人类核酸外切酶1基因单核苷酸多态性与大肠癌易感性的研究

大肠癌（colorectal cancer，CRC）是最常见的恶性肿瘤之一，是多因素作用、多基因参与、多阶段发展的疾病，遗传因素在肿瘤的发生、发展中起重要作用[1]。单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms，SNP）是反映个体肿瘤遗传易感差异的一个重要方面，对认识肿瘤发生机制有重要意义。在实际应用中，其对肿瘤的预报预防、早诊早治发挥积极作用。人类核酸外切酶1（human exonuclease1，hEXO1）基因定位于人类染色体Iq42—43区域，含有14个外显子。大量研究表明，hFXO1在DNA的修复、复制、重组及染色体端粒稳定过程中起重要作用。主要表现在其与DNA错配修复（mismatch repair，MMR）蛋白复合体的相互作用从而完成对DNA的错配修复。本研究采用四引物扩增受阻突变体系聚合酶链反应（tetra-primer ARMS PCR）基因分型技术，探讨山西地区汉族人群中hEXO1基因SNP与CRC遗传易感的关系。     

前列腺素E2对结肠癌SW480细胞生物学行为的影响

目的 研究前列腺素E2(PGE2)对结肠癌SW480细胞黏附、迁移、侵袭能力的影响及其可能的分子机制.方法 分别使用外源性PGE2及其受体EP1的拮抗剂SC19220作用于SW480细胞后,MTr法测定肿瘤细胞黏附能力,transwell小室检测细胞迁移及侵袭能力,RT-PCR及Western blotting检测血管内皮生长因子(VEGF)mRNA和蛋白水平的改变.结果 外源性PGE2可以显著增加SW480细胞黏附、迁移及侵袭能力,PGE2作用于细胞后,黏附细胞A值由0.207±0.009增加至0.417±0.088,迁移细胞由6.33±0.33增加至43.33±0.88,侵袭细胞由3.67±0.34增加至26.33±0.89,差异均有统计学意义(P＜0.05).SC19220可抑制PGE2所诱导的SW480细胞黏附、迁移及侵袭,PGE2+SC19220组与PGE2组相比,黏附细胞A值由0.417±0.088下降至0.140±0.006,迁移细胞由43.33±0.88下降至28.00±0.58,侵袭细胞由26.33±0.89下降至5.67±0.33,差异均有统计学差异(P＜0.05).RT-PCR及Western blotting检测结果显示,PGE2作用后SW480细胞VEGFmRNA及蛋白水平表达增强,且表达量与PGE2浓度呈正相关.结论 PGE2可显著增加SW480细胞黏附、迁移及侵袭能力,其作用过程可能与VEGF表达上调相关.     

AP-2α对大肠癌SW620细胞增生的影响及其作用机制

目的研究转录因子激活蛋白-2d（AP-2α）对大肠癌细胞株SW620增生能力的影响及可能的作用机制。方法构建pcDNA3．1（＋）-AP-2α重组质粒,采用脂质体介导质粒转染人SW620细胞,利用MTT法检测其对SW620细胞增生能力的影响;荧光定量PCR方法和Western印迹法检测转染前后各组细胞中雌激素受体-β（ER-β）表达水平的变化。结果转染AP-2α后SW620细胞内AP-2α mRNA含量及蛋白表达水平显著升高。MTT结果提示,转染AP-2α基因后SW620细胞增生速度受到抑制。转染AP-2α基因后ER-β mRNA和蛋白表达增加,且在转染48h增加最为明显,ER—β mRNA和蛋白质分别增加了94．47％和54．67％,与对照组相比,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论AP-2α可抑制SW620细胞的增生,其抑制机制很可能与增强ER-β的表达有关。     

RNA干扰沉默Sp1基因抑制大肠癌SW620细胞的恶性增生

目的采用RNA干扰技术沉默大肠癌SW620细胞转录因子特化蛋白1（Sp1）的表达,观察其对细胞增生的影响。方法构建靶向人Sp1基因的干扰载体（pGenesil-1-Sp1）,脂质体介导转染SW620细胞,荧光倒置显微镜下观察转染效率,应用实时荧光定量PCR和Western blotting检测其对Sp1 mRNA及蛋白质水平的影响,MTT法检测SW620细胞增生活性的改变。结果成功构建针对Sp1的干扰载体,转染后能够有效抑制大肠癌SW620细胞中Sp1 mRNA和蛋白的表达,且在转染48h抑制作用最强,其对Sp1 mRNA和蛋白质抑制率分别为68．47％和73．82％,与对照组相比,差异有统计学意义（P〈0．05）。MTT实验显示,下调Sp1表达可显著抑制大肠癌SW620细胞的体外增生能力。结论Sp1基因沉默能够抑制人大肠癌SW620细胞的增生,为以Sp1为靶点的大肠癌基因治疗提供新的思路和手段。     

肝细胞生长因子拮抗剂NK4对人舌鳞癌细胞株Tca-8113侵袭能力的影响

目的:研究不同浓度NK4因子对人舌鳞癌细胞株Tca-8113侵袭能力的影响。方法:采用基底膜侵袭实验观察不同浓度NK4因子对人舌鳞癌细胞株Tca-8113侵袭能力的影响。结果:在浓度为10μg/ml时,NK4因子对人舌鳞癌细胞株Tca-8113侵袭重组基底膜的抑制率为56.4%。结论:NK4因子具有抑制肿瘤细胞人舌鳞癌细胞株Tca-8113侵袭的能力。     

医学院校生物化学多元化教学改革的实践与思考

医学生物化学课程特点、不同特质学生群体及现代社会对医学人才的综合素质培养要求促使医学生物化学的教学方式需要结合学院实际情况进行多样化教学方式的改革。在传统授课的基础上,结合小班讨论课,思维导图,教师讲座与学生自学等多种教学方式,能够很好地培养学生积极自觉获取知识能力,表达、组织语言能力,与临床实践结合能力,系统条理性学习能力及团队合作能力。同时还能使学生掌握最新科研资讯,启发探索未知领域的渴望。     

食管癌相关基因2原核表达质粒的构建与诱导表达

目的：构建食管癌相关基因2（ECRG2）原核表达质粒，在大肠杆菌（E．coli）中诱导表达重组蛋白。方法：用聚合酶链反应法扩增ECRG2基因开放阅读框（ORF），构建表达载体pGDX-4T-1-ECRG2，测序鉴定后转化E．coli（BL21）进行异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达，目的蛋白进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）、Western免疫印迹鉴定。结果：SDS-PAGE测定GSr／ECRG2蛋白分子质量约34ku，Western blot验证出目的蛋白特异表达。结论：ECRG2ORF插入pGEX-4T-1质粒并在E．coli中成功表达。     

组织蛋白酶B与肿瘤

组织蛋白酶B(CB)能够直接降解或激活纤溶酶原激活剂及基质金属蛋白酶等而间接降解许多细胞外基质成分，从而参与肿瘤的侵袭转移过程。此外它还可以促进肿瘤血管的增生，增强肿瘤细胞的运动能力，而且CB转录、表达水平的高低与肿瘤的预后呈正相关。现综述CB的基因调控、蛋白结构特点、生物学特性及在肿瘤中的作用和意义。     

组织蛋白酶B与肿瘤

组织蛋白酶B(CB)能够直接降解或激活纤溶酶原激活剂及基质金属蛋白酶等而间接降解许多细胞外基质成分,从而参与肿瘤的侵袭转移过程.此外它还可以促进肿瘤血管的增生,增强肿瘤细胞的运动能力,而且CB转录、表达水平的高低与肿瘤的预后呈正相关.现综述CB的基因调控、蛋白结构特点、生物学特性及在肿瘤中的作用和意义.     

前列腺素脱氢酶对大肠癌SW480细胞恶性增殖的抑制作用

目的研究15-羟基前列腺素脱氢酶(15-hydroxyprostaglandin dehydrogenase,PGDH)对SW480大肠癌细胞恶性增殖的抑制作用及机制。方法构建PGDH真核表达质粒(pcDNA3.1-PG-DH),在大肠癌SW480细胞中转染并表达PGDH蛋白,采用MTT法、平板集落和软琼脂克隆形成实验,分析PGDH对SW480恶性增殖的影响。Westernblot检测p53、p21蛋白表达改变情况。结果转染表达PGDH后,细胞增殖受到抑制,实验组平板集落形成率为16%,而对照组为58%,两者间差异显著(P<0.05);肿瘤细胞的停泊-非依赖能力降低,实验组软琼脂克隆体积小且形成个数(7±1.68)明显少于对照组(16.3±3.63),差异显著(P<0.05)。Westernblot分析表明,转染表达PGDH后伴随着p53、p21蛋白表达升高。结论转染表达PGDH蛋白能够部分逆转大肠癌SW480细胞的恶性表型,其过程可能与p53、p21通路密切相关。