重组抗B细胞淋巴瘤嵌合抗体的构建及鉴定

目的:构建重组抗B细胞淋巴瘤嵌合抗体SM03,并进行特性鉴定。方法:分别克隆鼠抗人CD22单抗轻/重链可变区基因VL/VH,构建重组SM03嵌合抗体轻链表达载体(SM03pEkappa)和重链表达载体(SM03pEgamma)。转染细胞经选择培养和克隆化,筛选出高效表达细胞株。采用SDS-PAGE、ELISA、流式细胞仪和免疫组化分析,检测纯化产物的相对分子质量、特异性和亲和力、淋巴瘤细胞毒效应,以及人体组织交叉反应性。结果:构楚了重组人CD22嵌合抗体SM03表达系统,SM03嵌合抗体相对分子质量约1．5×10~5,还原为轻链和重链两条带,相对分子质量分别为2．7×10~4和5．0×10~4。SM03嵌合抗体特异于B细胞CD22抗原,对恶性淋巴瘤细胞具有生长抑制效应。结论:成功构建重组人CD22单克隆抗体,为恶性B细胞淋巴瘤的临床治疗和应用奠定了基础。     

番石榴叶天然成分抑制3T3-L1细胞成脂分化的研究

目的观察番石榴叶天然成分槲皮素、槲皮素-3-O-(6″-芥子酸)-β-D-吡喃半乳糖苷(Quercetin-3-O-(6″-eru-coyl)-β-D-galactopyranoside,QEG)及槲皮素-3-O-(6″-阿魏酸)-β-D-吡喃半乳糖苷(Quercetin-3-O-(6″-feruloyl)-β-D-ga-lactopyranoside,QFG)对小鼠3T3-L1细胞成脂分化的影响。方法诱导3T3-L1细胞成脂分化,油红O染色法测定脂滴含量,实时定量PCR(Q-PCR)检测丝氨酸蛋白酶脂肪因子adipsin,CCTTA增强子结合蛋白α(C/EBPα)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、雌激素受体α(ERα)和雌激素受体β(ERβ)mRNA表达,Western blot检测C/EBPα和PPARγ的蛋白表达。结果 QFG和槲皮素都能抑制3T3-L1细胞成脂分化,而QEG对此没有作用。QFG能够剂量依赖性地抑制成脂分化,并且降低adipsin、C/EBPα和PPARγmRNA及后两者蛋白表达,而对ERα和ERβmRNA的表达没有影响。结论 QFG抑制细胞成脂分化的能力比槲皮素强,其作用主要是通过抑制C/EBPα和PPARγ的表达而实现的,而且可能与雌激素受体途径无关。     

格列吡嗪片生物等效性的研究

目的 :比较两种格列吡嗪片剂在健康志愿者体内的药代动力学及生物等效性 ,确保临床用药质量。方法 :12例男性健康志愿受试者 ,采用标准两周期交叉设计自身对照试验法 ,单剂量口服进口和国产格列吡嗪片 10 mg,以高效液相色谱法测定血浆中格列吡嗪的经时浓度 ,以双单侧 t检验统计法比较两种格列吡嗪片之间的差异。结果 :两种格列吡嗪片在健康志愿者体内的药时曲线均符合一级吸收的单室模型 ,国产格列吡嗪片主要的药动学参数 Tmax、Cmax和 AUC( 0 - 1 7)分别为 (2 .5 8± 0 .5 1) h、(6 0 9.6 9± 112 .89) ng/ml和 (44 99.79± 96 9.0 2 ) ng· h/ml;进口格列吡嗪片主要的药动学参数Tmax、Cmax和 AUC( 0 - 1 7) 分别为 (2 .5 8± 0 .5 1) h、(5 6 8.83± 10 1.92 ) ng/ml和 (410 8.31± 72 4 .86 ) ng· h/ml。两种格列吡嗪片主要药动学参数间均无统计学意义 (P>0 .0 5 ) ,国产格列吡嗪片相对生物利用度 F为 10 9.5 %± 4 .5 %。结论 :两种格列吡嗪片在健康志愿者体内具有相同的生物效应 ,可确保临床用药的安全有效。     

1768例中药制剂不良反应报告分析

目的了解本地区中药制剂不良反应/事件总体发生情况、特点及规律,加深对中药不良反应的认识,促进中药合理应用。方法采用回顾性研究方法。从广东省药品不良反应监测中心数据库下载2008～2009年深圳市各单位上报的不良反应/事件报告表,筛选出中药制剂不良反应/事件报告表进行分类统计、分析。结果共筛选出中药制剂不良反应/事件报告1 768例,涉及368个生产厂家的468个中药制剂品种。61个中药注射剂品种导致ADR 854例次,占总例数的48.30%。注射剂是导致中药不良反应/事件的主要剂型且绝大多数采用静脉滴注给药方式;其次是357种不同剂型的口服制剂,占45.59%。累及的器官/系统主要为皮肤及其附件,其次为消化系统、全身性损害、神经系统等。新的不良反应/事件1 144例次,占64.71%,绝大多数转归良好。结论中药制剂不良反应/事件具有普遍性;应加强对中药制剂,特别是注射制剂不良反应/事件的监测,临床应减少或避免中药注射剂的的使用,特别是在儿童人群中的使用;有关部门应加强对中药制剂说明书的审核、监管,保障患者用药安全。     

Notch3在鼻咽癌中的基础研究及临床意义

目的：探讨Notch3是否可以作为判断鼻咽癌复发、转移和化疗预后的分子生物学指标。方法 West-ern blot检测鼻咽癌细胞系CNE2沉默Notch3的效果,球形成实验分析沉默Notch3对癌症干细胞的影响;通过Western blot检测上皮细胞标志E-cadherin和间质细胞标志Vimentin的表达分析沉默Notch3对鼻咽癌细胞EMT的影响;检测鼻咽癌细胞上清中乳酸的浓度分析在鼻咽癌中沉默Notch3对糖酵解的影响;Western blot检测顺铂作用后Notch3的表达,判断Notch3是否可以作为鼻咽癌对化疗药物敏感的指标。结果Western blot结果显示寡核苷酸干扰序列可以明显抑制沉默鼻咽癌细胞系CNE2中Notch3的表达。通过球形成实验发现在鼻咽癌细胞系CNE2中沉默Notch3后球形结构明显增加,说明沉默Notch3后干细胞增加。通过Western blot发现鼻咽癌细胞系CNE2沉默Notch3后上皮细胞标志分子E-cadherin表达减少,间质细胞标志分子Vimentin表达升高,说明沉默促进鼻咽癌细胞EMT转化。通过检测上清液中乳酸的浓度发现鼻咽癌细胞CNE2发现沉默Notch3后乳酸浓度升高,表明糖酵解增加。 Western blot发现化疗药物顺铂作用鼻咽癌细胞系CNE2后Notch3表达减少,表明Notch3可以作为判断化疗药物有效的指标。结论在鼻咽癌细胞系CNE2中沉默Notch3后癌症干细胞增加,促进EMT转换,糖酵解增加。化疗药物顺铂作用CNE2细胞后Notch3表达减少。因此,Notch3可以作为判断鼻咽癌复发、转移和化疗预后的分子生物学指标。     

MAPK信号通路对蟾蜍灵抑制Jurkat细胞增殖及诱导其凋亡的影响

目的研究丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路对蟾蜍灵(Bufalin)抑制急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖及诱导细胞凋亡的影响,初步探讨MAPK在蟾蜍灵治疗急性淋巴细胞白血病中的作用。方法WST-1法检测细胞的增殖活力,流式细胞术分析细胞凋亡。结果蟾蜍灵作用Jurkat细胞48 h,抑制细胞增殖50%的药物浓度(IC50)为44 nmol/L;5 nmol/L及以上蟾蜍灵以剂量依赖方式抑制Jurkat细胞增殖;20 nmol/L蟾蜍灵分别联合PD98059、SP600125,可显著增加对Jurkat细胞增殖的抑制,促进细胞凋亡;20 nmol/L蟾蜍灵联合SB203580作用于Jurkat细胞,可显著减少对Jurkat细胞增殖的抑制但对其凋亡无显著影响。结论 MAPK信号通路与蟾蜍灵抑制急性淋巴白血病Jurkat细胞增殖及诱导凋亡有相关性,表现为ERK和JNK促进增殖、抑制细胞凋亡;p38MAPK抑制增殖,但对凋亡无明显影响。     

反相高效液相色谱法测定风寒感冒颗粒中盐酸麻黄碱和伪麻黄碱的含量

目的建立RP-HPLC法测定风寒感冒颗粒中盐酸麻黄碱和伪麻黄碱的含量。方法以盐酸麻黄碱为对照,采用高效液相色谱法,色谱柱Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5μm);检测波长为207 nm;以乙腈-0.1%磷酸溶液(10∶90)为流动相;流速为1.0 mL.min-1。结果盐酸麻黄碱在43.98~703.68μg线性良好(r=0.999 9,n=5),平均加样回收率为100.433%,RSD为0.915%(n=9)。结论本方法简单、准确,可用于产品的质量控制。     

栀子苷降糖作用及相关机制研究

目的 探讨栀子苷对糖尿病小鼠的降糖作用及机制。方法 C57BL/6J小鼠通过一次性注射90 mg/kg链脲佐菌素（STZ）后结合4周喂养高脂食料建立糖尿病小鼠模型。实验小鼠随机分为对照组、模型组、栀子苷（100 mg/kg）治疗组。ig给药,每日1次,定期检测小鼠空腹血糖及体质量。治疗30 d后,检测小鼠空腹血浆胰岛素和口服糖耐量（OGTT）变化。采用胰岛素及Ki67抗体对小鼠胰腺组织切片进行免疫荧光染色,观察胰腺组织形态学的改变,以及胰岛β细胞增殖情况;Western Blotting方法检测小鼠肝脏组织中p-Akt、p-GSK-3β蛋白表达水平。结果 与模型组相比,栀子苷治疗组小鼠血糖水平降低,体质量下降,而血浆胰岛素水平升高,OGTT有所改善;胰腺组织切片免疫荧光染色结果表明,模型组小鼠胰岛结构被破坏,而栀子苷治疗组有明显改善,并且观察到Ki67表达,表明栀子苷能够促进胰岛β细胞增殖;栀子苷治疗组小鼠肝脏中Akt、GSK-3β蛋白磷酸化水平较模型组均有显著上调。结论 栀子苷能够有效改善糖尿病模型小鼠的高血糖症状,并增加血浆胰岛素水平,其作用可能与促进胰岛β细胞增殖,激活胰岛素受体下游Akt通路有关。     

肾移植受体术后新发恶性肿瘤临床分析

目的  总结肾移植受体术后新发恶性肿瘤的特点和治疗要点。方法  回顾性分析759例肾移植受体中43例术后新发恶性肿瘤患者的临床资料,总结肾移植术后新发恶性肿瘤的发病特点、治疗方法及预后。结果  肾移植受体术后新发恶性肿瘤发生率为5.7%。发病年龄（52±11）岁,肿瘤确诊时间为移植术后60（13~193）个月。43例恶性肿瘤中包括原肾肾癌9例、膀胱癌7例、肺癌6例、淋巴瘤5例、大肠癌4例、乳腺癌4例、皮肤癌2例、肾上腺癌1例、胃癌1例、原发性肝癌1例、胰腺癌1例、头皮血管肉瘤1例和脑膜瘤1例,确诊后采取手术、调整免疫抑制方案、放射治疗或化学药物治疗等方案治疗。术后1、5年存活率分别为81%和63%。结论  肾移植受体术后恶性肿瘤发生率高于正常人,且以泌尿系统肿瘤最常见。治疗应以根治性手术切除为主,无法手术者采用抗肿瘤综合治疗,同时减少免疫抑制剂用量并调整用药方案,可有效延长患者存活时间。     

Kimura病致脑动脉狭窄伴梗死并文献复习

Kimura病又称嗜酸性淋巴肉芽肿(eosinophilic lymphoid granuloma,ELG),是一种病因不明的炎症性疾病.本病主要侵犯颈部皮肤、唾液腺及其淋巴结,常伴有血液IgE升高和嗜酸细胞增多.