PD-L1和APE1在早期宫颈鳞癌中的表达及临床意义

目的 探讨早期宫颈鳞癌组织中程序性死亡配体-1(programmed death ligand-1,PD-L1)和脱嘌呤/脱嘧啶内切核酸酶1(apurinic/apyrimidinic endonuclease1,APE1)的表达与临床特征及预后的关系.方法 采用免疫组织化学的方法(IHC)检测PD-L1和APE1蛋白在64例早期宫颈鳞癌组织中的表达,分析PD-L1、APE1表达以及两者共表达与早期宫颈癌临床特征的关系;采用Spearman等级相关分析检测APE1与PD-L1表达的相关性,Kaplan-Meier法分析早期宫颈鳞癌患者中APE1与PD-L1的表达与术后生存的关系,Cox回归模型分析早期宫颈鳞癌患者预后的危险因素.结果 早期宫颈癌患者APE1和PD-L1蛋白表达阳性率分别为70.31％和67.18％.PD-L1的表达与分期、淋巴结转移有显著相关性(P＜0.05),而APE1的表达仅与淋巴结转移密切相关(P =0.038).另外,APE1与PD-L1的表达正相关(r2 =0.347,P=0.005),且两者共表达与淋巴结转移相关,其术后生存期比单一阳性表达的宫颈癌患者明显缩短(P＜0.05).多因素COX回归模型结果显示,APE1的表达和淋巴结转移是影响早期宫颈鳞癌预后的独立危险因素,危险度分别为16.187(P =0.01)和27.340(P ＜0.001).结论 PD-L1和APE1表达的联合检测对早期宫颈鳞癌预后评估具有潜在的临床价值.     

血清APE1自身抗体在结直肠癌诊断中的价值

目的 探讨血清中APE1自身抗体(apurinic/apyrimidinic endonuclease 1 autoantibodies,APE1-AAbs)在结直肠癌中的诊断价值.方法 利用ELISA检测150例结直肠癌患者和170例健康体检人员(对照组)血清APE1-AAbs水平,采用蛋白芯片法检测相应的CEA、CA199和CA242浓度.运用Logistic回归和ROC曲线分析方法,将APE1-AAbs与CEA、CA199及CA242联合分析.结果 150例结直肠患者血清APE1-AAbs中位水平为2.697,显著高于对照组(P ＜0.001).绘制ROC曲线,其AUC为0.797,灵敏度为62.67％,特异性为85.29％.APE1-AAbs分别与CEA、CA199及CA242联合后,AUC、诊断灵敏度和准确性均有所升高.结论 血清APE1-AAbs对结直肠癌有辅助诊断价值,与临床上常用的结直肠癌肿瘤标志物联用可提高结直肠癌的诊出率.     

多肿瘤标志物蛋白芯片检测CA242在恶性肿瘤诊断中的价值

目的 探讨多肿瘤标志物蛋白芯片中糖链抗原CA242在各组人群中的表达、与其它检测指标的伴随情况及其临床意义.方法 收集该院2004年～2011年可供分析的25 076例多肿瘤蛋白芯片检测结果,分析CA242在各组人群、各种肿瘤中的升高特点,CA242伴随其它检测指标升高情况以及在肿瘤中的分布情况.结果 CA242升高在恶性肿瘤患者中明显高于良性病变患者及正常体检者,而且以胰腺癌最高(56.02％),其次为肠癌(26.57％)、胃癌(23.47％);CA242伴随升高指标以CA19-9最为常见,其次为CEA、CA125、CA153,CA242/CA19-9伴随最常见于胰腺癌(100％),CA242/CEA伴随最常见于结直肠癌(90.73％)和肺癌(80.61％),CA242/CA125伴随最常见于肺癌(75.92％)和肝癌(71.43％);CA242+CA19-9+CEA联合升高最常见于结直肠癌,CA242+CA19-9+CEA+CA125联合升高最常见于肺癌.结论 CA242单项指标升高对胰腺癌、结直肠癌和胃癌的诊断具有较高价值,CA242伴随或联合CA19-9、CEA、CA125有利于提高胰腺癌、结直肠癌及肺癌诊断阳性率.     

APE1／Ref-1在外周血单核细胞破骨样分化中的作用研究

目的探讨脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶(APE1)在核因子κB受体活化因子配体(RANKL)及巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)诱导外周血单个核细胞(PBMCs)破骨样分化过程中的作用。方法采用密度梯度法分离提取人PBMCs;将构建的APE1siRNA表达载体导入分离获得的单个核细胞中。抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色检测是否为破骨样细胞(OCL),蛋白免疫印记法(Western blot)检测单个核细胞APE1蛋白表达,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测OCL中组织蛋白酶K(cathepsin K,CK)及V-ATPase基因表达水平。结果 APE1siRNA可明显降低PBMCsAPE1蛋白表达,与未感染APE1siRNA细胞相比,差异有统计学意义(P<0.05);在RANKL/M-CSF作用下单个核细胞可分化为TRAP阳性的OCL,CK及V-ATPase的表达在基因水平升高;但经APE1siRNA处理后,诱导分化的OCL数量减少,CK和V-ATPase的表达在基因水平降低。结论 PBMCs经RANKL/M-CSF诱导培养后可产生大量OCL,APE1siRNA能明显抑制单个核细胞的破骨样分化,APE1参与调节单个核细胞破骨样分化过程。     

骨桥蛋白在膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义

目的 检测膀胱移行癌(TCCB)中骨桥蛋白(OPN)的表达,探索其与膀胱癌的病理分级和临床分期及临床预后的关系.方法 应用免疫组化方法检测45例膀胱移行细胞癌和12 例正常膀胱壁标本中的OPN 表达,并分析OPN表达与肿瘤分期、分级、复发、转移及患者5年生存率之间的关系.结果 12例正常膀胱组织中,11例(96.7%)为阴性,1例(3.3%)为弱阳性;45例膀胱移行细胞癌中21例(46.7%)为强阳性,14例(31.1%)为中等阳性,7例(15.5%)为弱阳性,3例(6.7%)为阴性.OPN 强染色预示患者较高的复发率和较短的生存时间.结论 OPN表达强度同肿瘤分级、分期、复发、转移、5 年生存率有密切关系,可作为临床评估TCCB进展及检测肿瘤预后的指标.     

人APE1/Ref-1基因真核表达质粒的构建和鉴定

目的 构建含人APE1/Ref-1基因全长cDNA片段的真核表达质粒pcDNA3.1 APE1,以期进一步研究该基因对细胞DNA损伤的保护作用.方法 采用RT-PCR法定向克隆人APE1/Ref-1基因全长cDNA片段,构建pGM-T Easy/APE1质粒,测序鉴定APE1/Ref-1基因cDNA序列正确后,将目的片断亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1 上,构成pcDNA3.1 APE1表达质粒,并用Western blotting法检测转染人脐静脉内皮细胞APE1/Ref-1蛋白的表达水平.结果 经酶切及测序证实APE1/Ref-1基因真核表达质粒pcDNA3.1 APE1构建成功,Western blotting法检测到转染pcDNA3.1 APE1后,细胞内APE1/Ref-1蛋白表达明显增加.结论 成功构建含人APE1/Ref-1基因全长cDNA片段的真核表达质粒,为探讨APE1/Ref-1对细胞电离辐射损伤的保护作用奠定了基础.     

PD-L1基因多态性与肝癌易感性以及预后之间的关系

目的 研究PD-L1基因多态性与肝癌易感性以及患者预后之间的关系.方法 收集我院123例原发性肝癌患者和141例健康体检者的外周血淋巴细胞,应用直接测序法和PCR-SSCP检测PD-L1基因rs4143185,rs2890658和rs17718883三个位点的单核苷酸多态性.结果 rs2890658位点的AC基因型及rs17718883的CG基因型可以显著降低肝癌的发病风险(OR=0.43,P=0.035;OR=0.01,P＜0.001);而rs4143185的GG基因型可能增加肝癌的发病风险(OR=2.80,P=0.057).rs2890658位点AC+ CC和AA的中位生存时间分别为20个月和17个月(P =0.042);rs4143185位点的GC+ GG和CC中位生存时间分别为21个月和15个月,差异有统计学意义(P ＜0.001);COX回归分析显示rs4143185位点的突变基因型都可以获得好的预后,差异有统计学意义(HR＜1;且P＜0.05).结论 PD-L1基因rs2890658和rs17718883两个位点的SNP与肝癌的易感性有关,而rs2890658和rs4143185位点的SNP可能与肝癌的预后有关.     

安罗替尼联合PD-1单抗治疗Lewis肺癌的动物实验研究

目的 探讨安罗替尼联合程序性死亡受体1(PD-1)单抗治疗Lewis肺癌的增强效果,并初步探索其可能的机制。方法 构建Lewis肺癌荷瘤小鼠,将其分为对照组、安罗替尼组、PD-1单抗组和联合组。测量各组小鼠肿瘤质量,利用免疫组织化学检测肿瘤组织免疫细胞浸润和微血管密度,采用细胞因子芯片对各组小鼠血清细胞因子进行检测。结果 与对照组比较,安罗替尼组和联合组移植瘤质量明显减少,安罗替尼组低于PD-1单抗组(P<0.05)。PD-1单抗组、安罗替尼组和联合组抑瘤率分别为-15.35%、73.91%和86.96%。与对照组比较,CD4、CD8水平在安罗替尼组、PD-1单抗组和联合组有不同程度升高,且联合组CD4水平较PD-1单抗组升高,CD8水平较安罗替尼组升高(P<0.05)。与对照组比较,CD68水平在安罗替尼组和联合组有不同程度升高(P<0.05)。与对照组比较,CD206水平在PD-1单抗组和联合组有不同程度降低,且PD-1单抗组低于联合组(P<0.05)。与对照组比较,安罗替尼组和联合组新生血管、MVD减少(P<0.05)。与对照组比较,联合组CCL5水...     

电离辐射诱导骨肉瘤细胞DNA损伤修复蛋白APE1线粒体定位研究

目的 探讨电离辐射诱导骨肉瘤细胞脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶(apurinic/aprimidinic endonuclease 1,APE1)线粒体定位表达情况,为进一步研究线粒体DNA修复在骨肉瘤放射治疗抵抗中的作用提供依据.方法 应用激光共聚焦显微术和Western blot观察正常对照组和12 Gy X线照射后不同时相点骨肉瘤细胞株HOS细胞中APE1线粒体定位情况.结果 对照组、12 Gy X射线处理后1、2、3 h APE1和线粒体有共定位现象,APE1细细胞质/细胞核荧光强度比值分别为:(0.78±0.04)、(1.04±0.03)、(1.14±0.05)、(1.80±0.38).Western blot亦证实线粒体内APE1蛋白表达增高.结论 放射后早期APE1向细胞质线粒体移位,从1～3 h逐渐增高,提示APE1可能在电离辐射后骨肉瘤细胞线粒体DNA损伤修复中发挥重要作用.     

血清多肿瘤标志物胃癌诊断判别方程的建立及其临床意义

目的建立多肿瘤标志物C12检测系统诊断胃癌的判别方程以提高多肿瘤标志物C12检测系统诊断胃癌的准确率。方法对135例初治胃癌患者、212例胃部良性疾病患者及6 741名健康体检者的12种常见肿瘤标志物检测结果及临床资料进行回顾性分析,通过SPSS18.0统计软件采用Fisher二分类判别分析建立判别诊断方程,比较12种肿瘤标志物和判别诊断函数对肿瘤诊断的准确率差异。结果成功建立胃癌诊断判别方程,诊断正确率总体为95.0%,在正常组为96.1%,在胃癌组为43.7%,较12种肿瘤标志物单项检测均明显提高(P<0.05)。结论用C12多肿瘤标志物蛋白质芯片检测系统判别方程可提高胃癌诊断的准确率,具有较高灵敏度和特异度,优于单项肿瘤标志物检测,具有一定的临床参考价值。