携带绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒的构建及其在人血管平滑肌细胞中的表达

目的:构建携带绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein,GFP)基因的重组腺病毒质粒pAd-GFP,制备重组腺病毒Ad-GFP,并使GFP在血管平滑肌细胞中得到高效表达。方法:将线性化的穿梭质粒pRNAT-H1.1与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在感受态BJ5183内进行同源重组,并筛选出阳性重组子pAd-GFP;用Pac I酶切线性化pAd-GFP,线性化的腺病毒质粒经脂质体转染AD293细胞,进行重组腺病毒的包装和扩增。采用CsC1密度梯度离心进行病毒浓缩和纯化。获得的腺病毒感染人血管平滑肌细胞(human vascular smooth muscle cell,hVSMC),观察其感染效率和GFP表达水平。结果:通过Pac I酶切证实腺病毒载体构建成功,包装出携带GFP基因的腺病毒,滴度达到4.5×1012pfu/mL,获得的腺病毒对hVSMC的感染效率约为100%。结论:利用细菌内同源重组方法成功地构建了携带绿色荧光蛋白的重组腺病毒,并能够在hVSMC细胞中高效地表达,为利用GFP作为报告基因的研究奠定了实验基础。     

调整心态 真诚服务

针对近年来医患之间的不和谐事件频繁发生,著名院士钟南山强调：“提高医护人员的人文修养格外重要”。 如何提高医护人员的人文修养？我认为：医护人员在医疗服务中应该拥有良好的心态。因为心态是人的内心活动,是人生情绪和意志的遥控器,它决定着人生的生活与工作质量。心态是服务之基,是成功之根。     

带旋髂深血管蒂髂骨瓣移植治疗青壮年股骨颈骨折

目的:探讨带旋髂深血管的髂骨瓣移植空心钉内固定治疗青壮年股骨颈新鲜骨折的手术方法。方法:对21例青壮年GardenⅢ、Ⅳ型股骨颈骨折行带旋髂深血管的髂骨瓣移植式,并随访。结果:随访21例,均骨性愈合,1例出现骨股头缺血坏死,功能良好占95.2%,功能不满意占4.8%。结论:带旋髂深血管蒂髂骨瓣植骨空心钉内固定术可以有效改善股骨颈骨折端的血运,促进青壮年股骨颈新鲜骨折的愈合,短期内降低股骨头坏死率。     

血管内皮生长因子通过PKC途径促进骨髓源间充质干细胞迁移

目的:探索PKC信号通路在血管内皮生长因子(VEGF)介导的骨髓源间充质干细胞(MSC)迁移中的作用及其机制。方法:以P3MSC为实验材料,利用Tanswell体外迁移体系,观察不同浓度的VEGF对MSC迁移的影响,在Straurosporine、G06976、Pseudo Z等信号转导途径阻断剂的干预下观察VEGF对迁移的影响。结果:MSC体外迁移能力随VEGF浓度(0.1,1,10,20,50 ng/mL)的递增而逐渐增强,20 ng/mL浓度时,MSC迁移到滤膜上的细胞数接近于峰值;Straurosporine、G06976、Pseudo Z对MSC迁移均有影响,其中Straurosporine、Pseudo Z对MSC迁移阻断的效应最显著。结论:VEGF所介导的MSC迁移与蛋白激酶C信号途径有关,且PKC-ζ途径可能处于中心环节。     

PEP-1-CAT融合蛋白预处理对在体大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用

目的:研究PEP-1-CAT融合蛋白预处理对在体大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用,探讨其可能的作用机制。方法:60只SD大鼠随机分为5组:假手术组(Sham组)、缺血/再灌注组(I/R组)、低剂量预处理组(I/R+100μgPEP-1-CAT)、中剂量预处理组(I/R+300μgPEP-1-CAT)、高剂量预处理组(I/R+500μgPEP-1-CAT)。假手术组和缺血/再灌注组预先注射1mL的0.9%氯化钠溶液,低中高剂量预处理组分别注射100、300、500μg的PEP-1-CAT融合蛋白,7h后结扎冠状动脉前降支1h,再灌注2h后,检测心肌组织中的丙二醛(MDA)和血液中乳酸脱氢酶(LDH)及肌酸激酶(CK)含量,TTC染色测定心肌梗死面积,一步法TUNEL测定凋亡率,免疫荧光测定凋亡蛋白Bax和Bcl-2的表达。结果:与I/R组相比,低中高剂量预处理组显著减少心肌梗死面积(P<0.05或P<0.01),减少MDA的形成(P<0.01)和LDH、CK的释放,使凋亡率下降(P<0.01),下调Bax的表达,上调Bcl-2的表达,使Bax/Bcl-2比值下降。结论:PEP-1-CAT融合蛋白预处理能够明显减少心肌缺血/再灌注损伤,其机制可能与PEP-1-CAT融合蛋白具有抗氧化、抗凋亡作用有关。     

阿霉素诱导大鼠心衰模型的建立

目的:通过阿霉素(Adriamyc in,ADR)腹腔注射给药(Adriamyc in,ADR)试图造成大鼠心衰,探讨建立大鼠阿霉素心衰动物模型的给药方案,为研究心衰的发病机制和有效治疗措施提供理想的动物模型。方法:雄性W istar大鼠25只,随机分成模型组(n=15)和对照组(n=10)。模型组:腹腔注射ADR(4 mg/kg,用注射用水配制成2 mg/m l溶液,即2 m l/kg,每周1次,共6周,累积总量24 mg/kg;对照组:注射相同体积的注射用水。于末次注射停药后2周,测量体重(BW)、心室质量(VW)、动脉收缩压(ASP)、动脉舒张压(ADP)、左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)及左室最大压力上升及下降速度(±dp/dtm ax),并作病理切片观察其组织学变化。结果:与对照组相比,模型组ASP、LVSP、±dp/dtm ax均明显减小,LVEDP明显升高;病理学结果证实符合心肌病样改变。结论:多次间断腹腔注射一定剂量的阿霉素可明显损害心脏的功能,是建立大鼠慢性充血性心力衰竭模型的一种简便可靠的方法。     

大鼠心肌缺血再灌注后心功能变化与心有肌梗死面积的相关性分析

目的 大鼠左冠状动脉前降支不同处结扎处理后,分析心功能的变化与缺血再灌后心肌梗死面积的相关性.方法 雄性 Wistar 大鼠 70 只,随机分为 6 组即:假手术组,结扎(15、30、45、60 min)再灌注、结扎非再灌注.于处理后行心导管插管测量动脉收缩压(ASP)、动脉舒张压(ADP),左室收缩压(LVSP),左室舒张末压(LVEDP)及左室压力上升及下降最大速度(±dp/dtmax).结果 引起明显的心肌粳死至少需要结扎 30min.结扎(45、60min)再灌注、结扎非再灌注的心肌梗死明显,并观察到梗死区域心肌绝大部分已纤维化,且梗死面积变化较恒定.同时测定不同结扎时间心功能的变化发现,结扎(45、60 min)再灌注或结扎非再灌注各组 ASP、DAP、LVSP、±dp/dtmax显著下降,LVEDP明显升高;不同结扎时间处理后,大鼠心功能的变化与心肌粳死后的梗死面积变化密切相关.结论 大鼠左冠状动脉前降支中上1/3处结扎45 rnin以上的大鼠出现明显的心肌梗死灶,而且心肌缺血再灌注后心功能的降低与心肌梗死面积的增加呈负相关关系.     

骨髓间充质干细胞分泌基质细胞衍生因子1保护心肌细胞

背景：有研究显示表达CXCR4的干细胞能够沿着基质细胞衍生因子1的浓度梯度迁移到心肌梗死部位再生心肌和血管而改善心脏的功能。目的：探索间充质干细胞通过其分泌的基质细胞衍生因子1对心肌细胞的保护作用。方法：收集培养2d的间充质干细胞条件培养基。在缺氧条件,利用基质细胞衍生因子1受体CXCR4阻断剂AMD3100或P13．K／Akt途径阻断剂LY294002预处理H9C2细胞后,利用AnnexinV／PI双标法流式细胞术分析间充质干细胞条件培养基作用下H9C2细胞凋亡的变化;Western blotting分析H9C2细胞磷酸化Akt蛋白的表达;RT-PCR分析间充质干细胞基质细胞衍生因子1的表达。结果与结论：RT-PCR结果显示间充质干细胞表达基质细胞衍生因子1,Westernblotting结果显示间充质干细胞条件培养基增加了H9C2细胞磷酸化Akl蛋白的水平。AnnexinV／P1分析发现间充质干细胞条件培养基明显降低了H9C2细胞缺氧复氧后的凋亡,且这种抗凋亡作用能被CXCR4阻断剂AMD3100或P13-K／Akt途径阻断剂LY294002所阻断。说明间充质干细胞通过其分泌的基质细胞衍生因子1通过激活P13-K／Akt途径保护H9C2细胞,增加H9C2细胞的幸存能力。     

微血管减压术治疗原发性三叉神经痛42例临床分析

目的观察微血管减压术治疗原发性三叉神经痛的临床疗效,探讨手术适应证的选择。方法对应用微血管减压术治疗的原发性三叉神经痛42例病例的临床资料进行分析。结果术中见三叉神经入脑干段均有责任血管压迫。手术后治愈36例,显效3例,有效2例,无效1例,总有效率达97.6%。结论微血管减压术治疗原发性三叉神经痛直接针对病因,治愈率高,术中创伤和神经功能影响小,并发症少。     

PEP-1-SOD1融合蛋白预处理对大鼠骨髓间充质干细胞在缺氧无血清条件下的保护作用

目的:研究PEP-1-SOD1融合蛋白转导入大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的能力及其在缺氧无血清条件下对MSCs的保护作用。方法:将纯化后的SOD1和PEP-1-SOD1蛋白分别加入到培养及鉴定后的第3代MSCs中,免疫荧光法和Western blot分析PEP-1-SOD1穿透入MSCs的变化,黄嘌呤氧化酶法分析其SOD酶活性。将2.5μmol/L PEP-1-SOD1预处理MSCs 45 min后去除PEP-1-SOD1,缺氧无血清条件下再处理24 h,Annexin V/PI双染标记,流式细胞术分析MSCs凋亡情况。结果:PEP-1-SOD1融合蛋白可以转导入MSCs,呈时间和剂量依赖性分布于胞浆和胞核,缺氧无血清条件下MSCs凋亡率明显降低(P<0.05)。结论:PEP-1-SOD1融合蛋白可以高效、稳定转导入MSCs,并对缺氧无血清所诱导的MSCs凋亡具有显著保护作用。