血红蛋白与脑出血后血肿周围组织损害

脑出血(intracrebral hemmorrahage,ICH)因其发病率、致残率和死亡率高而严重威胁中老年人健康。在脑出血引起致残和死亡的诸多因素中,脑水肿是主要因素之一。脑出血后脑水肿形成的病理生理机制尚不完全清楚,凝血酶、补体系统的激活、血红蛋白及其降解产物的毒性作用近年受到广泛关注。本文综述血红蛋白及其降解产物导致脑出血后脑水肿形成及其脑组织损害的近期研究进展。     

单采血浆捐献后部分血浆蛋白及电解质变化趋势和影响因素研究

目的 了解单采血浆对献浆者部分血浆蛋白和电解质水平的影响,为保障献浆者健康安全提供有力的科学依据。方法 2022年2月—5月在四川省两家单采血浆站招募223名新献浆者,经纳排后共纳入118名献血浆者。收集献浆者人口统计学信息,并持续随访观察一年,检测每次捐献血浆前部分血浆蛋白及电解质水平。分析部分血浆蛋白及电解质水平的变化趋势,利用协方差分析排除献浆前各相关指标基线水平的干扰,分析献浆次数对献浆后相关指标变化的影响,并采用多重线性回归探索相关指标的影响因素。结果 男性献浆者铁蛋白（SF,serumferritin）水平随献浆次数增加呈现一定下降趋势,其余成分水平则随献浆次数增加无明显波动。协方差分析控制混杂因素后,献浆次数对SF的影响无统计学意义。多重线性回归结果显示,在控制了基线水平之后,献浆次数对SF水平的影响无统计学意义。结论 持续一年低频次捐献单采血浆不会对献浆者血浆蛋白及电解质水平产生统计学上的显著影响。     

急性大脑半球梗塞患者24小时心率变异性变化

目的了解急性脑梗塞患者２４小时心率变异性变化及其与岛叶病变的关系。方法采用动态心电图记录６６例急性脑梗塞患者和３９例对照的２４小时心电信号,分析其心率变异性变化。结果岛叶梗塞组、非岛叶梗塞组和腔梗塞组与对照组比较,仅发现岛叶梗塞组心率变异性指标ＨＦ、ＲＭＳＳＤ、ＰＮＮ５０下降和ＬＦ／ＨＦ增高差异有显著性。结论岛叶及其联系纤维受损在脑梗塞患者心率变异性变化中起主要作用,岛叶病变患者有明显的心脏迷走神经活性降低,心脏交感神经活动优势更加明显。     

基于FⅧ探讨不同脱盐方式的效果及对其成分的影响

目的 基于人凝血因子Ⅷ(human coagulation factorⅧ,FⅧ)比较5种脱盐方法的脱盐效果及对FⅧ成分的影响,为蛋白脱盐方式提供参考。方法 分别用Sephadex G-25 Medium凝胶、Fractogel EMD BioSEC凝胶、超滤、室温透析和4℃透析5种方法对人FⅧ进行脱盐处理。通过Na⁺、柠檬酸根离子、甘氨酸去除率评估脱盐效果。通过脱盐前后FⅧ蛋白回收率、FⅧ活性(coagulation factorⅧactivity, FⅧ∶C)、VWF抗原(VWF antigen, VWF∶Ag)、VWF活性(VWF activity, VWF∶Ac)、VWF多聚体及SDS-PAGE分析,评估其对FⅧ成分的影响。结果 在脱盐效果方面：Na⁺在超滤脱盐时去除率最低,为(97.90±0.06)%,Fractogel EMD BioSEC凝胶脱盐去除率最高,为(99.82±0.07)%。除Sephadex G-25 Medium凝胶脱盐与Fractoge EMD BioSEC凝胶脱盐间Na⁺去除率无统计学意...     

4种静注人免疫球蛋白制品的自身IgG抗体多样性研究

目的 建立静注人免疫球蛋白(intravenous immunoglobulin, IVIG)制品自身IgG抗体谱展示方法及抗体种类分析方法,考察比较国内不同血液制品企业市售IVIG自身IgG抗体多样性。方法 收集我国4个血液制品企业IVIG为研究对象,以人脐静脉内皮细胞总蛋白为抗原,通过双向电泳结合蛋白印记方法展示不同IVIG的自身抗体谱,通过IVIG与人类蛋白质组芯片杂交,高通量鉴定不同IVIG中自身抗体的种类并进行生物信息学分析。结果 建立了IVIG自身抗体谱展示方法和抗体种类分析方法,获得了较高质量的IVIG自身抗体谱以及其能够识别的人自身蛋白的生物学信息,不同IVIG制品识别自身抗原的数量、种类有明显差异。4个制品针对人脐静脉内皮细胞蛋白抗体数量分别为241～386个;识别人蛋白质芯片上蛋白数量分别为292～435个,有172个人自身蛋白被4个制品均识别。结论 利用抗体谱展示和蛋白质芯片技术能够用于分析IVIG中自身IgG抗体数量及种类多样性,检测的4个厂家IVIG制品中均具有广谱自身抗体,且具有各自的独特性。     

脑缺血后大鼠脑实质DNA损伤修复相关基因Gadd45β蛋白的表达

目的观察大鼠局灶脑缺血再灌注(I/R)后脑组织中DNA损伤修复相关基因Gadd45β蛋白的表达情况,探讨其在抗神经损伤和促神经修复方面的作用及机理。方法将大鼠分为正常组、假手术组、脑I/R组、腹腔注射PDTC组(PDTC组),假手术组和脑I/R对照组均在缺血再灌注后腹腔注射与PDTC组同等剂量的生理盐水。采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,用免疫组织化学法和Western印迹法检测缺血灶周边脑组织中Gadd45β蛋白的表达情况,用Zea Longa评分法对患肢运动功能进行评分。结果脑I/R组大鼠缺血灶周边脑组织中Gadd45β蛋白的表达在缺血再灌注后6 h开始增高,12 h进一步增高,24 h达高峰,之后开始下降,但48 h和72 h仍高于假手术组(P<0.05)。PDTC组大鼠脑缺血灶周边脑组织中Gadd45β蛋白的表达在各个时间点均显著低于脑I/R组但仍然明显高于假手术组(P<0.05),仍然是在24 h Gadd45β蛋白表达到高峰,之后开始降低。脑I/R组、腹腔注射PDTC组大鼠在造模术后各时间点神经功能缺损评分呈相同变化趋势,PDTC组大鼠在造模术第3天神经功能缺损评分显著高于脑I/R组(P<0.05)。结论 PDTC可以抑制Gadd45β蛋白的表达。Gadd45β可能有促进受损的神经元再生和修复作用。     

IVIG中IgG片段对巨噬细胞吞噬致敏红细胞功能的影响

目的 研究静注人免疫球蛋白(pH4)(human immunoglobulin for intravenous injection, IVIG)中主要成分免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG) Fab段、以及F(ab′)₂段及Fc段对THP-1来源的巨噬细胞吞噬致敏红细胞吞噬功能的影响。方法 首先利用蛋白酶切技术和分离纯化技术,从IVIG中制备IgG Fc段、Fab段以及F(ab′)₂段,并采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE)进行鉴定;其次,使用佛波酯诱导THP-1细胞分化为M0型巨噬细胞;使荧光染料羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂标记致敏红细胞,采用流式细胞术检测上述各组分对M0型巨噬细胞吞噬致敏红细胞的吞噬能力的影响。结果 SDS-PAGE结果显示,所制备的IgG各片段均满足后续试验要求。流式结果表明,已成功建立M0型巨噬细胞吞噬致敏红细胞的吞噬模型。将IVIG中IgG各片段分别作用于M...     

蛋白C、蛋白S的研究与应用

蛋白C(protein C,PC)抗凝系统是机体内重要的抗凝系统,主要由PC、蛋白S(protein S,PS)、蛋白C抑制物(protein C inhibitor,PCI)和血栓调节蛋白(thrombomodulin,TM)组成[1],在血液凝固和纤溶过程起着重要的平衡作用.PC是PC系统最主要的组成成分,是体内重要的抗凝因子,其抗凝活性占全血的20%-30%,体外只要达到0.2μg/ml即可引起明显的抗凝效应,直接影响凝血与抗凝血机制的平衡[1,2],而PC的生理功能又与PS密切相关,故我们综合有关资料对PC抗凝系统中的PC、PS做一介绍.     

人凝血因子V的纯化

目的 分离纯化人血浆中凝血因子V(FV),为研制FV单克隆抗体提供抗原.方法 在1 L新鲜冰冻血浆中加入酶抑制剂Benzamidine hydrochloride、二异丙基氟磷酸(DFP)和胰蛋白酶抑制剂,使其终浓度分别达到2mmol/L、1 mmol/L和50 mg/L;采用柠檬酸钡吸附、聚乙二醇6000分级沉淀、DEAE-Sepharose FF离子交换层析和Sephacryl-S300凝胶过滤层析,对血浆中FV进行分离纯化;采用凝血测定一期法检测FV活性;采用紫外分光光度法测定纯化FV的蛋白含量;采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)观察FV的纯化情况.结果 经过对血浆前处理和两步层析后,FV活性回收率为(11.21±3.54)%,比活性为(30.46±0.31)U/mg,浓缩倍数为(2 538.33±25.83)倍(n=3);SDS-PAGE图谱显示:原料血浆添加DFP的离子交换层析样品较之未加DFP的样品在330 kD处有更粗更清晰的蛋白条带,最终纯化的FV样品仅在330 kD附近有1条较深的蛋白条带.结论 本FV纯化方法能够较有效地浓缩血浆中的FV.     

人D-二聚体分离纯化及鉴定

目的 分离纯度较高和人D-二聚体(D-dimer),为制备抗人D-二聚体单克隆抗体提供可靠抗原.方法 以凝血酶、凝血因子Ⅻ等处理人纤维蛋白原,得到交联纤维蛋白,经纤溶酶消化,得到交联纤维蛋白降解产物(FDP);对FDP作Sephacryl S-300凝胶过滤层析和聚焦层析,分离纯化得到D-dimer.采用免疫比浊法测定D-dimer 含量、染料结合法测定纯化蛋白含量,以SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)观察D-dimer的纯化情况,Weston Blot法确认D-dimer的存在.结果 制备得到的FDP SDS-PAGE图谱显示有多条蛋白条带,1条分子量为180 ～250kD蛋白条带在Western Blot图谱中显示可以被D-dimer单克隆抗体特异性地识别.FDP经Sephacry S-300凝胶层析和聚焦层析后得到纯度较高的D-dimer(n=3):总蛋白含量比为(77.82±7.98)％,蛋白回收率(25.27±6.35)％;SDS-PAGE图谱显示:经过两步层析得到的终产物为分子量180～250 kD的蛋白;Westem Blot证实:经过Sephacryl S-300凝胶层析和聚焦层析处理,最终得到分子量为180～250 kD的终产物可被D-dimer单克隆抗体特异性识别.结论 采用Sephacryl S-300凝胶层析和聚焦层析能够分离纯化获得较高纯度的D-dimer,可作为制备D-dimer单克隆抗体的抗原.