用体外致敏的鼻咽癌患者B细胞构建噬菌体抗独特型抗体库

目的 :构建噬菌体人源抗独特型抗体库。方法 :体外致敏并用EBV转化鼻咽癌患者的PBMC。用PCR分别扩增VH 和VL 基因并组成ScFv基因。将ScFv基因与载体连接后 ,转化大肠杆菌MC10 6 1,构建噬菌体呈现型ScFv库。结果 :经EBV转化的 10例鼻咽癌患者的PBMC中 ,8例有鼻咽癌抗独特型抗体产生。经多次PCR ,扩增出 5种VH(γ、μ)和 7种VL(κ、λ)基因 ,经连接组成 14种ScFv基因。将ScFv基因与载体连接后 ,导入大肠杆菌MC10 6 1。经四环素抗性筛选 ,得到库容为 1.1× 10 7的初级噬菌体抗独特型抗体库 ,噬菌体DNA中全长ScFv基因的插入率为 70 %。结论 :用体外致敏法结合噬菌体抗体库技术 ,制备人源抗独特型单链抗体(Ab2 βScFv)的策略是可行的     

全人源抗肝癌噬菌体单链抗体的筛选与鉴定

目的: 构建人源抗肝癌噬菌体单链抗体库, 从中筛选抗肝癌单链抗体(scFv), 并对其特异性进行鉴定.方法: 采用体外致敏法和EBV转化技术联合噬菌体展示技术构建噬菌体抗体库.对初级抗体库进行亲和富集及ELISA筛选, 获得的阳性克隆进行免疫组化鉴定并测序.结果: scFv基因与载体连接后得到库容量为1.0×108的初级噬菌体抗体库.对抗体库进行3轮正负淘选和富集后, 随机挑取2 798个克隆进行ELISA, 发现3个克隆对HepG2呈强阳性反应, 而与QSG-7701等人正常细胞系呈弱阳性或不反应.对克隆SA3进行免疫细胞化学鉴定, 结果与ELISA一致.免疫组织化学鉴定表明SA3与肝癌组织和肝组织阳性率的差别有统计学意义.结论: 构建了库容量达1×108的全人源抗肝癌噬菌体抗体库.通过淘选富集、 ELISA和免疫组织化学鉴定获得特异性较强的噬菌体克隆, 为肝癌的临床诊断及导向治疗奠定了基础.     

GP73 融合蛋白原核表达及纯化

目的：原核表达并纯化高尔基体糖蛋白-73（GolgiProtein73,GP73）。方法以人肝癌细胞系HepG2总RNA为模板,经RT-PCR扩增GP73基因,克隆至原核表达载体pET-21a（＋）-TRX中,转化大肠杆菌BL21（DE3）,IPTG诱导表达。His-tag磁珠纯化重组蛋白GP73,SDS-PAGE鉴定。结果克隆目的基因的序列正确,未发生碱基突变;重组表达质粒pET21a（＋）-TRX-GP73经双酶切鉴定构建正确;表达的重组蛋白相对分子量为80 kD,与预期相符。结论本实验成功在大肠杆菌BL21（DE3）中表达并纯化了GP73重组蛋白,为后续研究奠定了基础。     

骨水泥和非骨水泥假体在髋关节翻修术中临床应用

目的：骨水泥和非骨水泥股骨假体在髋关节翻修术中临床应用。方法回顾2005年3月至2010年6月,23例以非骨水泥假体行人工髋关节翻修术患者,22例以骨水泥假体行人工髋关节翻修术患者。只纳入了股骨骨缺损PaproskyⅠ、Ⅱ型。临床结果评估Harris髋关节评分（HHS）和VAPS评分和大腿疼痛的发生率。同时评估并发症的发生率。影像学评估再次股骨柄下沉以及股骨柄稳定性。结果骨水泥组术后HSS的平均值为79.2（范围32~100）,非骨水泥组术后HSS的平均值为83.9（范围61~100）。骨水泥组术后VAPS评分平均为0.7（范围0~4）、非骨水泥组术后VAPS平均值0.5（范围0~3）。术后大腿疼痛骨水泥组发生1例（4%）,非骨水泥组发生1例（9%）。并发症骨水泥组发生4例（19%）,非骨水泥组发生5例（22%）。假体再次下沉松动骨水泥组发生3例（14%）,非骨水泥组发生2例（9%）。两组评估指标差异无统计学意义。结论在髋关节翻修术中,骨水泥股骨假体和非骨水泥股骨假体均适用于股骨骨缺损PaproskyⅠ、Ⅱ型。规范的骨水泥使用技术和匹配的假体选择是手术成功的重要因素。     

超微粉体技术与中药饮片改革

超微粉体技术是材料领域发展迅速是应用面很广的工业工程技术。采用超微粉体技术研制的中药超微饮片属于微米中药范畴，此技术既保留了传统饮片的优点，又节省药材、质量可控、方便卫生。超微粉体技术在制药工业的应用处于起步阶段，应加强其基础研究。本文从药学角度分析和探讨了该技术的应用与中药饮片改革：     

离心技术在中药研究中的应用

离心技术是一种分离纯化的方法,应用于中药提取液的纯化,能基本解决醇沉法易造成的有效成分丢失、水提浸膏分离纯化等难题,能够明显改善分离液的澄明度[1],有利于提高药效,减少服用量,增加制剂的稳定性及产品的质量.近年来离心技术的发展很快,在浓缩、溶剂萃取、超滤等方面也得以应用.本文对离心技术及其在中药领域的应用情况进行了简要的概述.     

中药药代动力学研究方法进展

中药药代动力学是近20年迅速发展起来的以中医药基本理论为指导，用药物动力学的方法研究中药在动物或人体内的吸收、分布、代谢和消除过程的一门新兴边缘学科。我国的药物代谢实验研究始于50年代，80年代有了迅速的发展，目前已有不少研究中药制剂的药代动力学报道，其研究大体可分为：血药浓度法和生物效应法两大类。同时随着中     

正交试验优选鼻敏宁颗粒提取工艺简

目的 优选鼻敏宁颗粒水提取工艺.方法 采用L9（3）4正交试验法,以浸膏得率、黄芪甲苷提取量为指标,对加水量、煎煮时间、煎煮次数进行优选.结果 最佳提取工艺为药材加水煎煮两次,第1次加8倍量水,煎煮2h,第2次6倍量水,煎煮1.5 h.结论 优选的工艺合理,重复性好,样品质量稳定.     

猫爪草纳米乳喷雾剂的制备及对慢性咽炎大鼠模型的影响研究

目的:制备猫爪草纳米乳喷雾剂并初步考察其对慢性咽炎大鼠模型的影响。方法:通过溶解度测定,选择溶解猫爪草提取物能力较强的油相、乳化剂和助乳化剂,绘制伪三元相图比较纳米乳区域的大小以确定辅料种类及Km值;考察猫爪草纳米乳喷雾剂对大鼠慢性咽炎模型病理组织的影响,对局部病理检查结果进行半定量分析。结果:以蓖麻油聚氧乙烯醚(EL-40)-甘油-肉豆蔻酸异丙酯(IPM)-水(质量比为21∶7∶10∶61)制得的猫爪草纳米乳性状良好,平均粒径为(84±3. 12) nm,多分散指数(PDI)为0. 106,体系稳定。大鼠慢性咽炎模型病理检查结果表明,阳性药对照组、猫爪草纳米乳喷雾剂(高、中)剂量组的大鼠咽部病理学评分显著低于模型组。结论:猫爪草纳米乳喷雾剂制备简单,纳米乳粒径小,对慢性咽炎具有一定的疗效。