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41.
目的:探讨腺病毒介导的ING4基因表达对NCI-H460肺癌细胞裸鼠移植瘤的抑癌增效作用及分子机制。方法:用Ad-ING4重组腺病毒在裸鼠NCI-H460移植瘤的瘤体内注射治疗,观察肿瘤生长变化,治疗结束后3 d处死裸鼠、摘取瘤体并称瘤体重量;免疫组织化学检测瘤体组织中B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、半胱... 相似文献
42.
人IL-31基因克隆、表达及在皮肤炎症中的作用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 克隆人IL-31基因,构建原核表达载体,并诱导其在大肠杆菌中表达,研究hIL-31蛋白与皮肤炎症的关系.方法 采用RT-PCR克隆人IL-31基因,将其克隆到原核表达载体pET28a( ),并通过IPTG诱导目的基因在大肠杆菌中表达,用该目的蛋白刺激人表皮角质细胞HaCaT,RT-PCR检测趋化因子MIP-3β、TARC及TCA-3(I-309)mRNA的表达;小鼠皮内注射该目的蛋白,观察局部炎症表现,皮肤标本HE染色观察皮肤炎性特征,采血进行白细胞计数及分类,ELISA法检测血清IL-1βIL-6和TNF-α水平,流式细胞仪分析胸腺及脾脏T细胞亚群.结果 成功获得495bp的人IL-31基因,原核表达质粒构建正确,IPTG诱导目的基因在大肠杆菌中大量表达;该目的蛋白可刺激HaCaT表达趋化因子MIP-3β、TARC、I-309;小鼠皮肤注射部位有脱毛,HE染色可见炎性细胞浸润,外周血白细胞总数增加,中性粒细胞比例增高,血清IL-1β、IL-6和TNF-α水平增高,脾脏CD4 T细胞百分比增高,CD8 T细胞百分比减少.结论 人IL-31基因克隆及原核表达已获成功,hIL-31蛋白可刺激HaCaT细胞表达MIP-3β、TARC、I-309,诱导小鼠皮肤炎症反应. 相似文献
43.
目的: 研究腺病毒介导的肿瘤生长抑制因子4(inhibitor of growth family 4,ING4)联合放疗对肺腺癌SPC-A1细胞移植瘤生长的抑制作用。 方法: 制备SPC-A1细胞荷瘤小鼠模型,随机分为PBS组、Ad组、Ad-ING4组、放疗组、Ad-ING4+放疗组。测量各组荷瘤小鼠移植瘤的体积变化,治疗15 d后摘取瘤块,称质量并计算抑瘤率;H-E染色观察瘤体组织细胞的形态学变化,免疫组化法检测瘤体组织中Bax、caspase-3、Bcl-2、VEGF等因子的表达。 结果: 治疗后第15天SPC-A1移植瘤体积:Ad-ING4组为(1 136.03±151.58)mm3、单纯放疗组为(1 035.67±86.27)mm3、Ad-ING4+放疗组为 (743.84±10906)mm3 ,联合组可有效抑制肿瘤生长(P<0.01);此外,联合组抑瘤率也显著高于单纯Ad-ING4组或放疗组(6962% vs 33.17%、3541%, P<0.01),呈现放疗增敏协同作用 (Q=1.22)。免疫组化结果显示,Ad-ING4及其联合放疗组能明显上调Bax、caspase-3等蛋白的表达,下调Bcl-2、VEGF等蛋白的表达,且Ad-ING4+放疗组对这些蛋白表达的调节作用强于Ad-ING4组、单纯放疗组(P<0.01)。 结论: Ad-ING4联合放疗可有效抑制肺腺癌SPC-A1细胞移植瘤的生长。 相似文献
44.
目的构建表达人脑源性神经营养因子hBDNF的基因工程菌。方法人工合成1对含EcoRI和BamHI限制性酶切位点的特异引物,以人血白细胞基因组DNA为模板。应用PCR技术扩增hBDNF成熟肽基因。用A-T克隆法与pUCm-T载体连接后,再定向插入原核表达载体pBV220,将重组体pBV220.hBDNF转化大肠杆菌DH5a,经42℃热诱导表达。结果经限制性酶切和DNA测序证明重组入载体中的DNA片段确为hBDNF,并成功表达出hBDNF蛋白。结论该研究成功地克隆出hBDNF基因编码序列并在大肠杆菌中获得稳定表达,表达效率达25%,为今后生物学活性的研究和神经系统疾病的基因治疗奠定了基础。 相似文献
45.
目的:探索米托蒽醌(MTN)对HL-60细胞生长的影响。方法:取对数生长期HL-60细胞,不同浓度MTN作用不同时间后,利用MTT法观察MTN对HL-60细胞的抑制效应,透射电镜,DNA电泳观察MTN作用HL-60细胞后其形态学及DNA的变化。结果:(1)毫微克级的MTN对HL-60细胞有明显的抑制效应。且此效应具有时间,剂量依赖关系。(2)MTN作用后的HL-60细胞透射电镜观察胞膜完整,出现核碎裂,凋亡小体等形态学特征。DNA电泳出现200bp左右的梯形条带。结论:MTN对HP-60细胞有明显的抑制作用。小剂量的MTN对HL-60细胞以诱导细胞凋亡为主,大剂量的MTN对HL-60细胞以细胞毒作用为主。 相似文献
46.
目的 观察奥沙利铂对肺腺癌细胞系A5 4 9的药物敏感性和诱导细胞凋亡作用。方法 将不同浓度的奥沙利铂与A5 4 9作用 2 4、36、4 8h ,用MTT法计算细胞生长抑制率 ,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 奥沙利铂对A5 4 9的细胞生长抑制率随作用浓度和作用时间的增加而增大。 12 .5、2 5、5 0、10 0 μg/ml奥沙利铂对A5 4 9作用 2 4h ,细胞凋亡率分别为 35 %、13.6 %、2 .6 %、1.4 %。结论 奥沙利铂对A5 4 9细胞有生长抑制作用 ,呈剂量依赖性和时间依赖性 ;能引起细胞凋亡 ,细胞凋亡率呈剂量依赖性 ,与细胞生长抑制率呈正相关关系 (P <0 .0 1)。 相似文献
48.
不同表达载体对人白细胞介素-18原核表达效率的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 探讨PBV220及PJW2载体构建的rhIL—18重组质粒的IL—18表达效率。方法 将构建的PBV220/rhIL—18重组质粒中的rhIL—18酶切、克隆到表达载体PJW2中,经PCR产物电泳及测序鉴定,热诱导后在大肠杆菌中表达。结果 PJW2/rhIL—18表达的重组人IL—18占菌体总蛋白质的20%,而PBV220/IL—18重组质粒表达的重组人IL—18占菌体总蛋白质的16%。两者表达的蛋白质分子量约为18KD,与预期分子量相符。结论 PJW2载体rhIL—18表达效率高于PBV220,为下一步的纯化及提高蛋白产量打下了基础。 相似文献
49.
目的:探讨糖基磷脂配肌醇锚蛋白(GPI-AP)在骨髓增生异常综合征(MDS)患者外周血细胞上的表达情况。方法:利用免疫荧光标记技术和流式细胞仪的方法,对20名正常人、36例MDS、42例阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)和再障—PNH(AA—PNH)综合征患者的外周血细胞表面GPI-AP:退变加速因子(DAF,CD55)和反应性溶血膜抑制物(MIRL,CD59)表达情况进行分析。结果:部分MDS患者血细胞有GPI-AP的缺乏,缺陷红细胞、粒细胞异常率均明显低于PNH或AA—PNH综合征患者(P<0.005)。结论:部分MDS患者血细胞有锚蛋白的表达缺陷,缺陷细胞的检出率较低且以Ⅱ型细胞为主。 相似文献
50.
目前国内有许多实验室正在制备干扰素应用于临床。各实验室所测得的干扰素单位,习惯上都用工作单位表示。但由于干扰素的效价测定可受下列多种因素的影响而难以比较。1.不同细胞对干扰素的敏感性各不相同。2.不同病毒对干扰素的敏感性也 相似文献