胃肠富集Krüppel样因子基因转染对人胃癌细胞株SGC-7901及裸鼠移植瘤生长的影响

目的 探讨外源性胃肠富集Krüppel样因子(GKLF)基因转染对人胃癌细胞株SGC-7901在体内外的抗肿瘤效应.方法 荧光实时定量PCR和Western印迹法检测GKLF基因转染前后人胃癌细胞株SGC-7901中GKLF mRNA和蛋白的表达.应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、流式细胞技术、克隆形成实验和细胞侵袭实验分别检测GKLF基因转染后SGC-7901细胞增殖和侵袭力的变化.观察裸鼠移植瘤生长情况和应用免疫组织化学法检测移植瘤组织中微血管密度(MVD).结果 GKLF基因转染后,SGC7901-pcDNA3.1-GKLF组中GKLF mRNA(0.1216±0.0061)和蛋白(1.0547±0.0172)的表达明显高于SGC-7901组[分别为(0.0029±0.0012)和(0.6240±0.0177)]和SGC7901-pcDNA3.1组[分别为(0.0037±0.0013)和(0.5627±0.0510)],P＜0.05.与SGC-7901组和SGC7901-pcDNA 3.1组相比,从48 h开始,SGC7901-pcDNA 3.1-GKLF组细胞生长速度减慢、细胞出现G0/G1期部分阻滞、克隆形成率低、细胞侵袭力明显减弱(P值均＜0.05).SGC7901-pcDNA3.1-GKLF组皮下移植瘤生长速度减慢、瘤重轻、MVD低(P值均＜0.05).结论 GKLF基因转染可导致人胃癌细胞株SGC-7901的增殖活性和侵袭力降低,抑制裸鼠移植瘤生长和血管生成.

Abstract：

Objective To investigate the antitumour effects of transfected gut-enriched Krüppellike factor(GKLF) on human gastric carcinoma cell line SGC-7901 in vitro and in vivo. Methods The expression of GKLF mRNA and protein in human gastric carcinoma cell line SGC-7901 were detected before and after transfection by real-time fluorescence quantitative PCR and Western blot,respectively. Proliferation and invasion in SGC-7901 were measured respectively by MTT assay, flow cytometry, colony formation assay and cell invasion assay after transfected with GKLF. The growth of xenograft was observed, the microvessel density(MVD) of xenograft tissue was determined by immunohistochemistry. Results The GKLF mRNA and protein in SGC-7901 were overexpressed after transfected with GKLF(P＜0.05). The proliferative speed of SGC7901-pcDNA3.1-GKLF group was markedly lower than that of SGC-7901 and SGC7901-pcDNA3.1 groups (P＜0.05). Transfected with GKLF caused part of the G0/G1 arrest, decreased clone formation rate and the invasion ability (P＜0.05). The growth speed of xenograft in SGC7901-pcDNA3.1-GKLF group was lower, the weight and MVD of xenograft tissue in SGC7901-pcDNA3. 1-GKLF group were less (P＜ 0. 05).Conclusion Transfected with GKLF maysuppress proliferation and invasion in human gastric carcinoma cell line SGC-7901, inhibit the growth and the angiogenesis of xenograft in nude mice.     

转染GKLF基因对人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤的抑制作用

目的:研究转染GKLF基因对人胃癌SGC-7901细胞裸鼠皮下移植瘤的作用,探讨GKLF在胃癌中可能的作用机制.方法:将外源性重组真核质粒pcDNA3.1-GKLF转染到人胃癌细胞株SGC-7901内,经G418筛选并建立高表达GKLF的稳定转染细胞株.稳定表达该基因的细胞为SGC7901-peDNA3.1-GKLF组...     

儿童肱骨近端骨折治疗

目的探讨儿童肱骨近端骨折的治疗方法。方法回顾性分析本院2000年1月至2009年1月收治的94例儿童肱骨近端骨折患儿,根据患儿年龄和骨折移位情况不同而采取保守治疗32例(非手术组),手术治疗组切开复位后用克氏针、弹性髓内钉或钢板内固定62例,术后定期复查X线片了解骨折愈合情况。结果 94例均得到随访,时间3个月至5年,平均4.1年。非手术组骨折愈合时间4~6周,平均4.5周;手术组为1.5~3个月,平均2个月。按照Neer评分标准进行疗效评价,非手术组优24例,良6例,一般2例,优良率为93.75%。手术组优49例,良10例,一般3例,优良率为95.16%。手术组病例切口均无感染,无神经损伤及骨不连发生,肩关节功能无明显受限。结论儿童肱骨近端骨折治疗应首选保守治疗。尤其对于小于6岁骨折移位不严重、无神经损伤病例疗效优良。对于骨折移位严重、复位后不稳定、开放性骨折、合并神经损伤的学龄期儿童可采取手术治疗。骨折复位后内固定可选克氏针、弹性髓内钉固定,儿童钢板内固定应慎重。     

2012—2013年我国中药及天然药物资源研究进展与学科建设

对2012—2013年我国中药及天然药物资源研究及学科建设进行归纳整理并报告,本文涉及中药及天然药物资源研究思路与方法、中药资源调查与研究、中药资源生产现状与GAP基地建设、中药及天然药物资源化学研究进展、资源保护与综合利用以及学科建设等方面,反映了本领域产-学-研-管理环节的学术成就与科技贡献,以期对中药与天然药物资源的资源科学研究、学科建设、人才培养和产业化发展起到引导和推动作用。     

胃癌及癌旁组织EGFR和Ki-67抗原表达的免疫组化研究

目的 研究胃癌及癌旁组织中EGFR和Ki-67抗原的表达情况及其与胃癌浸润、转移等生物学行为间的关系，从而探讨其对胃癌的早期诊断和临床治疗的价值。方法 运用免疫组织化学ABC法，检测48例胃癌及癌旁组织、86例胃良性疾病中EGFR和Ki-67的表达。结果 (1)胃癌和癌旁组织EGFR、Ki-67呈高表达。(2)EGFR表达与胃癌生长方式、组织学分类、浸润深度、淋巴结转移与否及PTNM分期有关；Ki-67表达与胃癌的生长方式、浸润深度、淋巴结转移与否及PTNM分期无关，仅与组织学分类有关。结论 (1)EGFR和Ki-67的检测对胃癌的早期诊断有一定的参考价值。(2)癌旁组织显示增殖活性增高的趋势，显现出增殖不稳定状态，具有癌变可能。因此对胃癌患者行手术治疗时，应注意原发灶的切除范围，最大限度地减少残留病灶的可能性。     

药材初加工“发汗”过程及其酶促反应与化学转化机制探讨

药材初加工是药材生产与品质形成的重要环节,长期的生产实践和经验积累形成了独具特色、内容丰富的加工方法和技术体系.药材初加工环节中的“发汗”方法是部分根及根茎类、皮类、菌核等药材在干燥加工过程中采用的独特处理方法,既有利于药用部位内部水分向外分布易于干燥,同时又调节和促进着生物组织中的酶系统与微生物群落活力,启动或加速了初生/次生代谢产物的生物转化与化学转化过程,直接影响着药材品质的形成.对药材初加工“发汗”方法形成的历史源流、目的与意义进行了阐述,并对这一独特过程中可能发生的酶活变化及其物质转化机制等进行分析探讨,以期为阐明药材初加工“发汗”原理,为合理地制定药材初加工技术标准及其SOP提供科学依据.     

胃肠富集、肠道富集Krüppel样因子在人胃癌组织和细胞株中的表达

目的 研究96例胃癌组织和胃癌细胞株(MKN-28、SGC-7901、BGC-823、HGC-27)中胃肠富集Krüppel样因子（Ｇut-enriched Krüppel-like factor,GKLF）、肠道富集Krüppel样因子（Ｉntestinal enriched Krüppel-like factor,IKLF）的表达及意义。方法 荧光实时定量PCR 法检测胃癌组织和胃癌细胞株中GKLF mRNA及IKLF mRNA 的水平;分别采用免疫组织化学法和Western blot检测胃癌组织和细胞株中GKLF、IKLF蛋白的表达。结果 胃癌组织中GKLF mRNA水平低于正常胃黏膜,IKLF mRNA水平高于正常胃黏膜（P均<0.0001）,GKLF mRNA、IKLF mRNA的水平与胃癌分化程度无关。胃癌组织中GKLF蛋白阳性率显著低于正常胃黏膜,IKLF蛋白阳性率则显著高于正常胃黏膜（P均=0.001);GKLF、IKLF蛋白表达与胃癌患者的年龄、性别、分化程度、Lauren分型无关,但与淋巴结是否有转移及pTNM分期相关（P=0.001）。胃癌细胞株中GKLF mRNA及蛋白水平低于人正常胃上皮细胞株GES 1,IKLF mRNA水平及蛋白则高于细胞株GES 1（P均<0.05）。结论 GKLF、IKLF可能参与了胃癌的发生、发展,检测GKLF、IKLF的表达有助于判断胃癌患者病情程度和预后。     

基于多元功效成分的干姜干燥方法研究

目的比较不同干燥方法对干姜药材中6种活性成分的影响,探讨干燥过程中干姜成分的动态变化和水分动力学变化。方法采用HPLC同时测定干姜中的多元功效成分,以6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚、6-姜烯酚、α-姜黄烯、(E)-β-金合欢烯为指标,对不同干燥方法所得干姜进行综合评价;利用Weibull函数模拟干姜干燥过程中水分的动态变化结合成分动态变化,探讨干姜干燥过程的原理。结果 12种干燥方法对干姜中多元功效成分有一定影响,干燥过程各成分呈波动变化,Weibull函数模拟干姜干燥过程的r2均大于0.990。以控温鼓风60℃干燥所得干姜较优;含水量范围6%~15%为干姜加工的适宜水分;干姜干燥过程中6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚和6-姜烯酚与含水量呈显著的负相关关系。结论 Weibull分布函数能够较好的模拟干姜干燥过程的水分变化,对干姜干燥过程的预测、调控具有重要意义,同时为使用现代干燥技术干燥干姜药材提供了技术依据。     

复方银杏叶制剂中总银杏酸含量测定方法的优化

目的:优化复方银杏叶制剂中银杏酸(GA)的测定方法。方法:以白果新酸对照品结合总银杏酸对照品定位,采用HPLC测定复方银杏叶制剂中5种银杏酸成分总含量,并比较石油醚提取/甲醇溶解、甲醇提取/氯仿萃取和甲醇提取/正己烷萃取法对制剂中银杏酸含量测定结果的影响;进一步以甲醇浓度、溶剂体积、提取时间为影响因素,以总银杏酸含量测定值为评价指标,通过Box-behnken响应面法分析与优化测定方法。结果:甲醇提取/正己烷萃取法对复方银杏叶制剂中总银杏酸的提取精制效果最好。响应面法分析显示,提取溶剂及溶剂体积对总银杏酸含量值具有显著性影响(P 0. 01),最佳提取条件:提取溶剂为85%甲醇,溶剂体积为100 m L,提取时间为1. 8 h,在此条件下方法的平均回收率达97. 7%,精密度RSD为1. 42%。结论:HPLC简便可行,测定结果准确,可用于测定银杏叶提取物及复方制剂中银杏酸的含量测定。     

HPLC指纹图谱与一测多评法相结合的姜炭质量控制方法探索

目的:建立姜炭饮片的HPLC指纹图谱,并应用一测多评法同时对该饮片中姜酮,6-姜辣素,6-姜烯酚,10-姜酚,8-姜烯酚,10-姜烯酚的含量进行测定。方法:采用Waters Symmetry Shield~(TM)RP18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-纯水为流动相进行梯度洗脱(0～30 min,25%～70%A;30～50 min,70%～90%A;50～60 min,90%A),流速1 m L·min~(-1),检测波长240 nm,柱温30℃,以姜酮,6-姜辣素,8-姜酚,6-姜烯酚,10-姜酚,8-姜烯酚,10-姜烯酚为指标性成分建立姜炭饮片的指纹图谱。以6-姜辣素为参照内标,通过相对校正因子对姜酮,6-姜烯酚,10-姜酚,8-姜烯酚,10-姜烯酚进行含量测定,检测波长选择280 nm和220 nm。结果:建立了姜炭饮片HPLC指纹图谱,标定了10个共有峰,对7个共有峰进行了化学成分确认,分别为姜酮,6-姜辣素,8-姜酚,6-姜烯酚,10-姜酚,8-姜烯酚,10-姜烯酚。对姜炭中6个成分用一测多评法进行了测定,计算值与外标法实测值无明显差异。建议姜炭的质控指标为以干燥品计,姜酮(C_(11)H_(14)O_3)不得少于0.020%,6-姜辣素(C_(17)H_(26)O_4)不得少于0.050%,6-姜烯酚(C_(17)H_(24)O_3)不得少于0.120%,10-姜酚(C_(21)H_(34)O_4)不得少于0.080%,8-姜烯酚(C_(19)H_(28)O_3)不得少于0.030%,10-姜烯酚(C_(21)H_(32)O_3)不得少于0.050%。结论:所建立的方法准确、可行,为姜炭饮片的质量控制提供了简单有效的评价方法。