吡喹酮、阿奇霉素联合治疗儿童脑囊虫病50例

目的　观察吡喹酮、阿奇霉素 (prasiquantel)联合治疗儿童脑囊虫病的疗效以及治疗过程中的不良反应。方法　给予临床确诊的脑囊虫病 5 0例患儿口服吡喹酮 2 0mg (kg·d) ,10d一疗程 ,共行 3个疗程 ;阿奇霉素 10mg (kg·d) ,每日 1次 ,每疗程连续服用 3d。观察临床症状、影像学及实验室检查结果 ,根据疗效评定标准 ,计算有效率。结果　 5 0例痊愈 33例 ,显效 16例 ,进步 1例 ,有效率98% ;随访 2年 ,未见明显异常。结论　吡喹酮、阿奇霉素联合治疗脑囊虫病近远期疗效佳 ,且副作用较少。     

灭活卡介苗经皮接种治疗婴幼儿哮喘对IgE ECP IFN-γ IL-4水平的影响

目的　为进一步探讨灭活卡介苗治疗婴幼儿哮喘的免疫学作用机制 ,应用灭活卡介苗经皮接种 ,观察患儿机体IgE、嗜酸性细胞阳离子蛋白 (ECP)、IFN γ、IL 4的水平变化及改变程度。方法　将哮喘患儿随机分为常规治疗组 (常规组 )与灭活卡介苗治疗组 (卡介苗组 ) ,进行 6个月的治疗后 ,观察患儿在治疗前后的IgE ,ECP ,IL 4 ,IFN γ的变化 ,另设 2 0例正常儿童作为对照组。结果　①治疗前卡介苗组和常规组IgE ,ECP与IL 4均高于对照组 ,IFN γ低于对照组 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;卡介苗组与常规组比较差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;②卡介苗组治疗后ECP与IL 4低于治疗前 ,IFN γ较治疗前有升高 ,其差异均有显著性 (P <0 .0 5 ) ,IL 4和IFN γ呈明显负相关 ,且IFN γ与IL 4的变化各自均有明显的线性关系。IgE在治疗前后无显著性差异 (P >0 .0 5 )。常规组治疗前后IgE ,ECP与IL 4水平差异无显著性 ,但IFN γ水平治疗后增加 ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论　灭活卡介苗治疗能刺激婴幼儿哮喘患儿IFN γ生成增多 ,下调IL 4水平 ,可能与干预治疗能诱导TH1细胞的优势分化 ,调节TH1 TH2平衡有关 ;同时 ,能降低ECP水平 ,减轻气道慢性炎症反应 ;但短期内对IgE水平未发现有显著影响。     

高压氧治疗对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用(英文)

目的　探讨高压氧 (HBO)治疗对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)的保护作用。方法　 7日龄Sprague Dawley(SD)新生大鼠随机分为 4组 (n =10 ) :正常对照组 ,HIBD组 ,高压空气治疗组 (HBA)和高压氧治疗组 (HBO)。HBA组和HBO组于缺氧缺血后分别行HBA和HBO治疗 [2个绝对压 (ATA) ,1h],每日 1次连续 7d。至 30日龄开始对各组动物进行放射形迷宫测试以及感觉运动功能检测。行为学试验验结束后 (日龄 35天 ) ,采用尼氏染色检测海马CA1区锥体细胞密度。结果　HIBD组大鼠的学习、记忆和感觉运动功能受损严重 ,HBO组行为学损伤明显改善 ,而HBA组改善不明显。HIBD组和HBA组左脑CA1区锥体细胞密度低于HBO和对照组(P <0 .0 1)。结论　HBO治疗能够减少新生大鼠缺氧缺血后脑损伤 ,促进学习记忆功能和感觉运动功能的改善。     

不同疗程高压氧对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠神经干细胞增殖和分化的影响

目的 探讨不同疗程高压氧(HBO)对缺氧缺血脑损伤(HIBD)新生大鼠神经干细胞(NSCs)增殖和分化的影响.方法 7日龄SD大鼠随机分为正常对照组(CON组)、HIBD组、HBO组,其中HBO组义分为HBO l疗程组[HBO-1,在HIBD 2 h开始HBO治疗,HBO压力为0.1 MPa(2 ATA),稳压60 min,1次/d,7次为1疗程],2疗程组(HBO-2,予2个疗程HBO)和3疗程组(HBO-3,予3个疗程HBO).疗程结束后(鼠龄35 d)取脑组织标本,采用5-溴-2-脱氧嘧啶核昔(BrdU)/神经巢蛋向(Nestin)免疫荧光双标法检测缺血侧侧脑室室管膜下区(SVZ区)和海马齿状回区(DG区)的内源性NSCs的变化.Western blot法检测缺血侧大脑半球Nes-tin蛋白变化.BrdU/神经元特异性烯醇化酶(NSE)和BrdU/胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光双标法检测大脑皮层神经元和星形胶质细胞数量;TUNEL法检测皮层神经细胞凋亡;并进行T迷宫试验、放射臂迷宫测试、足错误等行为学测试.结果 1.HBO治疗后SVZ区BrdU+/Nestin+细胞随疗程增加而逐渐增加,以HBO-3组的阳性细胞数最多;2.各组大鼠的海马DG区均仅有极少垦的BrdU+/Nestin+细胞表达,且随着HBO疗程的增加,BrdU+/Nestin+细胞表达无增加;3.大脑皮层BrdU+/NSE+细胞表达随HBO疗程增加逐渐增多,其中以HBO-3组的阳性细胞数最多;4.HIBD组可见较多GFAP+细胞,高于CON组和HBO组;且各组均仅有个别BrdU+/GFAP+细胞表达;5.Western blot显示HBO-3组Nestin蛋白表达高于其余各组;6.T迷宫、放射臂迷宫和足错误测试结果 均表明随着HBO疗程的增加,疗效愈加显著.结论 增加HBO疗程可促进HIBD新生大鼠SVZ区内源性NSCs皮层神经元细胞的增殖和分化.     

姜黄素诱导HSP70及对大鼠感染性脑水肿保护作用的研究

目的：研究姜黄素预处理诱导HSP 70表达的量效和时效关系及对感染性脑水肿的保护作用。方法：①量效及时效关系的研究:SD大鼠随机分为空白对照组、二甲亚砜(DMSO)组、热休克(HS)组和姜黄素(CUR)组;再根据姜黄素的剂量(mg/kg)分为80 mg,40 mg,20 mg及10 mg组。根据观察时间分为0,2,4,6,12,16,24 h及48 h组。Western印迹分析检测脑组织HSP70。②脑水肿保护作用研究:SD大鼠随机分为生理盐水对照组(NS)、感染性脑水肿组(PB)、二甲亚砜组、热休克预处理组和姜黄素预处理组。制备感染性脑水肿模型,用干湿法测定脑含水量;原子光谱吸收法测定脑组织钠、钾含量。结果：正常情况下,脑组织有一定量HSP70的表达,DMSO,CUR 20 mg和CUR 10 mg组HSP70表达无明显增多;HS,CUR 40 mg及CUR 80 mg组HSP70明显增加,以CUR 40 mg组明显,差异有显著性(P<0.01)。HSP70在注射姜黄素后2 h开始表达,16 h达高峰,24～48 h处于稳定状态。HS组、CUR组的脑含水量和脑组织钠离子含量与PB组比较有明显降低,差异有显著性(P<0.01)。结论：姜黄素可诱导大鼠脑组织HSP70的产生,有剂量及时间依赖关系。姜黄素预处理对大鼠感染性脑水肿有保护作用。     

新生大鼠神经干细胞的分离培养

目的： 探讨新生大鼠神经干细胞的分离培养方法及其外源报告基因在神经干细胞中的表达情况。方法： 采用无血清细胞培养技术，间接免疫细胞化学染色法及其绿色荧光蛋白转导技术。结果： 从新生大鼠脑组织分离的细胞具有连续克隆能力，表达神经上皮干细胞蛋白，诱导分化后的细胞表达成熟神经细胞和星形胶质细胞特异性的蛋白。绿色荧光蛋白报告基因转导神经干细胞后能够有效表达。结论： 该方法分离培养的神经干细胞保持了干细胞的未分化属性，具有自我更新、增殖能力和多分化潜能，而且外源报告基因在神经干细胞中能够有效表达。     

高压氧对新生大鼠缺氧缺血脑损伤模型脑组织神经细胞凋亡及超氧化物歧化酶和脂质过氧化物的影响

目的探讨高压氧（HBO）对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）模型脑组织神经细胞凋亡和超氧化物歧化酶（SOD）、脂质过氧化物（MDA）的影响。方法新生7d龄健康SD大鼠随机分为4组：空白对照组（n=68），假手术组（分离左颈总动脉后不结扎直接缝合皮肤，n=66），HIBD组（模型制作采用经典的Rice法，n=60），HBO组（HIBD后行HBO治疗，1h／次／d，最长治疗7d，n=66）。TUNEL试剂盒检测脑组织凋亡的神经细胞，黄嘌呤氧化酶法测定SOD活力（nU／m1）和化学比色法测定MDA含量（μmol／L）。结果（1）缺氧缺血后不同时间HIBD组皮质和海马神经细胞凋亡明显增多，24h达高峰后逐渐下降；HBO组凋亡细胞数较HIBD组明显减少，但仍较空白对照组和假手术组高，差异有统计学意义（P〈0．05）；（2）缺氧缺血后HIBD组SOD含量下降，HBO治疗后SOD的含量较HIBD组升高，且随着治疗时间的延长SOD的水平逐渐升高，24h达高峰，然后逐渐下降，各组比较差异有统计学意义（P〈0．05）；（3）缺氧缺血后HIBD组MDA含量明显升高，18至24h达高峰，随着时间的推移逐渐下降；HBO治疗后MDA含量较HIBD组明显降低，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论HBO治疗可减轻HIBD后神经细胞凋亡，机制可能与HBO诱导脑组织SOD的表达，增强组织的抗氧化应激损伤有关。     

Superfect 高效介导PDX-1基因在骨髓间质干细胞表达

目的：构建含有胰腺十二指肠同源框1(PDX-1)基因的真核表达载体，并提高重组载体在骨髓间质干细胞(MSCs)的表达效率，为骨髓MSCs作为糖尿病基因治疗的靶细胞奠定基础。 方法：RT-PCR体外扩增PDX-1 基因，双酶切后整合入相同双酶切的真核表达载体构建重组载体，对重组载体进行酶切分析和序列测定进行鉴定；利用Percoll 细胞分离液体外培养大鼠骨髓MSCs，流式细胞仪检测细胞周期后，Superfect 介导正确重组的载体转染骨髓 MSCs，检测转染效率和细胞存活率从而对转染条件进行优化；G418筛选阳性细胞后，RT-PCR 和Western blotting 检测PDX-1 基因在骨髓 MSCs 中的表达。 结果：重组载体双酶切分析和序列测定证实重组载体构建成功。流式细胞仪显示 85.9%的MSCs处于G₀/G₁期，提示骨髓MSCs具有强大的分化潜能；荧光显微镜下成功转染的细胞呈现全细胞绿色荧光，Superfect 介导的转染效率和细胞存活率与其绝对用量和孵育细胞的时间有关；RT-PCR显示转染后PDX-1基因在骨髓 MSCs表达，随转染时间延长，表达逐渐增强，与Western blotting结果一致。结论：成功构建了含有PDX-1 基因的真核表达载体；Superfect 能高效介导外源性基因在骨髓MSCs 中表达；转染外源性基因的MSCs可望成为一种理想的基因治疗的载体细胞。     

脂质体介导外源性基因在骨髓基质细胞表达

目的：用阳离子脂质体介导真核表达载体pEGFP-PDX-1转染大鼠骨髓基质细胞，并对其转染条件进行优化以获得较高效率。方法：构建的重组载体鉴定后，以脂质体介导其转染骨髓基质细胞,改变DNA,脂质体的量,在荧光显微镜下观察荧光并计算转染效率；转染后48 h进行细胞免疫组化染色检测目的基因的表达情况。结果：限制性酶切分析证实重组后的载体成功载入PDX-1基因；克隆的目的片断经序列测定与GenBank公布的序列一致；质粒∶脂质体为1∶1或1∶2的转染效率最佳；细胞免疫化学染色检测证实转染后骨髓基质细胞有PDX-1基因表达。结论：成功构建了含有PDX-1基因的真核表达载体；通过优化转染条件提高了pEGFP-PDX-1转染大鼠骨髓基质细胞的效率,为成为组织工程的种子细胞提供了实验依据。     

黄芩苷对胰岛细胞瘤细胞系增殖的影响

目的：探讨黄芩苷对胰岛细胞瘤细胞的影响及其分子机制。方法：应用光学显微镜、MTT测定、流式细胞仪和Western blotting等方法,研究 0,100,200,400μg/ml黄芩苷处理胰岛细胞瘤细胞24h,或200μg/ml黄芩苷处理胰岛细胞瘤细胞不同时间后,黄芩苷对细胞增殖速度、细胞存活率、细胞周期分布的影响。结果：随黄芩苷浓度增加,细胞增殖受到抑制,细胞的生存率逐渐下降;随着黄芩苷作用时间的延长,细胞的生存率也逐渐下降;流式细胞仪结果显示,随着黄芩苷处理浓度增加,S 期细胞明显减少,从38.2％ ( 0μg/ml)下降至9.4％ (400μg/ml),G0/G1期细胞所占百分率增加,从56.4％(0μg/ml)上升至85.9％(400μg/ml),细胞出现G1阻滞。同时,Western blotting结果显示细胞周期蛋白cyclin D1表达显著下调。结论：黄芩苷能抑制胰岛细胞瘤细胞株增殖;黄芩苷诱导所致细胞周期蛋白cyclin D1表达下调在其中起着重要作用。