5种结核分枝杆菌Rpf样蛋白的活性鉴定及促生长作用

目的探讨结核分枝杆菌5种Rpf样蛋白(RpfA、RpfB、RpfC、RpfD、RpfE)的生物学活性及其促生长作用。方法根据GenBank中结核分枝杆菌H37Rv基因组核酸序列分别设计5种Rpf样蛋白特异性引物序列,采用PCR技术扩增目的片段,克隆、表达及纯化结核分枝杆菌的5种Rpf样蛋白,应用获得的Rpf样蛋白对藤黄微球菌、BCG和结核分枝杆菌标准菌株H37Rv的促生长活性观察。结果成功获得了纯化的五种Rpf重组蛋白,其浓度分别为374.76μg/mL、300μg/mL、116.27μg/mL、306.9μg/mL、349.8μg/mL;促生长效果观察,其中RpfC无明显的促生长活性,RpfE的促生长活性最明显;A、B和D均有一定程度的促进这三种菌生长增殖的作用。结论Rpf样蛋白具有促进结核分枝杆菌增殖的作用,有可能成为一种新型的培养基添加剂,为结核菌的快速培养及相关研究奠定基础。     

医院内感染病原菌的分布及耐药状况分析

目的：了解医院内感染病原菌的分布及耐药状况,为临床合理用药提供依据。方法常规培养分离鉴定,应用VITEKI和phoenix100全自动细菌鉴定分析仪系统鉴定菌株;药敏试验采用K-B纸片扩散法,根据CLSI规定的标准进行。结果2013年共检出6681株病原菌,临床分离的细菌主要以革兰阴性菌为主,大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌为分离菌株的前五位,分离率分别为17.2%、14.19%、13.31%、12.26%、9.52%,产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌分离率分别为56.94%、41.53%;耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)分离率为59.18%。检出耐万古霉素、耐利奈唑胺的金黄色葡萄球菌各1株。结论大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌和金黄色葡萄球仍是临床院内感染的重要病原菌,且对多种抗生素都处于比较高水平的耐药率,有逐年升高的趋势。临床微生物实验室应加强医院内重要感染病原菌的耐药性检测,临床应根据药敏结果和患者自身的感染状况制定出合理的个性化治疗方案,并高度重视多药耐药菌感染者的有效隔离,以防控耐药菌的扩散和流行。     

关节镜下异体韧带移植重建膝前交叉韧带

0　引言　膝前交叉韧带 (anterior cruciate ligament,ACL )断裂是较常见的运动伤 ,目前国内多采用开放手术或关节镜下自体韧带、肌腱移植重建 ACL.自体组织取材不仅增加了创伤 ,影响到取材组织原有的功能 ,而且会带来一系列的并发症 ,为了克服上述缺点 ,参考国外成功经验 ,我们自 2 0 0 0 - 0 2以来 ,采用异体韧带关节镜下移植重建 ACL 4例 ,发现该方法创伤小 ,康复快 ,早期疗效满意1　材料和方法1.1　取材及保存　在无菌操作下自符合移植条件 (肾移植 )的新鲜尸体取跟腱及髌韧带组织 ,跟腱一端带骨瓣 ,髌韧带两端带骨瓣 ,经初步修整 ,…     

人羧肽酶A1活性中心基因的克隆及原核表达

目的：克隆人羧肽酶A1(carboxyrpeptidase A1，CPA1)活性中心基因，构建重组表达载体并对其进行诱导表达。方法：通过RT-PCR方法扩增出正常胰腺组织中CPA1活性中心基因，克隆入载体pGEM-Teasyr，测序分析．将该目的基因亚克隆于表达载体pGEX-4T-1，测序证实序列正确后转化大肠杆菌DH5α，经IPTG诱导表达重组蛋白。结果：获得了人CPA1活性中心基因，构建了重组表达质粒，表达的蛋白以SDS-PAGE分析，在Mr约46000处出现一条新生蛋白带，经凝胶薄层扫描检测，表达量约占菌体总蛋白的22．1％。结论：成功克隆人CPA1活性中心基因并得到了其原核表达产物，为获得分子量小而具有相似活性的蛋白奠定了基础。     

携带hTERT I540-PTD表达框重组复制缺陷型腺病毒的构建与鉴定

目的：构建携带人端粒酶逆转录酶亚基（hTERT）I540-PTD,I540-PTD4融合基因表达框的重组复制缺陷型腺病毒.方法：将pDC315-I540-PTD,pDC315-I540-PTD4与腺病毒基因组质粒pBHGloxdeltaE13Cre共转染HEK293细胞,出现典型的细胞病变反应后收获细胞,反复冻融法制备病毒粗提液,经扩增和纯化获得重组复制缺陷型腺病毒Ad-I540-PTD和Ad-I540-PTD4.使用终点稀释实验和空斑形成实验测定纯化后病毒滴度.采用聚合酶链式反应（PCR）对Ad-I540-PTD,Ad-I540-PTD4进行鉴定.使用病毒感染人骨肉瘤U2OS细胞后,进行免疫组化定性并观察I540-PTD,I540-PTD4的表达情况.结果：共转染10d后,HEK293细胞出现典型的细胞病变反应.经扩增、纯化后,终点稀释法和孔板形成法测定Ad-I540-PTD滴度分别为（8.9×10^12）,（6.3×10^12）pfu/L;Ad-I540-PTD4滴度分别为（5.8×10^12）,（5.4×10^12）pfu/L.以纯化的病毒为模板,使用自行设计的鉴定引物进行PCR均获得167bp目标片段.抗组胺酸标签抗体对病毒感染后的U2OS细胞免疫组化分析发现Ad-I540-PTD,Ad-I540-PTD4转染的U2OS细胞均呈强染,表明Ad-I540-PTD,Ad-I540-PTD4中携带的I540-PTD,I540-PTD4真核表达读框可在人类细胞内高效表达.结论：成功构建可高效表达I540-PTD,hTERTI540-PTD4的重组复制缺陷型重组腺病毒Ad-I540-PTD,Ad-I540-PTD4,为其作为基因疫苗诱发针对hTERT I540表位的抗瘤免疫奠定了基础.     

吖啶橙荧光法检测泌尿生殖道分泌道中的沙眼衣原体

AIM:To explore the value and significance of detecting the chlamydia trachomatis(CT)from urogenital tract samples by the acridine orange fluorescence(AOF).METHODS:110 samples from urogenital tract were detected by AOF.RESULTS:The total positive rate is 49.0%,in which the male are 53.0%(16/30) the female are 45.0%(38/40).CONCLUSION:AOF is combination of fluorescence method and morphologic.It showes the characteristics of easiness and fastness,and can be used in screening the infection of the Chlamydia trachomatis.     

粪便转铁蛋白和粪便隐血联合检测在提高肠道肿瘤检出率上的应用

目的：探讨粪便转铁蛋白试验（TF）和粪便隐血试验（OB）联合检测可提高肠道肿瘤的检出率。方法：收集我院消化病医院肠道肿瘤病人标本进行检测,分别记录粪便转铁蛋白,粪便隐血试验及联合检测的结果,再计算两者的检出率。结果：粪便转铁蛋白试验阳性率为84．4％,粪便隐血试验阳性率为68．9％,两者联合检测时为91．1％。结论：在肠道肿瘤的检测中,粪便转铁蛋白试验敏感性明显高于粪便隐血试验,可作为肠道肿瘤筛查试验。但是粪便转铁蛋白依旧有假阴性存在,需要两者互补检测,可提高检出效率。     

细胞外囊泡在肿瘤诊断中的应用

细胞外囊泡（EV）具有分布广泛,内容丰富,全面参与调控重要的细胞生理活动等特点。作为肿瘤诊断的新技术,EV的天然优势包括保护其内容物,易于从各种体液中获取,有望真正无创以及高度组织源性等。为了适用于临床检测,诸多EV分离技术如微流控、免疫芯片、纳米流式、声学捕获等技术不断被开发。目前已有EV肿瘤诊断产品已走向临床,但是...     

联合检测血清胃泌素释放肽前体和特异性组织多肽抗原在小细胞肺癌诊断中的临床价值

目的：探讨联合检测血清胃泌素释放肽前体（ProGRP）和组织多肽特异性抗原（TPS）在小细胞肺癌（SCLC）诊断中的临床意义。方法：采用ELISA法测定93例SCLC患者、63例肺良性疾病患者和62例正常对照组的ProGRP和TPS水平,并对其结果进行比较。结果：SCLC组患者血清ProGRP,TPS水平[（436．4±765．8）ng／ml、（367．8±518．7）U／L]显著高于肺良陆突扁组[（21．7±9．5）ng／ml、（101．1±45．1）U／L]和正常对照组[（17．3±9．5）．g／ml、（85．6±37．4）U／L]（P〈0．01）,SCLC组患者血清ProGRP、TPS水平Ⅲ、Ⅳ期显著高于Ⅰ、Ⅱ期（P〈0．01）,ProGRP和TPS诊断SCLC的敏感性分别为67．5％和59．4％,特异性分别为97．6％和82．4％。Ⅲ、Ⅳ期（79．6％,83．7％）ProGRP和TPS诊断SCLC的敏感性均明显高于Ⅰ、Ⅱ期（50％,52．9％）。联合检测ProGRP和TPS敏感性和特异性分别为81．9％和80％。治疗前ProGRP和TPS水平[（604．4±637．3）ng／ml、（538．3±650．5）U／L]分别是治疗后[（141．5±179．1）ng／ml、（275．2±269．9）U／L]的4．27倍和1．96倍,治疗前ProGRP、TPS和治疗后比较有显著差异（P〈0．05）,治疗效果明显。结论：ProGRP作为一种新的SCLC肿瘤标志物,对SCLC诊断敏感、特异,ProGRP比TPS具有更高的特异性,同时检测,起到优势互补的作用,有助于提高SCLC早期的阳性检出率,减少漏诊率,对判别病情变化及疗效有重要作用。