蛋白酪氨酸磷酸酶PTP1B真核载体的构建及对K562细胞的影响

目的初步研究作为p210负性调控物的PTP1B,探讨其对K562细胞凋亡、红系分化的影响。方法应用RT-PCR法克隆PIP1B全长cDNA序列并定向亚克隆于真核表达载体pcDNA3.0,应用脂质体转染技术使PTP1B在K562细胞中过表达。结果PTP1B在K562细胞中出现超表达并具有较高PIP活性。转染48 h后,K562 细胞凋亡不明显,Annexin V-PI双标后FAcs分析细胞凋亡率为7.54%,与转染空载体(6.44%)相比,差异无显著性。PTP1B基因转染后细胞出现明显红系分化,联苯胺染色细胞阳性率(28.67±1.25)%,GPA表达率为43.15%, 与转染空载体组(3.34±1.25)%和12.88%比较显著提高。结论应用RT-PCR法可以成功克隆出PTP1B基因全长cDNA序列,脂质体法能有效地将pcDNA3-PTP1B转入K562细胞并表达。PTP1B能诱导K562细胞出现明显红系分化,但对细胞的凋亡无明显影响。     

白血病专题学习网站的应用分析及研发

专题学习网站是信息技术与学科课程整合的一种新型模式,它为学习者提供了一个基于网络的专题研究、协作式的数字化学习平台。本文主要介绍白血病专题学习网站的设计与开发过程。在分析学习者需求的基础上,设计网站的功能模块和内容,这在后期的具体研发中起到了事半功倍的效果。     

慢性髓系白血病动物模型的研究现状

慢性髓系白血病(CML)的发生发展是机体内正常信号传导网络失衡的结果,它涉及到多个可能的传导通路,借助动物模型来深入阐述CML发生及急变的分子生物学机制是最终治愈CML的突破口。目前建立CML动物模型主要有三种方法,包括转基因法,将bcr-abl阳性细胞移植给同基因小鼠或免疫缺陷小鼠及逆转录病毒载体法。     

慢性粒细胞白血病不同病期蛋白质组分析优化策略

目的比较不同分组方法处理慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)急变前后骨髓细胞蛋白的差异表达,筛选急变相关蛋白。方法应用双向凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)分析技术,比较急变前后三种分组方法(混合标本组、随机标本组、个体标本组)时骨髓细胞蛋白质的差异表达,并进行质谱鉴定。结果急变前后蛋白图谱匹配率在混合标本组为70.0678%;随机标本组两两配对比较,匹配率在43.2604%~58.3477%之间;个体标本组为74.0988%。混合标本组和随机标本组的相同差异蛋白点为103个,采用χ2检验P>0.05。从三组共同表达的差异蛋白中选取了20个进行质谱分析,明确鉴定出15个蛋白质。结论蛋白质组学分析中,采用骨髓细胞混合标本分组策略可获得相关差异蛋白,且可有效消除个体差异,简化实验流程。     

干扰素-α治疗慢性粒细胞白血病的现状及进展

慢性粒细胞白血病具有典型的两或三阶段临床病程,传统药物(如马利兰、羟基脲)既不能阻止急变,也不能明显延长病人生存期。干扰素-α对慢性粒细胞白血病的疗效得到了肯定,但是对其用药方案、与病人预后因素的关系以及对异基因骨髓移植结果的影响等问题,仍存在争议。     

遗传学和免疫表型分析在急性粒单核细胞白血病临床诊断中的意义

 目的　探讨染色体G显带、荧光原位杂交和流式细胞术在急性粒单核细胞白血病临床诊断、鉴别诊断和预后中的意义。方法　运用染色体G显带和流式细胞术 ,对 15例骨髓细胞形态学拟诊为急性髓系白血病M4型 (AML M4 )的患者进行核型分析和免疫分型 ,并用间期荧光原位杂交技术 (inter phasalfluorescenceinsituhybridization ,I FISH)对其中 6例患者进行检测。结果　染色体G显带核型分析显示正常核型 6例 ,伴有inv(16 ) (p13;q2 2 )异常 2例 ,伴有del(16 ) (q2 2 )、 X ,5 q ,t(8;2 1) (q2 2 ;q2 2 )、t(9 ;2 2 ) (q34;q11)、t(11;17)和t(11;?)异常各 1例 ,另有 2例无分裂相可供分析。I FISH对 3例患者进行CBFβ基因重排检测 ,2例阳性 ,1例阴性 ;对这例阴性患者进一步检测AML1/ETO融合基因 ,结果阳性 ;3例患者检测了MLL基因重排 ,2例阳性 ,1例阴性但伴有t(9;2 2 )异常 ,BCR/ABL融合基因阳性。免疫分型提示 14例患者有髓系和单核系分化抗...     

实时荧光定量PCR分析CML患者HMGA2基因的表达及其临床意义

摘 要　目的：分析慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia, CML)患者外周血中高迁移率蛋白A2基因（high mobility group A2,HMGA2）mRNA的表达及其相关临床特征,探讨它们在CML演进中的作用及临床意义。方法：采集2006年1月至2008年2月在南方医科大学南方医院血液科就诊的24例CML和5例健康对照的骨髓和外周血标本（所有参与试验及贡献骨髓和外周血标本的患者均知情同意,并经伦理委员会批准）,以荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization, FISH）技术检测CML骨髓标本间期细胞BCR/ABL融合基因的表达,实时荧光定量(real-time fluorescence quntitative)PCR（RTQ-PCR）技术对HMGA2 mRNA的表达进行相对定量分析,采用秩和检验比较CML患者不同阶段HMGA2转录水平,以Spaearman方法分别对HMGA2转录水平与BCR/ABL融合基因水平、外周血液学参数进行相关性分析。结果：12例CML-CP患者BCR/ABL阳性细胞率为(58.08±39.21)%,HMGA2相对定量为2.39±1.86;12例CML-AP/BP患者BCR/ABL阳性细胞率为(87.50±16.21)%,HMGA2相对定量为91.78±14.07。CML-AP/BP患者HMGA2转录水平与CML-CP患者之间的差异有统计学意义（Z=-4.157,P<0.01）, CML-AP/BP患者HMGA2转录水平与外周血原幼细胞数呈正相关关系（r=0.636,P=0.017）。结论：CML患者HMGA2转录水平在AP/BP期显著高于CP期,HMGA2有可能成为预测CML疾病演变、判断预后和指导临床治疗的可靠指标。     

双色双融合荧光原位杂交检测慢性粒细胞白血病的bcr/abl融合基因研究

目的：探讨双标双融合荧光原住杂交技术(dual-color and dual-fusion fluorescence in—situ hybridization，D—FISH)在慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia，CML)中检测bcr／abl融合基因的灵敏度及特异性。方法：应用细胞遗传学G显带(CCG)核型分析、双色荧光原住杂交(D—FISH)和染色体涂染技术，检测了29例CML患者骨髓中期分裂相和间期细胞。结果：CCG检出Ph( )24例，D—FISH检测均为bcr／abl( )；Ph(-)5例，其中4例核型为46，XY，经D—FISH检测2例bcr／abl( )，2例ber／abl(-)，另1例核型为46，XYt(20；22)，D—F1SH检测ber／abl( )，以9号，20号和22号全染色体探针涂染，确定该例核型为46，XYt(9；20；22)，D—FISH检测总阳性率为93．10％(27／29)，高于CCG检查时阳性率82．76％(24／29)(P=0．025)。结论：与CCG方法相比，D—FISH检测CML的ber／abl融合基因具有简便、快速、灵敏、特异性强等优点，可以作为CML临床诊断和微小残留病监测的一种重要检测方法。．     

青蒿素及其衍生物的抗白血病作用

研究表明青蒿的提取物青蒿素具有抗白血病作用。由于青蒿素难溶于水和油,于是半合成了几种水溶性的衍生物,如蒿甲醚、蒿乙醚和青蒿琥酯等。二氢青蒿素是青蒿素衍生物的主要活性代谢产物。青蒿素及其衍生物主要通过抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡和抑制血管生成而发挥抗白血病作用。它对白血病细胞有较强的靶向性,并可克服多药耐药,与传统化疗药无交叉耐药。因青蒿素安全而低毒,故有望成为一种新的抗白血病药。     

STI571诱导K562细胞耐药前后基因差异表达的研究

目的研究STI571诱导K562细胞耐药前后基因差异表达情况,探讨其耐药机制。方法用药物浓度逐步递增的方法诱导野生型K562细胞（K562-W）对STI571产生耐药,用台盼蓝染色、MTT法对耐药K562细胞（K562-R）进行特性鉴定。应用DNA芯片技术对STI571耐药前后的K562细胞的基因差异表达进行检测。结果诱导出K562-R-的耐药浓度为0．5／μmol／L,活细胞比例为98．5％。芯片结果发现662个基因出现差异表达。其中335个基因表达上调,327个基因表达下调。结论利用DNA芯片技术挑选与耐药可能相关的基因。可为STI571耐药机制的研究提供新的切入点。