人CD40分子基因转染人脐静脉内皮细胞ECV-304

目的 构建人CD40的真核表达载体，建立持续、稳定高表达CD40的人脐静脉内皮细胞ECV-304。方法 将含有CD40的克隆载体pUCD40酶切后，再克隆到真核表达载体pCDNA3．1中，构建重组质粒pCDNA3．1（＋）／CD40，并对重组质粒进行酶切鉴定。然后用脂质体法将重组质粒转染ECV-304，G418筛选转染的细胞。RT-PCR、Western-blotting和流式细胞仪定性定量检测转染后的ECV-304的CD40的表达情况。结果 经酶切鉴定，重组体中已插入目的基因片段CD40。RT-PCR和Western-blotting证实，重组质粒转染的ECV-304中有CD40基因的表达，流式细胞仪检测转染后的ECV-304的CD40的表达率为95％。结论 成功构建了真核表达载体pCDNA3．1（＋）／CD40．并建立了高表达CD40的ECV-304，为筛选抗动脉粥样硬化药物奠定了基础.     

RSV感染患儿外周血CD_4~*”CD_(45)RO~+CD_(45)RA~+表达变化的研究

目的：探讨下呼吸道感染呼吸道合胞病毒(RSV)患儿外周血辅助性T淋巴细胞(CD4),原始T细胞(CD45RA+),记忆性T细胞(CD45RO+)表达的变化。方法：用单克隆抗体免疫荧光标记,流式细胞仪检测30例RSV下呼吸道感染患儿急性期外周血单个核细胞(PBMCs)CD4+,CD45RA+细胞,其中11例同时检测CD45RO+细胞,同期检测9例年龄、性别无差异的健康儿为对照。结果：RSV下呼吸道感染组患儿CD4为(32.74±10.60)%,明显低于对照组(40.76±6.82)%,2组有显著性差异(P0.05)。结论：RSV感染急性期存在免疫功能紊乱,外周血CD4,CD45RO+下降,而CD45RA+明显增加,这可能是CD45RO+向呼吸道迁移的结果。     

人膀胱癌异质性表型相关基因的筛选与鉴定

目的 筛选和鉴定膀胱肿瘤异质性生物学表型相关的基因。方法 以已建立的两株同一来源、不同生物学表型的膀胱移行细胞癌细胞系为材料,采用抑制性削减杂交技术筛选差异表达的基因片段,构建cDNA文库;挑取克隆进行筛选,获得差异表达片段,测序并与Genbank比对,Northernblotting验证差异片段在两株细胞系的不同表达。结果 建立了两个消减文库,分别含有168和206个白色克隆,白色克隆含有约200～700bp的插入片段,对这些克隆进行筛选,获得35个差异表达基因片段,其中15个对应于细胞骨架蛋白、细胞代谢酶基因等已知基因,另外19个为未知功能基因,1个为新EST片段,注册Genbank（注册号为DR008207）。结论 抑制性消减杂交技术是筛选、克隆差异表达基因的有效手段;keratin7、Vimentin等细胞骨架蛋白的不同表达,与细胞形态的表型差异有关;DDH等代谢基因的不同。与细胞的药物敏感性差异相关;筛选到的新基因片段为进一步克隆其全长、研究基因功能提供了实验基础。     

诊断超声对人早孕绒毛增殖细胞核抗原的影响

目的：探讨诊断超声对人早孕绒毛增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的影响。方法：选取１０５例孕６￣８周健康妇女,以３．５ＭＨｚ诊断Ｂ型声声波经下腹持续照射孕囊１０分钟或２０分钟或分组于照后不同时间行人工流产术取绒毛,用流式细胞仪定量检测绒毛ＰＣＮＡ表达水平。结果：早孕绒毛ＰＣＮＡ表达平均百分含量为１２．５３,与孕妇年龄、产次无关;超声照射１０分钟后２４小时及照射２０分钟后１、４、８、１６、２４小时绒毛ＰＣＮ     

CyFlow Space流式细胞仪CD34+细胞绝对计数分析

目的 比较在Partec CyFlow Space流式细胞仪上采用不同设门方法计数CD34+造血干细胞结果的差异.方法 采集经骨髓动员的患者外周静脉血标本30例,在分别采用同型对照设门法和国际血液治疗与移植工程协会(ISHAGE)推荐设门法设置流式细胞仪后进行标本测定.结果 两种设门法标本计数结果具有相关性(r=0.9...     

西安市学龄前儿童淋巴细胞及其亚群调查分析

目的 调查分析西安市学龄前儿童的淋巴细胞及其亚群百分比、绝对计数及CD4⁺/CD8⁺。方法 选取西安市368名参加正常入学体检的学龄前儿童作为研究对象。采用乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)管采集所有研究对象的静脉血标本,采用流式细胞仪及四色试剂检测淋巴细胞及其亚群的百分比、绝对计数及CD4⁺/CD8⁺。分析学龄前儿童的淋巴细胞及其亚群的百分比、绝对计数及CD4⁺/CD8⁺;比较不同性别、不同年龄阶段学龄前儿童的淋巴细胞及其亚群的百分比、绝对计数及CD4⁺/CD8⁺。结果 368名学龄前儿童的淋巴细胞百分比为(44.15±8.39)%,绝对计数为(4 321.64±1 330.43)个/μL;不同性别学龄前儿童的CD3⁺CD4⁺及CD3-CD16⁺CD56⁺百分比比较,差异具有统计学意义(P<0.05);不同性别学龄前儿...     

人CD40分子基因转染人脐静脉内皮细胞ECV-304

目的构建人CD40的真核表达载体,建立持续﹑稳定高表达CD40的人脐静脉内皮细胞ECV-304。方法将含有CD40的克隆载体pUCD40酶切后,再克隆到真核表达载体pCDNA3.1中,构建重组质粒pCDNA3.1( )/CD40,并对重组质粒进行酶切鉴定。然后用脂质体法将重组质粒转染ECV-304,G418筛选转染的细胞。RT-PCR﹑Western-blotting和流式细胞仪定性定量检测转染后的ECV-304的CD40的表达情况。结果经酶切鉴定,重组体中已插入目的基因片段CD40。RT-PCR和Western-blotting证实,重组质粒转染的ECV-304中有CD40基因的表达,流式细胞仪检测转染后的ECV-304的CD40的表达率为95%。结论成功构建了真核表达载体pCDNA3.1( )/CD40,并建立了高表达CD40的ECV-304,为筛选抗动脉粥样硬化药物奠定了基础。     

多层纳米金修饰膜的HCG表面等离子体传感器

探索一种可以高密度固定抗原的新方法,并用于研究多层纳米金修饰金膜表面包被抗原的新型人绒毛膜促性腺激素(HCG)表面等离子体共振(SPR)传感器。3-巯丙基甲基二甲氧基硅烷(MPTMS)与纳米金粒子(AuNPs)可通过Au-S键在传感器金膜表面交替组装形成三维网络,膜表面空间结构中的纳米金经静电作用可吸附大量的小分子抗原HCG,从而获得多层膜修饰的HCG免疫传感器用于检测抗原抗体结合反应。用所构建的HCG传感器,直接检测不同浓度的anti-HCG抗体有良好的线性关系,且修饰两层胶体金膜比修饰一层时抗体响应的共振峰移动幅度提高了1.8倍,检测下限降低至1.5μg/mL。间接法测定了不同浓度的HCG,其浓度与SPR共振峰的位移呈负相关。实验通过修饰两层胶体金膜大大提高了金膜表面固定抗原的量,提高了检测抗体的灵敏度,并且进而用竞争法可检测HCG抗原而不需要用第二抗体进行信号放大。有望用于临床实验诊断。     

溶血磷脂酸与卵巢癌

溶血磷脂酸是具生物活性的脂类分子 ,通过与G蛋白偶连的受体结合发挥多种生物学功能。近年的研究发现其与卵巢肿瘤的生长、浸润、转移有关 ,在卵巢癌的早期诊断中具有潜在的应用价值。     

支气管肺炎患儿机体免疫功能变化的分析

目的通过对支气管肺炎患儿T细胞亚群、血清免疫球蛋白、血清补体及细胞因子变化的分析,探讨小儿支气管肺炎机体免疫功能状态及免疫学发病机制,为临床了解病情、选择适当的治疗方案提供理论依据。方法支气管肺炎组65例,男39例,女26例,年龄2个月～13岁,平均年龄4.1岁。对照组20例,男12例,女8例,年龄1～12岁,平均年龄4.3岁。应用多色流式细胞术检测T细胞亚群(CD3+、CD3+CD4+Th、CD3+CD8+Ts、CD3+CD4+Th/CD3+CD8+Ts)、应用免疫散射比浊法检测血清免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)、血清补体(C3、C4)、应用ELISA法检测血清细胞因子(IFN-γ、IL-4)。结果支气管肺炎组T细胞亚群改变明显,CD3+、CD3+CD4+Th显著低于对照组,有统计学意义(P<0.01);CD3+CD8+Ts显著高于对照组,有统计学意义(P<0.01);CD3+CD4+Th/CD3+CD8+Ts比值降低,与对照组相比,有统计学意义(P<0.05)。支气管肺炎组血清IgA、IgG水平显著低于对照组,有统计学意义(P<0.01);支气管肺炎组血清补体C3低于对照组,有统计学意义(P<0.05)。支气管肺炎组血清细胞因子IFN-γ浓度及Th1/Th2比值高于对照组,有统计学意义(P<0.05)。结论支气管肺炎患儿存在细胞免疫和体液免疫功能紊乱,对支气管肺炎患儿检测免疫功能有助于判断病情、指导治疗。