呼吸道合胞病毒NS1基因原核表达及其免疫原性分析

目的:原核表达呼吸道合胞病毒(RSV)非结构NS1蛋白,并对其免疫特性进行研究.方法 采用PCR技术获得NS1基因,将其插入pET41a(+)载体上,导人大肠杆菌后诱导表达;利用GST亲和层析柱对诱导表达的NS1蛋白进行纯化,免疫动物制备抗体,Western blot法鉴定抗体的特异性.结果 重组质粒经酶切鉴定和DNA序列测序完全正确,经IPTG诱导后融合蛋白在大肠杆菌BL21-DE3中得到高效表达,表达产物经超声破碎和GST亲和层析纯化获得重组蛋白,分子量约42 000 Mr,以抗NS1蛋白的多克隆抗体为一抗进行Western blot检测,结果只有RSV感染细胞的样品在15 000 Mr处有特异性带显示,其他病毒感染的细胞和阴性对照没有相应条带.结论 NS1基因得到高效表达,免疫制备得到的抗体与RSV感染细胞有特异性反应,与其他常见呼吸道病毒感染细胞无交叉免疫反应.     

双源CT前瞻性心电门控肺动脉成像诊断肺动脉栓塞

目的探讨双源CT前瞻性心电门控(简称前门控)肺动脉成像在诊断肺动脉栓塞(PE)中的应用价值。方法对60例PE患者行双源CT肺动脉成像,按扫描方式随机分为3组:A组,前门控扫描(n=20);B组,回顾性心电门控(简称后门控)扫描(n=20);C组,非心电门控(简称非门控)胸部强化扫描(n=20)。比较3组间的有效辐射剂量(ED)和图像质量评分。结果 3组患者的ED分别为(4.95±1.81)mSv、(15.91±5.01)mSv、(4.61±1.16)mSv;A、B组间和B、C组间差异有统计学意义(P均<0.05),A、C组间差异无统计学意义(P>0.05)。3组图像质量评分的总分分别为57、58、45,A、C组间和B、C组间差异有统计学意义(P均<0.05),A、B组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论前瞻性心电门控技术可在保证图像质量的同时降低辐射剂量,是诊断PE安全、可靠的方法。     

鲜冬虫夏草水提物抗不同致病因子致肺部炎症的药效评价

目的探索鲜冬虫夏草对不同病因造成肺部炎症的治疗作用。方法利用流感病毒和呼吸道合胞病毒(RSV)细胞感染模型,评价鲜冬虫夏草水提物对细胞上清病毒滴度以及细胞炎症介质mRNA表达的抑制作用;采用脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤模型和香烟诱导的小鼠肺损伤模型,评价鲜冬虫夏草水提物的抗肺部炎症损伤的作用。LPS模型中,模型组和各给药组造模前连续灌胃给药5天,第5天进行LPS雾化造模,造模后取支气管肺泡灌洗液(BALF),测定BALF中的白细胞总数、白细胞分类计数、TNF-α和IL-6含量;香烟模型中,模型组和各给药组造模前连续灌胃给药30天,然后开始熏烟造模,于造模前30 min每天继续给予鲜冬虫夏草水提物,造模14天后取BALF,测定BALF中的白细胞总数、白细胞分类计数和角质细胞趋化因子(KC)含量。结果鲜冬虫夏草水提物对流感病毒和RSV在细胞的增殖无显著的体外抑制作用,对流感病毒感染细胞诱导的炎症因子TNF-α、IL-6、CXCL8/IL-8、CXCL10/IP-10、CCL2/MCP-1和CCL5/RANTES mRNA表达的升高具有显著抑制作用,对RSV感染细胞诱导的炎症因子TNF-α、IL-6、CXCL8/IL-8、CXCL10/IP-10和CCL5/RANTES mRNA表达的升高具有显著抑制作用。雾化吸入LPS 4 h后,模型组小鼠肺部出现急性炎症,BALF中白细胞总数、中性粒细胞数、TNF-α和IL-6较正常组明显升高。与模型组比较,鲜冬虫夏草水提物100 mg/kg组、1000 mg/kg组和罗氟司特组BALF中的白细胞总数和中性粒细胞数均显著下降(P0.05或P0.01);熏烟14天后,模型组小鼠肺部出现肺部炎症,BALF中白细胞总数、中性粒细胞数和KC含量较正常组明显升高。与模型组比较,鲜冬虫夏草水提物300 mg/kg组的白细胞总数显著降低(P0.05)。结论鲜冬虫夏草水提物在体内外对呼吸道病毒感染导致的炎症、对LPS和香烟等不同病因导致的肺部炎症均具有一定的治疗作用。     

邓氏清毒饮抗甲型流感病毒及抗炎机制研究

目的探讨邓氏清毒饮对甲型流感病毒（H3N2）的抗病毒活性及其在调节宿主炎症免疫应答中潜在的作 用。方法观察邓氏清毒饮对H3N2 体外活性的影响;用实时荧光定量PCR 检测邓氏清毒饮对A549 细胞感 染H3N2 病毒后白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素8（IL-8）、干扰素诱导蛋白10（IP-10）、肿瘤坏死因子α （TNF-α）、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）及趋化因子配体5（CCL-5）表达的影响。用蛋白印迹实验检测核因子 抑制蛋白-κB（IκBα）、磷酸化核因子抑制蛋白-κB（p-IκBα）、核因子-κB p65（NF-κB p65）、磷酸化核因子-κB p65（p-NF-κB p65）的表达。结果邓氏清毒饮23.4、11.7、5.85 mg·mL-1 可显著抑制H3N2 的体外复制,减少 病毒空斑形成;在mRNA 水平上可显著降低细胞因子IL-6、IL-8、IP-10、TNF-α、MCP-1 及CCL-5 的表 达;蛋白印迹检测发现邓氏清毒饮可下调p-IκBα 和p- NF-κB p65 蛋白表达,增加IκBα 的表达,从而抑制 H3N2 诱导的NF-κB 信号通路激活。结论邓氏清毒饮可抑制H3N2 的体外复制,抑制流感病毒诱导的NF- κB 信号通路激活,降低炎性细胞因子的表达,表明邓氏清毒饮具有防治流感病毒的潜力。     

奥司他韦在树鼩体内的药动及药效学应用研究

目的探讨奥司他韦在树鼩体内的药代动力学参数特征,以及在树鼩体内的抗流感病毒药效作用。方法树鼩经口服磷酸奥司他韦后取血浆用于药代动力学分析,并与人、雪貂、小鼠、大鼠的药代动力学参数比较;树鼩经鼻接种感染人流感病毒A/California/04/2009 H1N1和禽流感病毒H9N2突变株Y280-PB2-E627K,给予奥司他韦治疗,观察鼻腔症状,收集感染后第1,3和5天鼻灌洗液及沉淀分别行病毒TCID50检测和细胞分类计数,检测感染后21 d血清中和抗体滴度。结果奥司他韦在树鼩体内的药代动力学参数为:Cmax:1. 34μg/m L,Tmax:0. 75h,T1/2:2. 03 h,AUC0-12:1. 76 mg·h/liter。奥司他韦对感染A/California/04/2009 H1N1病毒的树鼩鼻腔排毒抑制作用不明显,但高剂量组奥司他韦可明显抑制感染H9N2 Y280-PB2-E627K病毒树鼩第1天的鼻腔排毒,减少第3天鼻灌洗液中细胞总数。感染A/California/04/2009 H1N1病毒后产生的抗体效价明显高于H9N2 Y280-PB2-E627K禽流感病毒的抗体效价,奥司他韦抗病毒治疗对感染同一病毒各组间血清抗体效价无影响。结论奥司他韦在树鼩体内的药代动力学参数不同于人或雪貂等模型动物,但其药物血浆清除半衰期和达峰时间与小鼠相近;药效学方面奥司他韦可有效抑制感染H9N2 Y280-PB2-E627K流感病毒树鼩的鼻腔病毒排毒和炎症反应。     

臭灵丹乙醇提取物体外抑制甲1型流感病毒实验研究

目的 研究臭灵丹乙醇提取物体外抑制甲1型流感病毒感染药效.方法 采用细胞病变抑制法,在预防和治疗2种试验策略下,探讨臭灵丹乙醇提取物体外对流感病毒的抑制作用及环节.结果 臭灵丹乙醇提取物的TC50为3.07 mg/mL,在预防模式和治疗模式中,臭灵丹对甲1型流感病毒PR8株均有抑制作用,IC50分别为0.31 mg/mL,0.73 mg/mL,选择指数(SI)分别为9.90和4.21.结论 臭灵丹乙醇提取物体外对甲1型流感病毒感染具有一定的抑制作用,在预防模式下效果较好.     

呼吸道病毒诊断与临床管理的融合之路

[视频简介]由于新发突发呼吸道病毒传染病不断涌现,催生了病毒检验技术的蓬勃发展,使临床诊疗效率大幅提升.但临床管理及病毒检验技术的极度不匹配造成检验与临床存在"鸿沟",检验如何更好服务于临床成为重要课题.以疾病为导向,临床实际需求指导检验技术研发才能使检验更好得服务于临床诊疗;根据病程不同阶段,结合医院实际,应用不同分...     

广州地区2009年乙型流感病毒血凝素基因特征分析

根据抗原性和基因特异性的差异,乙型流感病毒可分为B/Victoria/2/87系(Victoria系)和B/Yamagata/16/88系(Yamagata系)[1].血凝素(HA)基因与该病毒的进化趋势相关[2],HA的抗原变异主要发生在HA1区域[3],该区域4个主要的抗原表位[120-loop(HA1 116-137)、150-loop(HA1141-150)、160-loop(HA1 162～167)和190-helix(HA1194-202)]如发生变化,往往引起变异相关病毒株进化方向的改变[4].为了解2009年乙型流感病毒进化情况,本研究分析了HA1基因特点.     

人ω干扰素克隆、表达及体外抑制冠状病毒昆徐株作用的研究

目的 制备人ω干扰素(hIFN-ω)并初步研究其体外抗普通冠状病毒活性.方法 制备hIFN-ω cDNA,并在大肠杆菌BL-21中高效表达、纯化后,测定了hIFN一ω的抗滤泡口膜炎病毒(VSV)和冠状病毒昆徐株活性.结果 成功地获得了hIFN-ω GST融合蛋白,利用WISH-VSV系统检测hIFN-ω的抗病毒活力为7.81×104 kU/L;与基因工程α干扰素(IFN-a2b)的比较发现,hIFN-ω可以明显抑制冠状病毒昆徐株的活性,而IFN-α2b未见此活性.结论 hIFN-ω具有抑制冠状病毒昆徐株的活性,有独特的抗呼吸道病毒作用;不同的干扰素亚型对不同的病毒敏感性有所差异.     

板蓝根抗流感病毒有效成分研究进展

板蓝根为十字花科植物菘蓝的干燥根,是清热解毒、凉血利咽的代表性中药,临床上常用于防治呼吸道病毒性疾病。目前,板蓝根中的逾百种化学成分被鉴定,分子多样性十分丰富,然而对于这些化合物如抗流感病毒有效成分的药理活性等多缺乏系统评价和论述。本文综述了板蓝根活性成分分离和鉴定的最新概况,深入探讨板蓝根抗流感病毒抗炎药效活性成分的现代药理研究新进展,为中药材二次开发研究及其应用提供新的思路和参考。