抑制食管癌与肺血管内皮黏附的功能性抗体的制备

目的〖HT5"SS〗： 制备抑制食管癌细胞与肺血管内皮黏附的功能性单克隆抗体,为研究食管癌转移的靶向治疗剂打下基础。〖HT5W〗方法〖HT5"SS〗： 以人食管癌新鲜组织分离的肿瘤细胞免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合后,采用活细胞荧光、ELISA、免疫组化、肿瘤细胞内皮细胞黏附实验、Weastern bloting等方法筛选并鉴定抑制肿瘤细胞黏附的功能性单克隆抗体。〖HT5W〗结果〖HT5"SS〗： 共融合获得了1 134株杂交瘤克隆,在能与食管癌细胞膜反应的486株     

自身免疫性疾病的新进展

免疫系统是个复杂的防卫系统,可以保护机体免受外界入侵的微生物和体内产生的肿瘤细胞的损害,从而维持机体的完整性。微生物和肿瘤细胞由于含有抗原,机体的免疫系统就能够识别出它们是外来的物质,并     

单克隆抗体16 D3抑制肺癌的功能研究

目的分析抗肺癌单克隆抗体16 D3靶抗原蛋白在人肺癌细胞及组织中的表达,鉴定16 D3对肺癌的体内外抑制功能,为肺癌靶向治疗提供候选抗体药物。方法采用免疫组化分析16 D3靶蛋白在人肺癌组织中的表达;采用细胞免疫荧光检测单克隆抗体16 D3识别的抗原在肺癌细胞中的表达及亚细胞定位;共接种移植瘤模型评估16D3对肺癌生长的抑制作用,Transwell法和CCK-8法检测单抗16D3对人肺癌细胞迁移、侵袭和增殖能力的影响;采用流式细胞术检测16 D3靶蛋白分别在亲本和sphere培养的人肺癌细胞中的表达。结果单克隆抗体16 D3的靶蛋白在7种人肺癌细胞的胞内及胞膜上均有表达,在76.9％人肺癌患者组织中特异上调表达。该单抗在体内能较显著地抑制人肺腺癌GLC-82的生长,抑制率为58.23％（ P＜0.05）。在体外对该细胞的增殖、迁移和侵袭具有一定的抑制作用,抑制率分别为26.91％、24.23％和23.67％。该单抗的靶蛋白膜表达阳性细胞比例经sphere培养后显著上升。结论单抗16D3靶抗原在人肺癌中特异表达,并可被sphere培养富集。单抗16D3在体外具有多种抑制功能,在体内能显著抑制人肺腺癌生长,可能是一个肺癌靶向治疗的潜在新药。     

人肺腺癌A549细胞系干细胞样细胞的培养检测及其抗顺铂能力的研究

目的:从人肺腺癌A549细胞系中培养获得含干细胞样细胞的球细胞(Sphere细胞),检测相关标志物表达及其对顺铂的耐药性.方法:采用含特定生长因子的无血清培养基诱导A549细胞的Sphere细胞形成,用亲脂荧光染料标记技术和免疫荧光法检测Sphere细胞中干细胞的存在,用流式细胞术检测干性标志物CD133,OCT4,C...     

卵巢癌自身抗体谱研究及应用

目的 肿瘤自身抗原可以诱导机体免疫反应,产生与肿瘤相关的自身抗体.因此,在肿瘤患者血清中存在肿瘤自身抗体谱.本研究拟寻找鉴定卵巢癌自身抗体谱,研究这些自身抗体作为卵巢癌诊断候选血清标志物的可能性;同时鉴定这些自身抗体的抗原,为卵巢癌的免疫治疗提供候选靶抗原.方法 用卵巢癌组织建立了库容量达1.82×106pfu的cDNA表达文库,用卵巢癌患者血清进行了文库血清学分析(SEREX),筛选获了阳性抗原克隆,进一步分析了其中5个克隆与48例卵巢癌48例正常人血清的反应情况.结果 获得的67个阳性克隆中,5个克隆与已知EST序列明显无同源性,另外49个克隆与已知基因高度同源.BHLHB2等5个抗原克隆与卵巢癌患者和正常人血清反应阳性率分别为41.6%(14.6%)、29.2%(6.25%)、29.2%(12.5%)、31%(18.7%)、31%(6.2%).联合5个克隆诊断卵巢癌的敏感性为81%,特异性75%.结论 本研究发现的45个卵巢癌抗原可能作为卵巢癌诊断新的候选血清学标志物和免疫治疗潜在分子靶点.BHLHB2等5个克隆与卵巢癌患者血清的反应阳性率明显高于正常人的血清,5个克隆联合诊断卵巢癌有较好的敏感性和特异性,其相关自身抗体可作为卵巢癌诊断的血清标志物.     

抗人VEGF单抗的研制及对肿瘤生长及转移的抑制作用

为了确定人血管内皮细胞生长因子在肿瘤生长及转移中的作用。方法：利用ＤＮＡ重组技术表达人ＶＥＧＦ,以其为抗原免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,应用杂交瘤技术获得１４株稳定分泌抗ＶＥＧＦ单抗的杂交瘤细胞株。结果ＥＬＩＳＡ测定所分泌的单抗只与ＶＥＧＦ特异结合,与ＥＧＦ、ＦＧＦ、ＰＤＧＦ、ＴＧＦα及ＴＮＦ等均无交叉反应。     

抗人VEGF165单链抗体的构建与表达

为降低鼠源抗体对人体的免疫原性,构建表达了ＶｍＤ１１的单链抗体。方法用ｏｖｅｒｌａｐＰＣＲ构建出单链抗体的基因,克隆入表达载体ｐＫｐＬ－３ａ,在大直菌ｏｐｏ２１３６中表达,采用抗原结合ＥＬＩＳＡ和竞争抑制ＥＬＩＳＡ测定活性。结果经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测,诱导后的细菌表达了２６ｋＤ的蛋白;ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ证实该蛋白为表达的单链抗体。经变性,复性后,该单链抗体可特异结合人ＶＥＧＦ１６５抗原,并与Ｖ     

一株靶向CD90+MHCC97-L细胞单克隆抗体治疗肝癌的实验研究

目的:研究抗人肝癌干细胞单抗28C10体内外功能,为肝癌干细胞的靶向治疗提供有应用价值的候选治疗剂。方法:采用无血清成球实验、侵袭实验和CCK-8方法等检测分析28C10单抗对MHCC97-L sphere的细胞自我更新、侵袭和耐药的影响。裸鼠体内治疗实验研究单抗28C10联合顺铂对MHCC97-L移植瘤生长的作用。Western-Blot方法鉴定该单抗识别抗原的分子量。结果:流式细胞检测结果显示单抗28C10能够识别MHCC97-L中CD90阳性细胞的比例为2.75%。体外功能实验结果显示单抗28C10能显著抑制MHCC97-L sphere细胞的无血清成球能力和侵袭能力,抑制率分别达33.33%和53.8%。28C10能显著抑制MHCC97-L sphere的顺铂耐药能力,其IC50为0.74 μg/ml,而对照组的IC50为1.42 μg/ml。抗体体内治疗实验结果显示,低、高剂量抗体28C10均能抑制肝癌移植瘤的生长,抑制率分别达到了24.0%和67.7%,单独顺铂组肝癌移植瘤的抑制率为35.9%,而顺铂联合高剂量抗体28C10组对肝癌移植瘤的抑制率达到70.1%。Western-Blot结果显示单抗28C10识别的抗原蛋白分子量约100 kD。结论:筛选获得了1株抗肝癌干细胞的功能性单抗,为靶向肝癌干细胞治疗肝癌奠定了重要的基础。     

功能性单克隆抗体40E11靶向治疗肺癌的实验研究

目的:检测分析抗肺癌单克隆抗体40E11识别的靶抗原在肺癌细胞系及肺癌组织中的表达,研究单克隆抗体40E11体内外抑瘤功能,并初步鉴定其识别的抗原蛋白,为肺癌的靶向治疗提供候选抗体药物及靶标.方法:应用细胞免疫荧光检测单克隆抗体40E11所识别的靶抗原在肺癌细胞系中的表达及定位,免疫组化检测其在人肺癌组织中的表达;CCK-8法检测分析40E11对肺癌细胞增殖的影响.裸鼠体内治疗实验研究40E11对移植瘤生长的抑制作用.Western bloting鉴定该单克隆抗体识别的抗原的分子量.结果:单克隆抗体40E11识别的抗原在人肺腺癌细胞(A549、GLC-82、ANIP-973)、人肺鳞癌细胞(GLC-P)的胞内及胞膜均有表达;该抗原在84.6％的人肺癌组织中的表达较癌旁组织显著上调;CCK-8法检测结果显示单克隆抗体40E11明显抑制肺癌细胞体外生长;抗体治疗实验结果表明单克隆抗体40E11明显抑制体内肺癌细胞生长,其抑制率达64.4％,P＜0.05;蛋白质印迹法显示40E11识别的抗原相对分子质量约为100×103.结论:抗肺癌单克隆抗体40E11在体内外能显著抑制肺癌细胞的生长,为肺癌的靶向治疗提供具有重要应用价值的候选抗体药物.     

杂交瘤单抗4F11识别CD90+肝癌干细胞并抑制其侵袭【院士点评：靶向CD90+肿瘤干细胞可能治疗肝癌转移】

目的:筛选识别肝癌干细胞的单克隆抗体并研究其体外的抗肿瘤作用,为肝癌干细胞靶向治疗提供候选抗体药物。方法:无血清悬浮培养及PKH26染色分析人肝癌细胞株MHCC97H中是否存在肝癌干细胞。流式细胞术检测MH-CC97H细胞及其成球细胞中7种肿瘤干细胞标志物的表达,以及MHCC97H细胞中肝癌干细胞标志物CD90和不同杂交瘤单抗3G7、4F11、11C9、15B7、15D2识别抗原的共表达情况。无血清悬浮培养法和CCK8法检测单抗4F11对MHCC97H细胞及其成球细胞自我更新和增殖的影响,Transwell实验检测单抗4F11对MHCC97H细胞体外侵袭和迁移的影响。结果:PKH26染色实验显示,MHCC97H细胞球体由单个肝癌干细胞增殖分化形成。MHCC97H细胞球中CD90+MHCC97H细胞比例较亲本MHCC97H细胞显著增加[(18.0±7.5)%vs(2.3±1.0)%,P<0.05]。杂交瘤单抗4F11、3G7、11C9、15B7、15D2均能识别MHCC97H细胞中CD90+MHCC97H细胞,其中单抗4F11对CD90+MHCC97H细胞的识别比例为(47.2±4.4)%,其对MHCC97H成球细胞增殖的抑制率远大于对亲本MHCC97H细胞增殖的抑制率[(29.4±3.8)%vs(12.0±2.2)%,P<0.05]。单抗4F11抑制MHCC97H细胞成球,抑制率达(58.0±20.8)%。单抗4F11能显著抑制MHCC97H细胞体外侵袭和迁移,抑制率分别为(48.6±5.1)%和(47.6±3.6)%。结论:杂交瘤单抗4F11能特异性识别CD90+肝癌干细胞,抑制肝癌细胞的侵袭和迁移,可作为肝癌干细胞靶向治疗的候选抗体药物。