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目的 通过慢病毒载体介导外源性5'肌醇磷酸酶(SH2 domain contaihing inositol 5'-phosphatase,SHIP)基因转染K562细胞,探讨ship基因对K562细胞生长增殖的影响.方法 以白血病细胞株K562为研究对象,将携带ship基因的慢病毒感染K562细胞,FQ-PCR方法检测ship转录水平,Western blot方法检测转染后SHIP蛋白表达变化;比较ship基因表达前后细胞增殖、形态的变化.结果 FQ-PCR和Western blot结果显示,携带ship基因的慢病毒载体pReceiver-Lv31能高效转染K562细胞,阳性率(74.6±5.8)%;细胞生长曲线显示SHIP可显著抑制K562细胞生长,抑制率(35.0±3.1)%;集落形成实验显示SHIP能显著抑制K562细胞集落形成能力[K562/SHIP组集落形成率(36.7±7.1)%,K562/FIV组为(77.7±6.3)%,(P<0.05)];细胞形态观察发现凋亡增加,TUNEL法证实SHIP蛋白促进细胞凋亡.结论 外源性ship基因表达抑制白血病细胞系K562的增殖活性,并促进其凋亡. 相似文献
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【目的】探讨SHIP基因对IL-3诱导K562细胞系增殖的抑制作用,阐明跗,尸对K562细胞作用的机制。【方法】将慢病毒质粒pReceiver.Lv31-FIV和pReceiver.Lv31-SHIP转染K562细胞;转染细胞与IL-3共培养,Westernblot法检测K562细胞Akt磷酸化;观察转染野生型SHIP基因对K562细胞增殖的影响:末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺失末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡。【结果】重组慢病毒载体pReceiver.Lv31-FIV和pReceiver.Lv31-.SHIP转染K562细胞,GFP阳性率为74.6%。野生型s驯P基因阻断了IL-3对K562细胞的增殖作用,对照组(K562/FIV)细胞增殖抑制率(3.26%)明显低于转染s删P基因组细胞增殖抑制率(26.42%,P〈0.05);集落形成实验显示SHIP能显著抑制K562细胞集落形成能力[IL-3作用组K562/SHIP细胞形成集落为60.3±6.6,明显低于IL-3诱导的K562/FIV组(91.7±4.2)](P〈0.01)。细胞形态观察发现凋亡增加.Westernblot检测发现转染s删P基因组前凋亡酶pro.caspase-3降解增加,TUNEL法证实SHIP蛋白促进细胞凋亡。IL.3作用不同时间段(3h,6h,12h),转染野生型SHIP组细胞增殖明显减弱,且Akt磷酸化水平均低于对照组(P〈0.05)。【结论】SHIP基因负调控生长因子(IL-3)介导的K562细胞增殖及其蛋白激酶活化。 相似文献
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β-榄香烯抑制人骨髓瘤细胞RPMI-8226增殖的实验研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 研究β-榄香烯对人骨髓瘤RPMI-8226细胞增殖、周期和凋亡的影响.方法 用噻唑蓝(MTT)法检测β-榄香烯对骨髓瘤RPMI-8226细胞增殖的影响;Annexin V/ PI双标流式术检测β-榄香烯对骨髓瘤RPMI-8226细胞周期、细胞凋亡的影响;Hoechst33342/PI 双染荧光显微镜观察β-榄香烯处理后骨髓瘤RPMI-8226细胞形态学变化.结果 β-榄香烯对RPMI-8226骨髓瘤细胞生长具有显著抑制作用,呈浓度和时间依赖性.β-榄香烯处理后,与对照组相比G0/G1细胞比例显著升高,而S、 G2/M细胞比例降低.β-榄香烯作用48 h可诱导骨髓瘤细胞凋亡,凋亡率随药物浓度而递增.结论 β-榄香烯可有效抑制人骨髓瘤细胞增殖;其抑制作用与细胞周期阻滞和细胞凋亡激活有关. 相似文献
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缺铁性贫血(Iron deficiency anemia,IDA)是临床上最常见的一种血液病。据1985年WHO报告,全球约30%的人患有贫血,其中半数(约5亿~6亿)为IDA。本病多发于生育期妇女和婴幼儿,随着老龄人口的增多和某些诊治技术如血液透析、溶栓和抗凝药物的广泛应用,IDA流行病学有所变迁。 相似文献
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目的:将线粒体神经酰胺酶(mtCDase)转 染到K562细胞,观察线粒体神经酰胺酶的细胞生物学效应。方法:以脂 质体介导将含有mtCDase cDNA的pCDNA3.1/His-CDase质粒转染到K562细胞,G418筛选阳性 克隆,建立稳定表达mtCDase的K562TC细胞株。Annexin Ⅴ/PI法、FCM及Western印迹法分别 检测K562与K562TC细胞在无血清培养耐受性及Bcl-2蛋白表达水平方面的差异。 结 果:稳定表达mtCDase 的K562TC细胞Bcl-2蛋白水平明显升高,抗血清剥夺能力明 显增强。以硫代反义寡核苷酸特异性封闭K562TC细胞mtCDase,Bcl-2蛋白表达水平下调;二 甲基鞘氨醇(DMS,鞘氨醇激酶抑制剂,降低细胞内1-磷酸鞘氨醇水平)同样下调K562TC细 胞Bcl-2蛋白表达水平,而外源性1-磷酸鞘氨醇(SPP)显著上调K562细胞Bcl-2表达水平。 结论:mtCDase转染K562细胞导致Bcl-2蛋白表达水平升高及无血清培养耐 受能力增强。这种效应是通过mtCDase的下游代谢产物-SPP产生的。本研究证实mtCDase通过 其下游代谢产物代谢SPP,上调K562细胞Bcl-2蛋白表达水平。 相似文献
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目的:探讨CD44单克隆抗体A3D8对人急性髓系白血病细胞株HL-60细胞增殖分化影响的分子作用机制.方法:采用FCM、RT-PCR及Western blot方法检测A3D8作用前后HL-60细胞Cyclin D1、CDK4、p21cip1表达的变化.结果:A3D8作用使HL-60细胞发生G0/G1期阻滞.A3D8下调HL-60细胞Cyclin D1及CDK4的表达,上调HL-60细胞p21cip1 mRNA及P21蛋白表达.结论:A3D8抑制HL-60细胞增殖、诱导其分化的分子机制可能与p21cipl表达上调及Cyclin D1、CDK4表达下调有关. 相似文献
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bcl-2硫代反义寡核苷酸对Raji细胞增殖和凋亡的影响 总被引:5,自引:0,他引:5
研究bcl-2硫代反义寡核苷酸(bcl-2 ASODN)对淋巴系统恶性肿瘤的作用及机制。将bcl-2 ASODN与Raji细胞共孵育,应用MTT检测,电镜超微结构,流式细胞仪(FCM)分析和RT-PCR方法,观察bcl-2 ASODN对Raji细胞增殖及凋亡的影响,以及bcl-2蛋白及mRNA水平的变化。MTT检测显示bcl-2 ASODN可以部分抑制Raji细胞增殖;经ASODN作用48h,电镜超微细胞观察细胞呈现典型凋亡特征,包括胞膜出芽,异染色质核膜下浓聚形成凋亡小体及胞核破裂;FCM检测Annexin V^ /PI^-的凋亡细胞比例升高,20μmol/L bcl-2 ASODN处理Raji细胞72h,细胞凋亡率达43.86%,比对照组(10.05%)明显增高。bcl-2阳性细胞率逐渐下降,于72h达低谷为0.88%,明显低于对照组(79.54%)。bcl-2 mRNA水平亦显下降。结论 bcl-2 ASODN通过下调bcl-2蛋白表达水平,诱导Raji细胞凋亡。 相似文献
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目的:研究三七总甙对NB4细胞促凝活性和组织因子表达及诱导分化作用的影响:方法:用三七总甙处理NB4细胞,测定复钙时间观察NB4细胞的促凝活性(procoagulant activity,PCA),RT—PCR检测TF—mRNA的表达;采用四唑蓝(MTT)法检测三七总甙对NB4细胞增殖抑制作用;以NBT还原实验、细胞形态学观察及流式细胞术分析研究三七总甙对NB4细胞诱导分化的影响。结果:(1)不同浓度三七总甙均可显著延长NB4细胞的复钙时间,降低NB4细胞的PCA水平,呈时间浓度依赖性,同时下调组织因子TF—mRNA的表达;(2)三七总甙可部分抑制NB4细胞的增殖;(3)三七总甙可提高NB4细胞NBT还原能力(P<0.05),细胞形态方面显示单核/巨噬细胞分化趋势。结论:三七总甙可降低NB4细胞的促凝活性及TF—mRNA的表达,诱导NB4细胞部分分化,有望作为新的抗凝药物。 相似文献
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目的:探讨血管生成素及受体酪氨酸激酶(Angs及Tie-2)与髓系白血痛的关系.以及与血管内皮生长因子(VEGF)的相互关系.方法:应用半定量RT-PCR检测80例急性髓系白血病(AML)、10例慢性髓系白血病(CML)和10例正常人骨髓单个核细胞(BMNCs)中Ang-1、Ang-2、Tie-2和VEGF mRNA的表达.用流式细胞术检测白血病细胞增殖指数(PI).结果:与正常对照相比,除Ang-1外,Ang-2、Tie-2和VEGF mRNA在初治的髓系白血病中表达均增高,缓解后降低.在Ang-2与VEGF双阳性白血病组,髓外浸润率明显增高(P<0.05);Ang-2/Tie-2双阳性组缓解率低(P<0.05)、PI增高(P<0.05)并与CML的发展阶段有关.结论:髓系白血病患者高表达Angs/Tie-2,同时其与VEGF之间相互作用,与白血病的发展阶段相关. 相似文献