STI571诱导K562细胞耐药前后基因差异表达的研究

目的研究STI571诱导K562细胞耐药前后基因差异表达情况,探讨其耐药机制。方法用药物浓度逐步递增的方法诱导野生型K562细胞（K562-W）对STI571产生耐药,用台盼蓝染色、MTT法对耐药K562细胞（K562-R）进行特性鉴定。应用DNA芯片技术对STI571耐药前后的K562细胞的基因差异表达进行检测。结果诱导出K562-R-的耐药浓度为0．5／μmol／L,活细胞比例为98．5％。芯片结果发现662个基因出现差异表达。其中335个基因表达上调,327个基因表达下调。结论利用DNA芯片技术挑选与耐药可能相关的基因。可为STI571耐药机制的研究提供新的切入点。     

实时荧光定量PCR分析CML患者HMGA2基因的表达及其临床意义

摘 要　目的：分析慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia, CML)患者外周血中高迁移率蛋白A2基因（high mobility group A2,HMGA2）mRNA的表达及其相关临床特征,探讨它们在CML演进中的作用及临床意义。方法：采集2006年1月至2008年2月在南方医科大学南方医院血液科就诊的24例CML和5例健康对照的骨髓和外周血标本（所有参与试验及贡献骨髓和外周血标本的患者均知情同意,并经伦理委员会批准）,以荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization, FISH）技术检测CML骨髓标本间期细胞BCR/ABL融合基因的表达,实时荧光定量(real-time fluorescence quntitative)PCR（RTQ-PCR）技术对HMGA2 mRNA的表达进行相对定量分析,采用秩和检验比较CML患者不同阶段HMGA2转录水平,以Spaearman方法分别对HMGA2转录水平与BCR/ABL融合基因水平、外周血液学参数进行相关性分析。结果：12例CML-CP患者BCR/ABL阳性细胞率为(58.08±39.21)%,HMGA2相对定量为2.39±1.86;12例CML-AP/BP患者BCR/ABL阳性细胞率为(87.50±16.21)%,HMGA2相对定量为91.78±14.07。CML-AP/BP患者HMGA2转录水平与CML-CP患者之间的差异有统计学意义（Z=-4.157,P<0.01）, CML-AP/BP患者HMGA2转录水平与外周血原幼细胞数呈正相关关系（r=0.636,P=0.017）。结论：CML患者HMGA2转录水平在AP/BP期显著高于CP期,HMGA2有可能成为预测CML疾病演变、判断预后和指导临床治疗的可靠指标。     

三尖杉酯碱诱导K562细胞凋亡的蛋白质组研究

目的　应用比较蛋白质组技术 ,寻找并鉴定与细胞凋亡相关的蛋白质 ,探讨三尖杉酯碱(HT)促进白血病细胞凋亡的分子机制。方法　应用AnnexinⅤ和PI双染法 ,通过流式细胞术区分HT诱导K5 6 2细胞凋亡早期和凋亡晚期阶段。并进一步运用比较蛋白质组的研究方法 ,对HT诱导K5 6 2细胞凋亡的相关蛋白进行“蛋白差异显示”、质谱鉴定和数据库查询。结果　 10 μg/mlHT作用K5 6 2细胞 5h和 2 4h ,凋亡细胞主群处于凋亡早期和凋亡晚期阶段 ;配比分析对照细胞和凋亡早期及晚期的蛋白图谱 ,统计学分析表明 ,在凋亡晚期组中 3个斑点消失 ,7个斑点表达量显著降低 ,10个斑点表达量显著升高 ;选择 10个表达量改变并且蛋白表达量较大的斑点进行肽指纹谱鉴定 ,其中 5个蛋白斑点鉴定结果比较肯定 ,分别为角蛋白 9、BTF3、色氨酰tRNA合成酶 (tryptophany1 tRNAsyn thetase,TrpRS)、RS和 prohibitin。 结论　在凋亡细胞中TrpRS、RS和 prohibitin表达上调以及BTF3表达下调 ,主要影响核酸转录和蛋白合成。角蛋白 9表达增加是一种凋亡抵抗反应。     

59例BCR/ABL阳性急性淋巴细胞白血病的临床特征及治疗转归

目的 研究分析BCR/ABL阳性急性淋巴细胞白血病(BCR/ABL+-ALL)临床特征及治疗转归,筛选可能影响临床疗效的相关预后因素.方法 我院2001年1月至2008年5月荧光原位杂交检查确诊为原发BCR/ABL+-ALL 59例,经VDLP±Ara-C方案诱导化疗,化疗不缓解者或准备移植者给予伊马替尼治疗,其中接受伊马替尼联合治疗 17例,行异基因造血干细胞移植(allo-HSCT) 16例. 结果 59例BCR/ABL+-ALL患者中位年龄32(3~69)岁,经第1疗程诱导治疗后获CR共 32例(54.2%).外周血白细胞计数<30×109/L、30~99.9×109/L和≥100×109/L的CR率分别是75.0%(18/24例)、56.3%(9/15例)和26.3%(5/19例)(P=0.006),2年总生存率(OS)分别是24.7%、22.5%和21.1%(P=0.180).FAB分型:L1、L2、急性混合性白血病的CR率分别是66.7%(6/9例)、63.2%(24/38例)和22.2%(2/9例)(P=0.029),2年OS分别是22.2%、27.0%和22.0%(P=0.623).免疫分型:单纯ALL、伴髓系抗原表达ALL、急性混合性白血病的CR率分别是61.1%(11/18例)、60.6%(20/33例)和12.5%(1/8例)(P=0.039),2年OS分别是22.7%、21.0%和18.8%(P=0.643).染色体核型:正常核型、单纯t(9;22)、Ph+伴附加染色体异常的CR率分别是71.4%(5/7例)、70.8%(17/24例)和37.5%(9/24例)(P=0.046),2年OS分别是42.9%、34.0%和7.3%(P=0.000).是否合并败血症的2年OS分别是5.0%和36.0%(P= 0.005).含伊马替尼治疗组与不含伊马替尼治疗组、接受allo-HSCT治疗组和仅化疗组的2年OS分别是48.0%和11.2%(P=0.001)、54.2%和8.5%(P=0.000).结论 外周血白细胞计数≥100×109/L、形态学或免疫学类型为急性混合性白血病、Ph+伴附加染色体异常对BCR/ABL+-ALL的疗效有一定的负性影响,Ph+伴附加染色体异常、合并败血症者生存期短,伊马替尼联合治疗和allo-HSCT均可延长BCR/ABL+-ALL的生存期.     

尝试用Access 2000建立慢性髓系白血病数据库

本文介绍了用Ａｃｃｅｓｓ ２０００创建慢性髓系白血病数据库的制作过程 及体会。     

酪氨酸激酶抑制剂对T淋巴细胞生物学特性影响的研究

目的探讨酪氨酸激酶抑制剂（TKI）在体外对T淋巴细胞生物学特性的影响。方法应用尼龙毛柱法分选人外周血T淋巴细胞,加入植物血凝素和抗人CD3单克隆抗体体外培养;运用MTT法检测不同浓度的伊马替尼（imatinjb）、尼罗替尼（nilotib）对T细胞增殖的影响;酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测其分泌的细胞因子浓度;通过流式细胞仪检测T细胞表面免疫活性标志;实时荧光定量PCR法检测各组T细胞信号分子P56^lck。mRNA的表达。结果伊马替尼、尼罗替尼对T淋巴细胞增殖活性有抑制作用（P=0）,且呈浓度和时间依赖性;各处理组细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-2浓度较对照组低（P=0．03）,IL—10浓度在处理组与对照组无差异（P=0．53）,且表面活性分子CD25和CD69明显减少（P=0．03,P=0．01）,尼戮替尼处理组CD25、CD69表达更低（P=0．05,P=0）;各处理组T细胞信号分子P56^lck。表达水平降低（P=0．03）,而尼罗替尼处理组P56^lck。表达更低（P=0．04）。结论有效治疗浓度的伊马替尼、尼罗替尼在体外可能通过抑制T淋巴细胞受体P56^lck的表达进而抑制T细胞的增殖和活性。     

慢性髓系白血病急变相关蛋白的初步研究

目的 筛选慢性髓系白血病(CML)急变相关蛋白,探讨CML急变的转化机制.方法 采用双向凝胶电泳技术分离急变期和慢性期CML患者骨髓细胞的全部蛋白质,以ImageMnster 2DPlatinum 5.0图像分析软件比较慢性期和急变期患者的蛋白凝胶图谱,找出差异蛋白质点.通过质谱分析差异表达蛋白质点,获得肽质量指纹图谱,于SWISS-PROT/TrEMBL数据库查询鉴定.采用Westem blot和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)在蛋白和mRNA水平进一步验证.结果 与慢性期CML患者比较,急变期患者有13个蛋白质点表达降低,23个蛋白质点表达升高.选取20个差异蛋白质点进行质谱鉴定,其中15个蛋白质点比较明确.选取在急变期患者中高表达的3个蛋白质点不均一核内核糖蛋白K(hnRNPK)、膜联蛋白Al(annexin Al)和Rhea进行验证,与慢性期患者比较,急变期患者骨髓细胞中蛋白表达增高,与双向凝胶电泳检测结果一致;mRNA水平的表达无变化.结论 获得了1组可能参与CML急变的相关蛋白,为进一步研究CML急变的转化机制提供了线索.     

精品课程网在某医学院师生中的应用分析

精品课程应当让教学的直接参与者，教师和学生直接受益。他们的参与度、使用情况、获益及满意程度是对精品课程建设效果的最直接的评判标准。通过对某临床医学院部分师生的问卷调查，发现精品课程的应用情况受宣传推广、建设参与等因素的影响，对此提出了相应的解决措施。     

全科住培医生社区传染病防控能力提升的探索与实践——基于新冠肺炎疫情的项目式学习模式研究

目的 探索以项目为基础的学习模式,激发全科住培医生的内在学习动力,提升其社区传染病防控能力。 方法 2020年2月—2020年4月,选取在南方医科大学南海医院规培的36名全科住培医生为培训对象。将培训对象分别纳入居家医学观察、集中医学观察、科普宣讲、线上咨询4个子项目组进行实践探索,由具有传染病防控经验的高年资医生对其实践成果进行评价。项目结束后,所有学员对本次学习活动进行满意度评价。 结果 所有学员均完成了项目实践,每组评分均在4.0以上,能较好的梳理实践过程中存在的问题,并可通过多种渠道信息整理解决方案,且能清晰表达。学员对本次学习的总体满意度为(4.94±0.25)分,培训前接触传染病疫情防控知识评分为(1.39±0.49)分,对项目式学习的认同度为(4.87±0.34)分,对老师指导的认同度为(3.94±0.44)分,再次参与项目式学习的意愿是(4.97±0.18)分。 结论 进行本项目学习前,学员基本未接触过社区传染病防控知识,通过项目式学习,学员的社区防控能力得到了一定提升,并认可这种学习方式。本研究可为住培医生其他技能的培训提供参考,对推进毕业后教学改革有一定意义。      

不同重组人造血细胞生长因子在髓系白血病骨髓细胞染色体检测中的应用

目的：探讨不同造血细胞生长因子对髓系白血病细胞染色体形成的能力、可能机制及其应用价值．方法：用含不同重组造血细胞生长因子（包括白细胞介素3,粒-巨噬细胞集落刺激因子和粒细胞集落刺激因子）的培养液体外分别培养22例髓系白血病的骨髓细胞24h,G显带染色观察其染色体形成情况．结果：7例急性髓系白血病（AML）中,IL-3对4例有刺激作用,GM—CSF对3例刺激作用,G—CSF对2例有刺激作用;异常核型检出率为57．1％（4／7）．15例慢性髓系白血病（CML）中,IL-3对4例有刺激作用,GM—CSF对9例有刺激作用,G—CSF对8例有刺激作用;异常核型检出率为100％．结论：造血生长因子对不同患者白血病细胞染色体形成能力的影响差异很大,IL-3对AML作用较大,GM—CSF和G-CSF对CML作用较大．多数患者的骨髓细胞染色体形成不同程度地需要一种或几种造血生长因子的刺激．