人类精液中一氧化氮和转铁蛋白含量的关系

目的:探讨一氧化氮(NO)与人精液转铁蛋白(Tf)含量及精子质量的关系.方法:参照WHO标准,进行精液常规分析.无菌取大鼠睾丸,经胶原酶和透明质酸酶消化,分离出纯度较高的支持细胞,用Hams F-12培养液培养.实验组加入NO供体硝普钠(SNP),同对照组一起培养48 h取上清液,采用镀铜镉还原荧光法检测NO代谢产物硝酸盐(NO-3).用免疫散射比浊法检测Tf含量.结果:130例不育者精液Tf含量、精子密度和活动率随NO含量升高而降低,呈显著的负相关(P<0.01),大鼠睾丸支持细胞悬液Tf含量正常生育组[(22±9)μmol/L]显著高于不育组[(13±8)μmol/L,P< 0.01].结论:精液Tf含量测定有助于评价精子质量,可作为反映支持细胞功能的特异指标,NO对精子运动能力及支持细胞产生和分泌Tf有抑制作用,这对研究不育症的机制有重要价值.     

细胞因子诱导的imDCs鉴定及免疫学功能研究

目的:分析未成熟树突状细胞(immature dendritic cells,imDCs)的免疫学功能,诱导同种异体复合组织移植局部免疫耐受性。方法:采用细胞因子诱导培养黏附法,取大鼠骨髓前体细胞,粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子联合白细胞介素-4细胞因子诱导下培养7 d,收集贴壁细胞光学显微镜观察imDCs的形态学特征,用质量分数2%锥虫蓝染色检测活性细胞率;应用流式细胞仪分析imDCs表面标志分子;MTT比色法测定imDCs与同种异体T淋巴细胞混合培养后T淋巴细胞的增殖能力。结果:制备诱导培养的imDCs具有形态不规则、表面粗糙层叠状皱褶、胞质突起短而多、树枝样分叉明显等典型形态特征;活性细胞率高达93%;表面较特异标志分子OX62为(61.08±4.86)%,OX62阳性细胞表达CD80、CD86、组织相容性复合体-Ⅱ表达率分别为(3.56±0.73)%、(5.38±1.09)%、(6.45±0.74)%,均为较低表达;imDCs对同种异体T淋巴细胞基本无刺激增殖能力。结论:用细胞因子诱导培养黏附法取骨髓前体细胞,可较快分选出活性和纯度较高、数量足够的imDCs,为同种异体复合组织移植诱导免疫耐受防止排斥反应的研究奠定良好的基础。     

人活体小肠部分移植术后的实验室监测

目的：报告国内首例人活体小肠部分移植术后实验室检测结果，讨论实验室检测的作用和临床意义。方法：定时进行肝功能、肾功能、心肌酶谱、脂类、C-反应蛋白(CRP)、血细胞分析及D-木糖等项目的连续检测。结果：术后(18d)实验室异常结果基本恢复正常范围。11月22日(第67天)Tbil从6．2升高到26．4μmol/L．GGT从正常升高到2872nkat/L，ALP从正常升高到2872nkat/L，小肠吸收率试验D-木糖，从25．6％降至16．8％，血清白蛋白从46．4g/L降至31．2g/L，其余肝功能指标在正常范围。血细胞分析：典型嗜酸性粒细胞为0．08，反应性嗜酸性粒细胞为0．26，总计数为0．34，中性粒细胞核右移，细胞胞膜有溶解现象，嗜中性粒细胞中毒颗粒为0．09，血红蛋白下降。按急性免疫排斥反应治疗，11月26日上述实验室异常结果均基本恢复正常范围。结论：实验室结果对各脏器的功能评估、对早期急性免疫排斥反应提供了依据和对感染等并发症也有重要临床意义.     

前体药物甲氨喋呤-α-肽对前列腺癌动物模型治疗的研究

目的：研究前列腺癌的导向酶－前体药物疗法（ＡＤＥＰＴ）,在体内观察前体药物甲氨喋呤－α－肽对前列腺癌的作用。方法：用前体药物甲氨喋呤－α－苯丙氨酸（ＭＴＸ－α－Ｐｈｅ）和甲氨喋呤－α－精氨酸（ＭＴＸ－α－Ａｒｇ）对前列腺癌荷瘤裸鼠模型行肿瘤生长抑制及药物动力学的观察。结果：经抗人精浆蛋白单克隆抗体导向的羧肽酶－Ａ－ＭＴＸ－α－Ｐｈｅ动物模型体内试验,ＡＤＥＰＴ治疗组肿瘤生长明显抑制,裸鼠生存时间延     

超速离心法与QIAGEN膜亲和柱法提取前列腺癌细胞培养上清外泌体的方法学比较

目的 对超速离心法与QIAGEN膜亲和柱法提取前列腺癌细胞上清外泌体优缺点进行比较,为外泌体相关基础实验研究及临床检测提供方法学参考。方法 收集前列腺癌细胞上清分别用两种方法提取外泌体,进行电镜鉴定、BCA定量测定蛋白浓度、Western blot检测标志蛋白以及Zetaview颗粒粒径、浓度及电势分析,比较两种方法提取外泌体的优缺点。结果 电镜下两种方法均可观察到具有膜结构的典型的类似于茶托状结构的外泌体,但膜亲和柱法提取外泌体背景中有类似蛋白聚合物等杂质的存在,超离背景纯净,每个视野下的外泌体数量要明显多于QIAGEN膜亲和柱法; Western blot测定标志蛋白,根据BCA定量同等上样量超速离心法可观察到明显的β-actin,ALIX,CD63以及EGFR条带,而QIAGEN膜亲和柱法仅可观察到β-actin,ALIX以及EGFR条带,但均较超速离心法条带弱; Zetaview粒径分析,超速离心法粒径分布峰值为116 nm,膜亲和柱法提取外泌体分布峰值为122 nm,均符合外泌体的粒径分布范围; 电势分析两者均为负值,符合外泌体的电势分布; 而颗粒数与蛋白浓度比值超速离心法提取外泌体要高于QIAGEN膜亲和柱法(t=13.47,P<0.01)。结论 超速离心法与膜亲和柱法均可以从细胞上清中提取外泌体,超速离心法步骤繁琐,时间较长,但外泌体纯度高,杂质少,BCA蛋白定量与实际所含外泌体蛋白量基本一致; QIAGEN膜亲和柱法方法简单,可快速从细胞上清中提取到外泌体,但纯度不及超速离心法,BCA蛋白定量比实际所含外泌体蛋白量要高,超速离心法适用于外泌体的各方面研究,而QIAGEN膜亲和柱法由于有杂蛋白的污染,因此更适用于外泌体核酸分析相关研究。     

联合抗菌药物对产AmpC酶鲍曼不动杆菌的应用性研究

目的 了解抗菌药物对产AmpC酶鲍曼不动杆菌(ABA)的耐药性以及抗菌药物对ABA的体外联合抗菌活性,为临床治疗产AmpC酶ABA提供合理用药的实验依据.方法 常规培养分离细菌,应用VITEK-Ⅱ全自动细菌分析仪鉴定细菌.常规药敏试验采用K-B纸片法,MIC测定采用琼脂平板倍比稀释法,按CLSI规定标准进行.结果 75株ABA产AmpC酶的阳性率为42.67%,其中产质粒型AmpC酶的占41.33%,产诱导型AmpC酶的占29.33%;产酶菌株中质粒型AmpC酶的占96.88%,产诱导型AmpC酶的占68.75%,同时产诱导型和质粒型AmpC酶的阳性率占59.38%.产酶菌株对亚胺培南(IPM)、美罗培南(MEM)、多粘菌素B(PL)B的抑菌率分别为84.38%、87.5%和90.63%;阿米卡星联合哌拉西林/他唑巴坦(TZP)、头孢哌酮/舒巴坦(SCF)的协同作用分别为40.63%、34.38%.结论 临床对产AmpC酶ABA引起的感染,应慎用碳青霉烯类药物(如IPM或MEM等),建议使用含酶抑制剂复合药物(如TZP或SCF)联合AMK或PLB或米诺环素来治疗,以有效的控制感染和防止耐药株在医院内感染的扩散.     

临床检验进修生培养体会

作为综合性教学医院的临床检验中心,每年都有大量的进修生到我科进修学习。他们大部分来自基层单位,其原有的教育程度不同（专科、本科）,工作时间长短不一,因原单位的级别不同所担负的医疗任务有区别,单位管理模式不一样,因而进修生的工作模式不同。因此,针对不同的进修生,我们在进行目标教学方法的同时,     

腺苷脱氨酶检测在白细胞性胸腔积液中的临床应用

目的研究不同病因产生的白细胞性胸腔积液中腺苷脱氨酶（ADA）活性值的差异,及其与传统的常规生化学指标之闻的相互关系。方法分析100例白细胞性胸腔积液中的ADA活性值,其中包括结核性40例、恶性肿瘤性40例、漏出性20例。结果以40U／L作为诊断结核的阳性界限值。其特异度为98．4％,敏感度为97．0％;ADA活性值与白细胞总数、淋巴细胞百分比、中性粒细胞百分比、常规生化指标含量无关。恶性胸腔积液的ADA活性值与漏出性胸腔积液比较无显著性差异。结论ADA检测对结核性胸腔积液具有相当高的特异度（98．4％）,敏感度（97．0％）。常规生化指标与ADA活性值无明显相关性。     

大鼠皮肤的冷冻干燥保存

背景:细胞干燥保存的研究报道较多,组织器官是否适用于干燥保存,尚缺乏证据.目的:用海藻糖作为干燥保护剂,优化海藻糖载入大鼠皮肤的条件,探索皮肤干燥保存的可行性.设计、时间及地点:观察性实验,于2007-11/2008-11在西北大学生命科学学院组织工程实验室完成.材料:体质量150 g左右成年SD大鼠.海藻糖由Sigma公司提供.方法:通过控制海藻糖浓度(50,300,500,800,1 000 mmol/L)、负载时间(0.5,4,7,9 h)和温度[4℃、4～37℃(相转变)和37℃],优化海藻糖导入大鼠皮肤的条件.将负载海藻糖的皮肤置于含100 g/L二甲基亚砜的DMEM冷冻液中孵育,程序冷冻仪以1℃/min的速率降温至-80℃后移入冷冻干燥机中进行冻干.将冻干皮肤水化复苏后分别用双醋酸羧基荧光素(CFDA)、四甲基偶氮唑盐(MTT)检测皮肤活性,并以新鲜和甲醛固定皮肤的吸光度值作为阳性和阴性对照.以苏木精-伊红染色和观察皮肤组织结构,并进行自体移植.主要观察指标:海藻糖在不同加载浓度、孵育温度和时间载入大鼠皮肤的情况.冻干皮肤水化后的形态学、组织学变化及其自体移植后存活情况.结果:海藻糖浓度小于800 mmol/L,皮肤的海藻糖载入量随海藻糖浓度的升高而明显增(P<0.05),浓度大于800 mmol/L,海藻糖载入量差异不显著.孵育温度为37℃组和相转变组皮肤海藻糖载入量明显高于4℃组(P<0.05),相转变组与37℃组差异无统计学意义.皮肤孵育4,7,9 h的海藻糖载入量明显高于孵育0.5 h的载入量(P<0.05),孵育时间为4,7,9 h之间的海藻糖载入量差异不显著,但孵育7 h后皮肤的海藻糖载入量不再增加.实验以海藻糖浓度为800 mmol/L,孵育温度为37℃,孵育时间为7 h为优化的负载条件处理大鼠皮肤.冻干皮肤玻璃化状态良好,呈半透明状.水化后能够恢复到新鲜皮肤的大小和色泽,组织结构和细胞形态与新鲜皮肤组织无差别.冷冻干燥皮肤的活性明显高于甲醛固定的大鼠皮肤(P<0.05).冻干保存的皮肤水化后移植回自体大鼠,可存活长达13 d.结论:海藻糖可作为干燥保护剂进行大鼠皮肤冷冻干燥保存,海藻糖浓度为800 mmol/L,孵育温度为37℃,孵育时间为7 h是海藻糖载入大鼠皮肤的最佳条件.     

多媒体教学在实验诊断教学中的应用体会

实验诊断学是一门涉及多专业学科的边缘性学科,也是以应用基础医学、医用电子学等理论技术为临床医学服务的桥梁课程。它以生理学、解剖学、生物化学及分子生物学等基础医学为基础,又和临床各个学科紧密联系,内容丰富,涉及面广泛,传统的教学方式已经不能满足学生的需要,许多学生反映学习该课程有困难。作为一种先进的教学手段,多媒体技术将在实验诊断学的教学过程中占据越来越重要的地位。在多媒体教学应用于实验诊断学教学实践中,笔者有以下体会：