石竹烯氧化物、二十七烷、二十六烷、六氢法呢基丙酮、二十九碳烷、二十五烷、二十四烷、二十三烷)占挥发油总量的32.787%,9个化学成分预测出135个靶标蛋白,CES1,羧酸酯酶3(CES3),CA1,CA2为关键靶标,主要在肿瘤、肝病、肺病等疾病中发挥作用。基于Systems Dock验证关键靶标蛋白,发现关键成分与重要靶点的结合活性较好。结论:该研究结果初步预测出新疆红花挥发油发挥药理作用的靶标蛋白,为其产品的开发和应用提供理论依据。     

苗药理气活血滴丸对大鼠慢性心力衰竭的保护作用

目的:探讨苗药理气活血滴丸对异丙肾上腺素(ISO)诱导大鼠慢性心力衰竭(CHF)的保护作用。方法:将雄性SD大鼠随机分为2组:对照组和CHF模型组,利用皮下注射异丙肾上腺素的方法建立大鼠CHF模型。4周建模成功后,将大鼠随机分为模型组、理气活血滴丸低、中、高(43. 75、87. 50、175. 00 mg/kg/d)剂量组和依那普利(10mg/kg/d)组。药物干预4周后,采用酶联免疫法检测血清BNP水平,BL-420S生物机能实验系统监测大鼠左心室功能,TUNEL法分析心肌细胞凋亡情况。结果:与模型组比较,理气活血滴丸中、高剂量及依那普利组大鼠血清BNP水平、左心室舒张末压(LVEDP)和心肌细胞凋亡率显著降低,左心室收缩压(LVSP)、左心室内压最大变化速率(±dp/dtmax)显著升高。结论:理气活血滴丸对异丙肾上腺素致大鼠CHF的保护作用与其改善左心室功能及抑制心肌细胞凋亡有关。     

苗药理气活血滴丸对心肌缺血再灌注大鼠左心室肌细胞损伤的防护作用

目的:研究苗药理气活血滴丸对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠心肌的防护机制。方法:将SD大鼠随机分为假手术组、MIRI模型组、理气活血滴丸(175 mg/kg)组和辛伐他汀(40 mg/kg)组。给药组连续灌胃10天,假手术组和MIRI模型组大鼠灌胃等量的生理盐水。末次给药45 min后采用结扎冠状动脉左前降支方法复制MIRI大鼠模型。复灌后监测左心功能;取左心室利用透射电镜观察心肌细胞超微结构;TUNEL-POD法检测心肌细胞凋亡;荧光素酶法检测心肌组织ATP含量;提取心肌细胞线粒体;硫代巴比妥酸法测定心肌细胞线粒体丙二醛(MDA)含量;WST-8法测定线粒体超氧化物歧化酶(SOD)活性情况。结果:与MIRI模型组比较,理气活血滴丸(175 mg/kg)组大鼠左心功能和左心室肌细胞超微结构明显改善;线粒体损伤减轻;细胞凋亡发生率减少;心肌组织ATP含量升高;心肌细胞线粒体MDA含量降低;SOD活性升高。结论:理气活血滴丸对MIRI模型大鼠的防护机制与其改善左心室肌细胞超微结构、抑制细胞凋亡和减轻线粒体氧化损伤有关。