腺病毒介导白细胞介素24基因转染对胫骨癌痛大鼠的镇痛效应

目的 评价腺病毒介导白细胞介素24基因转染对胫骨癌痛大鼠的镇痛效应.方法 将已构建好的含IL-24基因的腺病毒(Ad-IL-24)和空白腺病毒载体(Ad-GFP)转入QBI-293A细胞,多次扩增后获得高效价病毒.雌性SD大鼠32只,体重180～200 g,随机分为4组(n=8):对照组(C组)、PBS阴性对照组(PBS组)、Ad-GFP组和Ad-IL-24组.C组不做任何处理,其余3组均于左侧胫骨骨髓腔内接种Walker 256乳腺癌细胞建立胫骨癌痛模型,建模后第9天分别在术侧后肢局部皮下注射PBS70μl、Ad-GFP70 μl和Ad-IL-24 70 μl,隔天给药,共3次.于接种前(基础状态)、接种后3、6、8、10、12、14d时测定机械痛阚;于接种后14 d时,取术侧胫骨组织,观察肿瘤细胞生长情况和骨小梁破坏情况;取股动脉血样测定血浆肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6、β-内啡肽、干扰素γ(IFN-γ)的浓度.结果 C组胫骨骨髓腔内未见异常,PBS组和Ad-GFP组肿瘤向外生长,骨小梁和骨皮质破坏;Ad-IL-24组骨小梁破坏程度较轻;骨皮质完整.与C组和基础值比较,PBS组、Ad-GFP组和Ad-IL-24组其余各时点机械痛阈降低(P<0.05);与PBS组和Ad-GFP组比较,Ad-IL-24组机械痛阈升高,血浆IFN-γ、β-内啡肽、TNF-α的浓度升高,IL-6浓度降低(P<0.05);PBS组和Ad-GFP组间上述指标差异无统计学意义(P>0.05).结论 腺病毒介导-IL-24基因转染对胫骨癌痛大鼠可产生一定程度的镇痛效应,其机制与其可抑制肿瘤细胞生长和调节细胞因子分泌有关.     

rhIL-24基因抑制胃癌生长及作用机制的实验研究

目的 探讨rhIL-24蛋白体外对胃癌生长的影响及作用机制。方法用已构建成功的真核表达载体pcDNA3．0-IL24质粒转染中国仓鼠卵巢细胞CHO细胞，使其上清稳定表达rhIL-24。同时用已构建成功的原核表达载体PET21a（＋）IL-24．BL-21。抽提BL-21菌中表达的rhIL-24，行SDS-PAGE电泳和Western-Blotting鉴定rhIL-24的表达，MTT法检测rhIL-24对SGC7901胃癌细胞生长的影响；Hoechst染色、流式细胞术检测CHO细胞和BL-21菌表达的rhIL-24诱导胃癌细胞凋亡；鸡胚绒毛尿囊膜试验观察rhIL-24对血管形成的影响。结果rhIL-24对胃癌细胞的生长有明显的抑制作用；rhIL-24可诱导SGC7901胃癌细胞凋亡；rhIL-24具有抑制血管形成的作用。结论rhIL-24蛋白有多重抗肿瘤能力，其可能的作用机制是明显抑制胃癌细胞增殖，诱导肿瘤细胞凋亡，抑制血管生成。     

以CpG为佐剂的人IL-24多克隆抗体的制备

目的：采用在原核表达系统表达的人IL-24蛋白及人IL-24真核重组质粒免疫新西兰兔，制备兔抗人IL-24多克隆抗体。方法：利用IPTG诱导hIL-24在大肠杆菌中表达，纯化hIL-24重组蛋白，纯化后的蛋白经SDS—PAGE分析，同时提取hIL-24真核重组质粒，用以免疫新西兰兔，并以CpG为佐剂制备多克隆抗体。Western-blot鉴定抗体的特异性，ELISA法测定抗体效价。结果：人IL-24经IPTG诱导后可在大肠杆菌中大量表达，表达量占细菌总蛋白的30％，纯化后的蛋白纯度高；原核表达的重组蛋白和真核重组质粒免疫新西兰兔，通过抗体效价测定，获得了抗血清效价达1：640的多克隆抗体。结论：原核表达的hIL-24蛋白和hIL-24真核重组质粒均能刺激家兔产生抗体．其多克隆抗体的效价较高。     

重组人白细胞介素3和白细胞介素6对骨髓基质细胞生长的调节作用

目的了解重组人白细胞介素３（ｒｈＩＬ－３）和重组人白细胞介素６（ｒｈＩＬ－６）对骨髓造血微环境的调节作用。方法应用成纤维细胞体外集落形成法，观察了ｒｈＩＬ－３和ｒｈＩＬ－６对成纤维细胞集落（ＣＦＵ－Ｆ）体外生长的影响。结果ｒｈＩＬ－３和ｒｈＩＬ－６能显著地刺激ＣＦＵ－Ｆ的生长，两者联合应用时对ＣＦＵ－Ｆ生长的刺激作用明显强于两者单用，表现出协同效应。结论ｒｈＩＬ－３和ｒｈＩＬ－６可促进基质细胞生长，对促进化疗和（或）放疗及骨髓移植后造血微环境的恢复和重建具有重要的临床应用潜能     

人β-NGF基因在大肠杆菌中的表达

目的:为β-NGF的基因制药选择一种新方法。方法：直接从人血细胞基因组DNA中PCR扩增出β-NGF基因片段，将构建的重组体pBV220-β-NGF转化大肠杆菌DH5α，并将筛选的阳性克隆通过4212诱导表达。结果经限制酶酶切电泳和DNA测序证实，确为β-NGF全长序列(约380bp)；全菌经SDS-PAGE电泳显示表达了β-NGF蛋白。结论：成功克隆了β-NGF基因全长序列并在大肠杆菌中获稳定表达。     

兔角膜基质细胞培养及对病毒敏感性的实验研究

目的 研究体外培养兔角膜基质细胞对病毒的敏感性。方法 采用微量细胞病变法,观察体外培养的兔角膜基质细胞对单纯疱疾病毒Ⅰ、Ⅱ型(herpes simplex virus Ⅰ、Ⅱ,HSV-Ⅰ、Ⅱ)、腺病毒3型(adenovirus type 3,Ad3)、滤疱性口腔炎病毒(vesicularstomatitis virus,VSV)等4种病毒的敏感性。结果 病毒接种于兔角膜基质细胞48h,HSV-Ⅰ和HSV-Ⅱ效价(TCID_(50))分别为64×10~(-3)、128×10~3,VSV效价(TCID_(50))为10~(-2),Ad3不引起细胞病变。结论 兔角膜基质细胞对HSV-1、HSV-2均敏感,对VSV、Ad3不敏感。     

IL—6,TNF与偏头痛相关性研究

本文发现偏头痛患者外周血中ＩＬ－６、ＴＮＦ炎性细胞因子水平明显高于对照组，不仅发作肮于缓解期，而且复采标本者血浆ＩＬ－６、ＴＮＦ水平之产是以及发作期与缓解ＩＬ－６或ＴＮＦ水平之间呈正相关。     

兔眼角膜、结膜成纤维细胞的培养

目的 建立眼角膜、结膜细胞体外培养的方法。方法 采用组织块培养法培养兔眼角膜基质及结膜成纤维细胞。结果 结膜成纤维细胞在培养10天以后可以形成单层细胞。眼角膜成纤维细胞在培养瓶中培养2周后可形成单层；24孔板培养3d后细胞贴壁生长旺盛，10d形成单层。结论 眼角膜、结膜成纤维细胞组织块培养法是可行的，但在24孔培养板上眼角膜成纤维细胞比在培养瓶中贴壁快而且容易生长。     

牛磺酸抑制新生大鼠心肌重塑的体外研究

目的 通过牛磺酸对新生大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成及对I／Ⅲ型胶原比值的影响,从细胞水平探讨其在体外抑制心肌重塑的作用。方法 在培养的心肌成纤维细胞中加入不同浓度的牛磺酸,用羟脯氨酸法测定胶原量,MTT比色法检测细胞增殖情况,SDS-PAGE电泳测胶原I／Ⅲ型比值。结果 100mmol／L、200mmol／L牛磺酸用药24h和48h及50mmol／L用药72h后能明显抑制心肌成纤维细胞的增殖及胶原的合成,I／Ⅲ型胶原比值明显下降。结论 牛磺酸能通过抑制心肌成纤维细胞增殖和胶原合成,降低I／Ⅲ型胶原比值起到抗心肌重塑的作用。     

应用密度梯度离心法分离扩增兔骨髓基质细胞的体会

目的探讨密度梯度离心法分离培养兔骨髓基质干细胞(BMSc)的条件,为组织工程学选择合适的种子细胞奠定基础。方法采用密度梯度离心法将兔BMSc自小量骨髓中分离并培养,观察其增殖和生长特性,绘制生长曲线,测定分裂指数和贴壁率。结果兔．BMSc在第7代前性状稳定,生长曲线相似;第4天分裂指数最高为15％;传代后10h贴壁率高达90％。结论密度梯度离心法是分离兔BMSc的理想方法,BMSc能为未来组织工程提供足量种子细胞。