广东省医师协会中西医结合医师分会成立大会纪要

2009年3月28日上午,广东省医师协会中西医结合医师分会成立大会在广州隆重召开。广东省医师协会王智琼会长、曾广辉、许锐恒、陈志强副会长及来自全省各地的中西医结合医师分会委员及医师代表约200人出席会议。中国医师协会中西医结合医师分会会长陈可冀院士、广东省政协陈蔚文副主席、广东省卫生厅副厅长、省中医药局彭炜局长、中华中医药学会李俊德秘书长、广州中医药大学徐志伟校长、广州中医药大学副校长、广东省中医院吕玉波院长、广州市科技局马署副局长、广州市卫生局曾其毅副局长、广东省中医药学会金世明副会长、《中国中西医结合杂志》副总编辑陈维养教授到会祝贺。     

NT4-p53（N37）-HA2-TAT融合基因的克隆和鉴定

目的 构建NT4-p53(N37)-HA2-TAT融合基因表达盒并进行序列分析. 方法 应用互补引物二次PCR技术及T载体克隆法克隆p53(N37)基因,筛选阳性克隆、酶切鉴定并测序.扩增阳性重组质粒后用限制性内切酶切取p53(N37)和HA2-TAT片段连入pUC19/NT4质粒. 结果 克隆了p53(N37)基因,经酶切及测序证实结果正确;重组质粒pUC19/NT4-p53(N37)-HA2-TAT经限制性内切酶及琼脂糖凝胶电泳鉴定,结果显示酶切片段大小和理论值完全一致. 结论 通过基因克隆体外重组技术成功制备了含有NT4-p53(N37)-HA2-TAT表达盒的pUC/19质粒,为进一步开展肿瘤的基因治疗奠定了基础.     

短干扰RNA特异性抑制哺乳动物β淀粉样前体蛋白裂解酶基因表达

目的：探讨β淀粉样前体蛋白裂解酶（β-site APP cleaving enzyme，BACE）的短干扰RNA（short interfering RNAs，siRNA）是否能抑制BACE在哺乳动物细胞中的表达，为阿尔茨海默病（AD）的治疗提供新的手段。方法：采用PCR分别扩增增强型绿色荧光蛋白（EGFP）、U6启动子和靶向BACE的特异性小干扰RNA（siBACE），随后将相应的序列片段克隆入真核表达载体pLXSN，通过限制性内切酶和测序对该重组表达载体pLXSN／EGFP-U6-siBACE进行鉴定；制备稳定高表达BACE基因的神经母细胞瘤SK-N-SH细胞株，用荧光显微镜和免疫组织化学的方法观察siRNA对BACE表达的影响。结果：成功构建了靶向BACE的短干扰RNA的逆转录病毒载体pLXSN／EGFP-U6-siBACE，并能特异性地抑制BACE在神经母细胞瘤SK-N-SH细胞株中的表达。结论：成功构建了针对BACE的短干扰RNA的逆转录病毒表达载体pLXSN／EGFP-U6-siBACE，并能有效抑制哺乳动物BACE基因的表达，为利用RNA干扰技术作为治疗AD的新方法提供了重要的实验基础。     

先天性肛门闭锁伴结肠易位一例报告

<正> 先天性消化管畸形中最多见的是肛门闭锁。高位和中位肛门闭锁常伴有肠道泌尿生殖道瘘,其中少数病人同时伴有短结肠畸形和膀胱外翻,被称为“内脏外翻”或“先天性肛门闭锁伴发短结肠畸形”。先天性肛门闭锁伴发结肠易位未见报告,近来我们遇到一例,报告如下:病历摘要吕××,男,64岁,退休工人,因肝硬变,腹水于     

靶向人端粒酶逆转录酶进行RNAi的逆转录病毒载体的构建

目的构建靶向性干扰人端粒酶逆转录酶表达的特异性小干扰RNA的真核表达载体。方法采用PCR法分别扩增增强型绿色荧光蛋白的DNA序列、U6启动子序列和靶向性干扰人端粒酶逆转录酶的特异性小干扰RNA对应的DNA序列,随后将与之相应的DNA序列片断依次克隆入真核表达载体pLXSN中,并通过限制性内切酶和测序对该重组表达载体进行鉴定。以荧光显微镜和利用流式细胞仪分析重组病毒表达EGFP蛋白的情况。以MTT方法检测初步分析重组病毒对人Hela细胞的RNAi效果。结果限制性内切酶酶切和测序结果均表明成功构建了靶向人端粒酶逆转录酶的小干扰RNA的逆转录病毒表达载体pLXSN/EGFP-U6-siTERT。以磷酸钙共转染法制备的重组逆转录病毒滴定了病毒滴度后,重组病毒感染人Hela细胞24h时用流式细胞仪测得EGFP表达的阳性率为24.1%。重组逆转录病毒感染人Hela细胞48h时,MTT实验测得细胞死亡率为53.2%。结论成功构建了针对人端粒酶逆转录酶小干扰RNA的逆转录病毒表达载体pLXSN/EGFP-U6-siTERT,并制备了重组逆转录病毒,初步观察了效应,为进一步利用小干扰RNA技术研究肿瘤的基因治疗奠定了基础。     

PEI增强G250 DNA疫苗和重组肽疫苗的prime-boost免疫策略研究

目的 :探讨PEI作为免疫佐剂对G250抗原肽基因PVAX1/C-G250肽-C免疫保护效果的增强作用及联合应用CAIX蛋白疫苗进行PRIME—BOOST免疫程序免疫增强效果。方法:用Eco R I、Xho I和Eco R I、Sal I分别双酶切PVAX1及既往构建的p ET28a(+)/C-G250肽-C质粒。利用DNA重组技术构建重组质粒PVAX1/C-G250肽-C,酶切分析鉴定。大量提取质粒并分光光度计测质粒含量。将32只雌性昆明小鼠随机分为(A)裸DNA组,(B)DNA-PEI复合物组,(C)DNA-PEI+蛋白疫苗组,(D)空白对照组。按0,10,20,30天程序经股四头肌注射免疫。C组在第20天及第30天进行蛋白冲击。初次免疫前和第40天鼠尾取血,ELISA法检测抗体滴度。流式细胞术测淋巴细胞亚群CD4+和CD8+。结果:酶切及基因测序鉴定证实G250抗原肽c DNA正确插入PVAX1/C-G250肽-C真核表达的重组质粒中。昆明小鼠经4次免疫后,3个实验组都产生了特异性的体液和细胞免疫反应,B组的抗体滴度1:1.28×104及CD4+、CD8+达26.12%和12.60%,明显高于A组的1:3.2×103和CD4+,CD8+占到19.32%和10.74%。而蛋白冲击组的1:5.12×104和CD4+,CD8+占到41.96%和15.14%,明显高于B组(P0.05)。结论:成功构建重组质粒PVAX1/C-G250肽-C。该DNA疫苗与PEI和G250蛋白疫苗联合使用后产生极强的免疫原性,诱导产生了高滴度、高特异性抗体及细胞免疫反应。证实G250DNA疫苗联合PEI使用并进行蛋白疫苗冲击的免疫策略可产生强大的免疫保护作用。为恶性肿瘤的术后辅助治疗提供新的思路和方法。     

肿瘤血管生成抑制肽anginex的研究

anginex是利用碱性折叠原理和掺入来自PF-4、IL-8和BP1β-片层域短序列相结合的方法设计的一种新的小分子肽。体内和体外研究证明anginex通过诱导激活的内皮细胞(EC)凋亡,具有较强的抑制EC增殖、移行作用、抑制肿瘤血管生成作用并有与化疗协同和放疗增敏作用。因此,它是一个有可能应用于临床靶向治疗的抗血管生成的小分子肽。     

5家实验室含氯消毒剂含量及杀菌效果室间比对试验报告

目的：为了解含氯消毒剂在不同实验室间有效氯含量测试值及杀菌效果。方法：5家不同实验室按照相同的实验方法对有效氯含量及杀菌效果进行了室间比对。结果：5家实验室的有效氯含量测试结果平均值为47.1%,标准差为0.71,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、铜绿假单胞菌、枯草杆菌黑色变种芽孢的杀菌效果,高剂量组杀灭对数值较接近,低剂量组则偏差较大。结论：不同实验室采用相同方法测试含氯消毒剂,有效氯含量结果较一致,杀菌效果偏差相对较大,应采取相应的措施进一步控制检测质量。     

小动脉静脉化在末节断指再植中的临床应用

目的 探讨小动脉静脉化在末节断指再植中的应用价值。方法2003年3月-2004年9月，共治疗各种类型末节完全离断病人20例，共23指，所有病例在显微镜下均未找到适宜静脉，采用小动脉静脉化的方法，解决静脉回流问题进行再植手术。结果 20例病人，23指，有2指手术后出现静脉血管危象后坏死，行解脱术，其它21指均未发生血管危象，直到确定成活，再植成功率91．3％，其中17例患者得到随访，手指屈伸功能良好。结论 对于复杂机制的手外伤，软组织挫伤严重，大多数末节离断的病例，无法找到适宜的静脉，而通过小动脉静脉化解决回流问题，疗效可靠，通过小动脉静脉化，灌注平衡更容易建立，血管危象发生率较低。     

对疾病控制机构实验室生物安全管理工作的认识

疾病控制机构的实验室检验内容广泛，涉及的病原微生物种类多，管理上涉及的科室多、管理内容复杂，有一定的难度。加强实验室生物安全管理工作是确保实验室工作人员的安全、环境安全和社会安全的重要措施，不断提高对实验室生物安全管理工作重要性的认识，提高实验室生物安全管理水平，对落实以人为本的理念，促进疾病预防控制事业的发展有十分重要的意义。