环孢菌素A对肾血管性高血压大鼠心肌肥厚和心功能的影响——一项关于CaN对心肌肥厚及心功能影响的随机对照实验

目的 通过建立两肾一夹高血压大鼠心肌肥厚模型，研究环孢菌素(CsA)对心肌肥厚及心功能的影响，以探讨钙调神经磷酸酶(CaN)在心肌肥厚进展中的作用。方法 制备两肾一夹肾血管性高血压大鼠模型，术后2月，经心脏超声和部分大鼠(两肾一夹2月组)病理学证实心肌肥厚后，将大鼠随机分为两组，分别予生理盐水(两肾一夹3月组)或CsA(CsA组)腹腔注射，持续1月，并以假手术组作对照。观察大鼠左室重与胫骨长度比值、心肌细胞面积、左室后壁和室间隔厚度、CaN活性和心功能的改变。结果 两肾一夹2月和3月组大鼠左室重与胫骨长度比值、心肌细胞面积、左室后壁和室间隔厚度较相应假手术组增高(F＝12．4，13．0；P＜0.05)，CsA治疗组较两肾一夹2月和3月组均明显降低，与假手术组差异无显著性。CaN活性在两肾一夹2月和3月组均显著高于假手术组，CsA治疗后CaN活性下降(F＝8．8；P＜0．05)。各组射血分数、左室短轴缩短率及零负荷下等容收缩期心肌纤维收缩成分的缩短速度相似(F＝1．0，1.1;P&;gt;0．05)，CsA组左室舒张末压、等容舒张期压力下降时间常数较两肾一夹3月组显著下降(F＝3．4，10,3；P＜0．05)。结论 CaN参与了肾血管性高血压心肌肥厚进展，CsA可逆转心肌肥厚，改善心脏舒张功能。     

曲美他嗪对慢性心力衰竭大鼠心肌能量代谢及超微结构的影响

目的研究曲美他嗪对异丙肾上腺素诱导的慢性心力衰竭大鼠心肌能量代谢和超微结构的影响。方法72只雄性SD大鼠随机分为对照组(14只)和模型组(58只),模型制备采用皮下多点注射异丙肾上腺素法,4周后模型组大鼠死亡12只,再将存活的46只模型组大鼠随机分为未治疗组(M组,16只)、曲美他嗪治疗组(T组,15只)和培哚普利治疗组(P组,15只)。治疗5周后行二维心脏超声检查和病理形态学观察,并测定心肌组织能量代谢相关指标。结果与M组比较,T组大鼠LVEF、左心室短轴缩短率均提高;光镜和电镜下观察T组和P组心肌损伤程度较M组明显减轻。T组与P组大鼠心肌二磷酸腺苷(ADP)、一磷酸腺苷、ATP/ADP和总腺苷含量与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。T组大鼠心肌肌浆网Ca2+-ATPase活性与对照组和P组比较差异无统计学意义。结论曲美他嗪能够改善心力衰竭大鼠心肌能量代谢、病理和超微结构,并且有改善大鼠心功能的趋势。     

硫酸奎尼丁对乳大鼠心室肌细胞Kv4．3基因mRNA水平表达的影响

目的探讨硫酸奎尼丁对乳大鼠心室肌细胞Kv4．3基因mRNA水平表达的影响及其治疗Brugada综合征的分子机制。方法将乳大鼠心室肌细胞随机分为对照组及硫酸奎尼丁干预组,培养至24、48、72h,应用半定量逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测Kv4．3基因mRNA表达的变化。结果于预至24h对Kv4．3基因mRNA水平表达无明显影响;至48h,各干预组较对照组显著降低（P〈0．05）,且5与10μmol／L组较1μmol／L组下调作用更为显著（P〈0．05）;至72h,各干预组较对照组显著降低（P〈0．05）,而各干预组间差异无统计学意义。结论硫酸奎尼丁可显著下调Kv4-3基因mRNA水平表达,且较长时间干预时低浓度与较高浓度下调的幅度相近。     

PAPP-A基因多态性与子痫前期的相关性研究

目的:探讨妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)基因多态性与子痫前期的相关性.方法:采用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)对129例子痫前期患者(轻度子痫前期64例,重度子痫前期65例)和137例同期入院产检并在南京医科大学第一附属医院分娩的正常孕妇,进行PAPP-A基因位点S1224Y(A/C)(dbSNP:rs7020782)多态性的分析,比较各基因型及等位基因的频率在子痫的期组和正常组间、重度子痫前期组和轻度子痫前期组间的差别.结果:AC基因型频率在于痫前期组(44.2%)高于对照组(31.4%,P<0.05);AC基因型频率在重度子痫前期组(75.4%)明显高于轻度子痫前期组(12.5%,P<0.001);C等位基因频率在重度子痫前期组(40.8%)明显高于轻度子痫的期组(18.7%,P<0.001).结论:PAPP-A基因位点S1224Y(A/C)的AC基因型,C等位基因可能是子痫前期的重要遗传危险因素,并与病情的严重程度相关.     

人心脏型脂肪酸结合蛋白的纯化与鉴定

目的:以往的心脏型脂肪酸结合蛋白多来自牛、鼠等动物心肌组织,本实验构建了人左心室心肌组织纯化心脏型脂肪酸结合蛋白的新方法。方法:实验于2005-01/03在南京医科大学第一附属医院心血管病研究所完成。①实验材料:人心室肌由南京医科大学第一附属医院心血管病研究所提供。②实验过程:取20g人左心室肌在缓冲液中匀浆,多步骤离心后以(NH4)2SO4进行盐析→再次离心→沉淀缓冲液重悬透析得蛋白粗提液→Sephadex G-75凝胶过滤→电泳确定主要蛋白条带的收集管号合并收集→QSepharose Fast Flow阴离子交换层析→聚乙二醇浓缩→缓冲液透析得人心脏型脂肪酸结合蛋白。③实验评估:以SIGMA公司人心脏型脂肪酸结合蛋白为对照标准品;以Tricine-SDS-PAGE电泳鉴定相对分子质量;以鼠抗人脂肪酸结合蛋白单克隆抗体及羊抗鼠IgG对其进行Western印迹检测鉴定其特异性。结果:①Sephadex G-75凝胶过滤柱层析结果:各组分经Tricine-SDS-PAGE电泳检测证实,部分收集管中存在相对分子质量约14400的人心脏型脂肪酸结合蛋白。②阴离子交换柱层析结果:在洗脱液NaCl浓度达6mmol/L时,出现蛋白峰,人心脏型脂肪酸结合蛋白被洗脱;NaCl浓度达20mmol/L时,蛋白峰降至基线,蛋白洗脱结束。③纯化的人心脏型脂肪酸结合蛋白鉴定结果:经电泳显示其相对分子质量约为14000,纯度约为90%;Western印迹证实其可被抗人脂肪酸结合蛋白单克隆抗体特异识别,与对照标准品SIGMA公司人心脏型脂肪酸结合蛋白结果一致。实验从20g湿重心室肌中共纯化得到15.4mg心脏型脂肪酸结合蛋白,得率为0.77mg/g。结论:Sephadex G-75凝胶过滤柱层析及阴离子交换柱层析相结合,可用于人心脏型脂肪酸结合蛋白的纯化。     

超声引导下双侧腹横肌平面阻滞复合腹直肌鞘阻滞用于开腹结直肠癌术镇痛效果观察

目的观察超声引导下行双侧腹横肌平面阻滞复合腹直肌后鞘阻滞在开腹结直肠癌手术的镇痛效果及术后康复效果。方法将60例全麻下行开腹结直肠切除术患者用随机数字表法分成试验组(TR组)及对照组(C组)各30例,TR组给予腹横肌平面阻滞(TAPB)复合腹直肌鞘阻滞(RSB)及常规全身麻醉组,C组为常规全身麻醉组,两组术后均行静脉自控镇痛(PCIA)。比较两组术中及术后静脉自控镇痛(PCIA)中舒芬太尼用量、24 h镇痛泵按压次数、术后4、8、16、24、36、48 h静息及运动时视觉模拟评分(VAS评分)、肠蠕动肛门排气时间以及早期下床活动时间等早期康复指标。结果与C组比较,TR组术中、术后舒芬太尼用量较少(P<0.05),24 h镇痛泵按压次数少(P<0.01),术后4、8、16 h VAS评分,肠蠕动时间及早期下地时间少,差异均有统计学意义(P<0.05)。两组术中收缩压、舒张压、心率、SpO_2均在正常范围,组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。TR组未见腹横肌平面阻滞穿刺引起的不良反应。结论超声引导下的腹横肌平面阻滞及腹直肌鞘阻滞定位准确,可减少术中及术后镇痛泵舒芬太尼用药量,对开腹结直肠癌手术患者术后镇痛效果好,肠蠕动,肛门排气及早期下床时间缩短,有助于患者早期恢复。     

急性冠脉综合征患者C反应蛋白基因T-757C 多态性分析

目的 探讨中国苏皖地区汉族人群C反应蛋白(CRP)基因启动子T-757C多态性分布及其与急性冠脉综合征(ACS)的相关性.方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法,检测468例ACS患者(ACS组)和282例非冠心病者(对照组)的CRP基因T-757C多态性.结果 与对照组比较,ACS组TC基因型频率明显增高(...     

抗人脑钠肽单克隆抗体的制备及其鉴定

目的：制备抗人脑钠肽单克隆抗体并对其进行初步鉴定。 方法：实验于2004-12／2006-02在南京医科大学第一附属医院心血管病研究所进行。利用碳化二亚胺法将合成的人脑钠肽与牛血清白蛋白偶联制备完全抗原，反复免疫Balb／c小鼠，应用杂交瘤技术将免疫小鼠的脾细胞与Balb／c小鼠骨髓瘤细胞（SP2／0）在PEG下融合，HAT选择性培养，间接酶联免疫吸附方法对细胞培养上清检测、筛选，选择筛选结果脑钠肽抗体阳性的细胞株连续进行3次亚克隆，建立稳定分泌脑钠肽单克隆抗体的杂交瘤细胞株。扩大培养阳性单克隆细胞株后，腹腔注射小鼠，制备腹水。对腹水亲和层析纯化，所得的单克隆抗体行初步鉴定。 结果：免疫小鼠血清呈脑钠肽抗体阳性，经筛选得到3株稳定分泌脑钠肽单克隆抗体的杂交瘤细胞株，纯化的单克隆抗体经鉴定为IgG型，蛋白质印迹分析证实单克隆抗体可特异识别脑钠肽，具备较高的特异性及敏感性。 结论：成功制备了3株抗脑钠肽特异性的单克隆抗体，可用于脑钠肽免疫检测方法的建立。     

自制单克隆抗体检测糖尿病大鼠肾脏和心脏糖基化终产物

目的为探讨糖基化终产物在糖尿病慢性并发症发生发展过程中的作用,采用本实验室所制备的7F、5F、8A三株单抗,检测高血压糖尿病大鼠肾脏和心脏糖基化终产物。方法Western blotting分析所制备单抗与对照物(人血清白蛋白、孵育人血清白蛋白和牛血清白蛋白)的交叉反应性及其针对的抗原表位。用所得单抗对糖尿病大鼠肾脏和心脏进行糖基化终产物的免疫组织化学分析。结果所得抗体与糖基化终产物结合能力和特异性较强,初步鉴别其抗原表位非羧甲基赖氨酸。在糖尿病大鼠肾脏和心脏探查到葡萄糖源性糖基化终产物,而正常对照组不明显。结论3株抗糖基化终产物单克隆抗体细胞株具较高抗原特异性,可定性显示组织中的糖基化终产物。