抗人肝癌血管内皮功能性单抗的筛选与鉴定

目的:筛选、鉴定抗人肝癌血管内皮功能性单抗,为治疗肝癌提供靶向治疗剂,并为分离获得肝癌相关的分子靶标打下基础。方法:采用活细胞荧光、MTT细胞增殖实验、成管实验和动物体内治疗实验,筛选鉴定抑制肝癌内皮细胞的功能性单抗。结果:从能与肝癌内皮细胞膜反应的119株克隆中,筛选出16株单抗显著地抑制肝癌内皮增殖其抑制率达21%~46%,46株能显著抑制肝癌内皮细胞的成管,3株单抗1F9、12B5和1B11能显著抑制肝癌移植瘤的生长抑制率分别为50.8%、48.7%和47.0%。选择1株体内抑瘤效果最好的1B11单抗,通过抗体抗原亲和层析法进行纯化,并对纯化的单抗的相关抗原蛋白进行免疫组织化学实验鉴定,结果显示1B11抗原在肝癌血管组织较高的表达而在正常肝血管组织极少表达。蛋白质印迹法显示其抗原相对分子质量约46×103。结论:采用大容量功能性抗体库技术成功获得了多株具有抑制肝癌内皮恶性生物学行为的功能性单抗,体内外抑制肺癌的生长,具有成为肺癌靶向治疗剂的潜力。其中1株可能是一个靶向治疗肝癌的新靶位。     

江苏省部分市县人群中成人 T 细胞白血病-淋巴瘤病毒抗体检测

流行病学研究表明成人T 细胞白血病(ATL)的病因为HTLV—I 病毒,主要流行于日本九州四国等地。我省恶性淋巴瘤死亡率居全国前列。本文报道对各型淋巴瘤及其他人群血清482份检测HTLV-I 抗体的情况。材料与方法血清来源:1985至1986年收集了本省部分人群的血清482份,包括南京地区各型淋巴瘤(含何杰金氏病)、白血病患者100例;与其在地区、性别及年龄上配比的眼科或外科非肿瘤病人     

抗人VEGF单抗抑瘤抗转移的实验研究

肿瘤组织VECF是否阳性与肿瘤的转移密切相关,中和VECF的活性,或阻断VECF与其受体的结合不仅可以抑制肿瘤的生长,而且可抑制肿瘤的转移.为此,本研究组研制了抗VECFF的单抗,获得了九株能中和VECF促血管形成和促血管渗漏活性的中和抗体.并对其中六株进行了体内实验动物研究,取得了良好的效果.     

抗人CD3人/鼠嵌合抗体的表达及特性

将从HIT3a基因库分离克隆的功能性抗CD3轻重链可变区基因插入含有人k轻链及γ1重链恒定区基因的哺乳动物表达载体中，构建了抗CD3嵌合抗体基因,用Lipofectin将抗CD3人／鼠嵌合轻重链基因共转染SP2／0细胞表达，获得稳定传代和稳定表达抗CD3嵌合抗体的转染杂交瘤细胞株C-HIT3a，ELISA，免疫荧光和PCR实验证实嵌合抗体与原鼠CD3单抗有相同的特异性和亲和性。体外生物活性的初步分析表明嵌合抗体与鼠CD3单抗对人的PBMC细胞的增殖有相同类型的作用，高剂量抗体抑制人T细胞的增殖，低剂量显示明显的激活增殖作用，当与IL-2联合应用其激活增殖作用增加20倍。细胞毒实验表明嵌合CD3抗体或由该抗体介导的免疫活性细胞(CD3-AK)对多种肿瘤细胞有明显的杀伤活性，较单用IL-2或单用LAK细胞其杀伤活性增加25倍。     

青霉素、链霉素混合溶液稳定性实验

青霉素、链霉素是临床上应用较广的两种抗菌素,且常联合应用。为了探索青霉素与链霉素溶液混合后,相互之间对稳定性有无影响,我们进行了初步的实验研究。方法是将青霉素G钾和硫酸链霉素分别用注射用水溶解,并各取一定量按临床习惯配比混合,得青霉素、链霉素及青、链霉素混合溶液。以分光光度法分别测定这三种样品溶液中青     

识别肺癌上调表达的膜蛋白单抗抑制肺癌生长

目的:分析研究抗肺癌24H7单抗的体内外功能,并初步鉴定其识别的抗原蛋白,为肺癌靶向治疗提供候选抗体药物及靶标。方法:采用活细胞免疫荧光及流式细胞荧光检测单抗与多种肺癌细胞的反应;应用CCK-8法和裸鼠体内成瘤实验鉴定单抗对肺癌细胞体外增殖及体内肿瘤生长的影响;同时采用免疫组化检测该单抗识别抗原在肿瘤及癌旁正常组织中的表达差异;免疫亲和层析纯化抗原。结果:活细胞免疫荧光及流式荧光结果显示24H7单抗识别抗原在12种不同肺癌细胞系膜上均有阳性表达;体外增殖及动物体内治疗实验显示该单抗在体外能抑制肺癌细胞的增殖,并在体内显著抑制肿瘤的生长,其抑制率达73.74%(P0.01);免疫组化结果表明该单抗的靶抗原在肺腺癌组织中的表达较癌旁正常显著上调;免疫亲和层析显示靶抗原的分子量约为170 KD。结论:抗肺癌单抗24H7能够在体内外抑制肺癌的生长,其靶抗原可表达于肺癌细胞的膜上,且在肺腺癌组织上调表达,可能是一个肺腺癌靶向治疗的新靶标。     

抗CEA嵌合抗体在CHO细胞中的高效表达

目的 为了在ＣＨＯ－ｄｈｆｒ细胞中高效表达有活性的抗入ＣＥＡ鼠－人嵌合抗体。方法构建抗ＣＥＡ嵌合抗体的真核高效表达载体,转染ＣＨＯ－ｄｈｆｒ细胞,通过加入ＭＴＸ进行基因扩增表达,获得高产细胞株。采用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｏｌｔ、ＥＬＩＳＡ、体内放射免疫实验等方法鉴定所表达的嵌合抗体的生物学特征。结果 获得产量可达６０μｇ／ｍｌ的细胞株。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ、ＥＬＩＳＡ、体内放射免疫实验证明所表达的     

抗VEGF165的嵌合抗体在小鼠骨髓瘤细胞中的表达

目的减少鼠源性单抗的免疫原性,获得抗人血管内皮生长因子１６５（ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ１６５,ＶＥＧＦ１６５）的人／鼠嵌合抗体。方法 将抗ＶＥＧＦ１６５鼠单抗ＶｍＤ１１鼠单抗ＶｍＤ１１的轻链可变区基因ＶＬ和重链可变区基因ＶＨ分别克隆到带有人ＩｇＧ１轻链恒定区基因ＣＫ,重链恒定区基因Ｃγ１的真核表达载体ｐＡｃｙｃ－ｎｅｏ－Ｃｋ和ｐｓｖ２－Ｃγ１上,构建了真     

BARD1剪切变异体在卵巢癌组织中的表达及临床意义

目的探讨卵巢癌肿瘤抗原新基因OCY-142即BARD1的剪切变异体在卵巢癌中的表达及临床意义。方法用RT—PCR的方法检测OCY-142在卵巢癌组织和正常卵巢组织中的表达。结果在28例卵巢癌组织中,有10例（35．7％）明显表达OCY-142抗原基因,而30例正常卵巢组织中均没有OCY-142抗原基因的表达,两者之间有显著性差异（P〈0．05）。OCY-142的表达与卵巢癌的病理类型有关,在浆液性乳头状囊腺癌患者中有较高的特异性（P〈0．05）,但OCY-142的表达与卵巢癌的临床分期和组织分化程度没有相关性（P〉0．05）。结论卵巢癌肿瘤抗原基因OCY-142是BARD1基因的1个剪切变异体,其有可能成为卵巢恶性肿瘤免疫治疗的新靶点。OCY-142在卵巢浆液性囊腺癌中有较高的表达,其临床意义值得进行更深入的研究。     

抗血管内皮生长因子165抗体轻重链可变区基因的克隆与序列分析

目的　 获得抗血管内皮生长因子 1 6 5 ( VEGF1 65)抗体的轻重链可变区基因。 方法　 从分泌具有中和抗血管内皮生长因子 1 6 5活性的单抗杂交瘤细胞株Vm D1 1中提取总 RNA,经 RT- PCR扩增并克隆该单抗的轻、重链可变区基因并进行序列分析。结果　 抗体的轻链可变区基因 32 1 bp,属于小鼠第 亚群 ;重链可变区基因 35 4bp,属于小鼠第 ( B)亚群。结论　 所克隆的基因经核苷酸序列分析分别为抗体的轻、重链可变区基因。