光谱法鉴定黑海参中的多糖成分

目的:建立以光谱法鉴定黑海参中多糖成分的方法。方法:采用电泳法测定黑海参中多糖纯度,并用红外分光光度法、紫外分光光度法、核磁共振波谱法对其红外吸收光谱、紫外吸收光谱、核磁共振碳谱、核磁共振氢谱进行结构鉴定。结果:电泳后凝胶带呈蓝色,光谱检测结果可相互解释。结论:黑海参中存在均一组分的多糖成分,且为一种含硫酸酯基的酸性多糖,但不含糖肽;α-构型,存在α-吡喃葡萄糖,分子中的羟基形成分子内氢键。     

“精”学说与干细胞辨识

成体干细胞功能不足则会导致生长发育障碍或人的早衰现象。中医认为此为先天之精不足．临床以补肾填精法来治疗和五软五迟和早衰等病证。故今后或许可从调控干细胞增殖分化角度来研究中医学中由于先天之精不足所导致的一系列病证。从干细胞角度来阐述中医学“精”学说。讨论了它们的相似之处。认为全能干细胞蕴藏了全部先天之精，这是精的来源。并将全能干细胞及已发现的多种成体干细胞的功能．与“精”的繁衍生殖、生长发育、生髓化血等功能相比较，认为“精”与干细胞的基本属性较相似。试图为中医基础理论现代化研究提供一个新的思路。     

荜茇提取物对大鼠骨髓间质干细胞MSC的增殖作用及与化学官能团的关系

目的:观察荜茇挥发油和水溶性部分对大鼠骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)体外增殖的影响,并进一步探讨了与分子中化学官能团的关系.方法:使用密度梯度法分离大鼠骨髓间质干细胞,体外培养,经Brdu标记和CD44染色及两者双重染色鉴定后,观察在培养液中添加不同浓度荜茇挥发油及其水溶性部分的条件下MSC的生长变化.应用形态学、MTT法和5-溴脱氧尿嘧啶(5-Bromodeoxyuridine,Brdu)、增殖细胞核抗原(Proliferation cellnuclear antigen,PCNA)免疫细胞化学方法测定细胞增殖活性.结果:荜茇挥发油以浓度依赖方式促进MSC增殖活力和增加Brdu、PCNA阳性细胞数,与对照组比较有显著性(P＜0.05).经GC-MS检测,荜茇挥发油含C=C(50.66%)、-OH(27.02%)、多种官能团(5.05%)等;而荜茇水提物对MSC无增殖作用.结论:荜茇挥发油明显促进MSC的增殖,这种作用可能与分子中C=C、-OH等官能团有关.     

牛珀至宝微丸对局灶性脑缺血再灌注后 Nestin表达的影响

目的 :探讨牛珀至宝微丸对局灶性脑缺血再灌注后神经干细胞Nestin表达的影响。方法 :采用大脑中动脉线栓法造成局灶性脑缺血再灌注模型 ,应用免疫组织化学技术检测神经上皮干细胞巢蛋白 (Nestin)的表达 ,观察牛珀至宝微丸对脑缺血后神经上皮干细胞巢蛋白的影响。结果 :脑缺血再灌注后 ,牛珀至宝微丸组缺血侧室管膜、室管膜下区、皮层和纹状体Nestin阳性细胞数显著多于缺血对照组 (P <0 0 5 ) ,且神经病学评分明显低于缺血对照组 (P <0 0 5 )。结论 :牛珀至宝微丸能持续上调脑缺血再灌注后Nestin的表达 ,这可能是其治疗缺血性脑血管病的机理之一。     

牛珀至宝微丸对内毒素肺损伤纤维化大鼠信号转导蛋smads表达的影响

目的：观察牛珀至宝微丸对内毒素肺损伤纤维化大鼠中转化生长因子-β下游胞内信号转导蛋白Smads表达的影响。方法：气管内两次滴注脂多糖内毒素（1．5mg／kg,3．0mg／kg）、腹腔注射脂多糖内毒素（3．0mg/kg）造成内毒素大鼠急性肺损伤纤维化模型,设正常组对照,用牛珀至宝微丸作干预处理,以HE染色法观察肺组织损伤的形态学改变,Van Gieson法染色检测胶原纤维在肺组织内的表达,并用Western Blot、免疫组化方法检测在肺组织内TGF-β下游胞内信号转导蛋白Smads的表达。结果：内毒素造成严重的急性肺损伤,牛珀至宝微丸可以使内毒素肺损伤纤维化大鼠的smad2／3表达得到抑制,smad4和smad7表达得到不同程度的增强。结论：牛珀至宝微丸减轻内毒素肺纤维化的机理可能与其对TGF—β下游smads通路的调节表达相关。     

牛珀至宝微丸对热应激反应内毒素休克大鼠TNF-α的影响

目的：研究牛珀室 宝微丸对热应激反应内毒素休克大鼠影响。方法：将雄性Wistar大鼠45只随机分成3组：a：热应激＋牛珀至宝微丸＋内毒素组;b：热应激＋NS＋内毒素组;C：NS＋内毒素对照组。分别予以热应急处理或热应激处理后灌注牛珀至宝微丸或单独灌注生理盐水后,静脉注射内毒素（LPS）然后取注射LPS前和后2h的动脉血分离血浆测定TNF－α,同时用二导生理仪记录血压等。结果：动物注射LPS后血压明显降低,TNF－α浓度明显升高,热激反应能降低其家度（P＜0．05）,而牛至宝微丸能加强其作用（P＜0．05）。结论：牛珀至社微丸能加强大鼠对热应激反应。     

牛珀至宝微丸对内毒素肺损伤纤维化大鼠信号转导蛋白smads表达的影响

目的:观察牛珀至宝微丸对内毒素肺损伤纤维化大鼠中转化生长因子-β下游胞内信号转导蛋白Smads表达的影响.方法:气管内两次滴注脂多糖内毒素(1.5mg/kg,3.0mg/kg)、腹腔注射脂多糖内毒素(3.0mg/kg)造成内毒素大鼠急性肺损伤纤维化模型,设正常组对照,用牛珀至宝微丸作干预处理,以HE染色法观察肺组织损伤的形态学改变,Van Gieson法染色检测胶原纤维在肺组织内的表达,并用Western Blot、免疫组化方法检测在肺组织内TGF-β下游胞内信号转导蛋白Smads的表达.结果:内毒素造成严重的急性肺损伤,牛珀至宝微丸可以使内毒素肺损伤纤维化大鼠的smad2/3表达得到抑制,smad4和smad7表达得到不同程度的增强.结论:牛珀至宝微丸减轻内毒素肺纤维化的机理可能与其对TGF-β下游smads通路的调节表达相关.     

生脉注射液对蛋白激酶C调控LPS诱导iNOS基因表达的影响

目的：探讨生脉注射液对蛋白激酶C调控LPS诱导单核／巨噬细胞iNOS基因表达的影响。方法：用蛋白激酶C（protein kinase C,PKC)活性测定法研究LPS对PKC的激活作用及Griess还原法测定NO的生成；用基因重组技术构建iNOS荧光素酶报告基因载体；用基因转染及报告基因检测等方法研究生脉注射液调控LPS刺激RAW264．7细胞对iNOS启动子活性的诱导作用及其与PKC的关系。结果：生脉注射液可负调节LPS刺激RAW264．7细胞引起的PKC磷酸化激活和膜移位，并可延长PKC抑制剂H－7下调NO作用时间；荧光素酶表示基因实验结果显示，生脉注射液可抑制iNOS启动子的转录活性，并可增强H－7和钙离子通道阻滞剂Verapamil作用。结论：生脉注射液抑制LPS刺激RAW264．7细胞所致的NO生成增加，其机制之一可能是通过抑制PKC激活和细胞钙增加而影响iNOS启动子的转录活性。     

三甲复脉汤含药血清体外诱导成年大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元

目的：观察三甲复脉汤含药血清体外诱导成年大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经兀的能力。方法：实验于2004-10／2005—02在广州中医药大学神经解剖学实验室完成。选择40只SD大鼠，随机分为对照组、碱性成纤维细胞生长因子组、龟板组与三甲复脉汤组，每组10只。龟板组与三甲复脉汤组每天给予龟板与三甲复脉汤口服液4mL灌胃1周，对照组及碱性成纤维细胞生长因子组则给予等体积蒸馏水灌胃1周。采用含药血清体外定向诱导第五代骨髓间充质干细胞，龟板组与三甲复脉汤组用含10μg／L碱性成纤维细胞生长因子的L—DME 2μL预处理24h后，再分别加入龟板、三甲复脉汤含药血清诱导。每次诱导时设有对照血清组与碱性成纤维细胞生长因子组（加入10μg／L碱性成纤维细胞生长因子2μL）。诱导后5h，12h，1d，3d，7d在倒置显微镜下观察细胞形态，免疫组化鉴定神经丝蛋白、胶质纤维酸性蛋白的表达。结果：在实验过程中共有2只动物死亡，进行了相应的补充，进入结果分析为40只，保持为4组，每组10只。①骨髓间充质干细胞受诱导向神经元分化的形态特征：骨髓间充质干细胞经碱性成纤维细胞生长因子、龟板与三甲复脉汤血清诱导5h后，部分细胞形态发生明显改变，胞体变小，胞质向核周收缩，由原来的梭形变成圆形，形成网络样结构。随着诱导时间延长，骨髓间质干细胞呈渐近性的向神经元样细胞转化，神经样细胞增多。对照组未见有神经元样细胞出现。②骨髓间充质干细胞诱导后细胞的神经分化鉴定：神经元样细胞的胞体和突起神经丝蛋白染呈棕色，神经丝蛋白阳性细胞胶质纤维酸性蛋白染色为阴性。③骨髓间充质干细胞诱导后细胞的神经元样细胞数：诱导后12h，神经元样细胞阳性率达到高峰，碱性的成纤维细胞生长因子组、龟板组、三甲复脉汤组细胞的神经元样细胞数均高于对照组[（74&;#177;6），（75&;#177;6），（71&;#177;5），（6&;#177;1）个1；至第7天仍有神经元样细胞存活，其中以三甲复脉汤存活时间最长，高于碱性成纤维细胞生长因子组和龟板组[（21&;#177;3），（12&;#177;3），（15&;#177;2）个]。结论：三甲复脉汤含药血清可以在体外诱导成年大鼠骨髓间充质分化为神经元，而且能延长其表达。