基因免疫接种技术与基因免疫苗

基因免疫接种和基因免疫苗是近几年来迅速发展的研究领域，在病毒性疾病和肿瘤防治中有着广阔的应用前景。本文阐述基因免疫接种诱发宿主免疫应答的机理，概述基因免疫接种方法及做为疫苗的可行性。     

医院内污水中噬菌体的分离及其生物学特性观察

目的：通过噬菌体特性观察，为了解噬菌体吸附特异性及溶苗机理的分子生物学机制奠定物质基础．方法：利用标准苗株从污水中分离特异性噬菌斑，纯化增殖后得到其相应噬苗体．经过高滴度噬菌体与其非特异性宿主菌的混合培养，筛选出宿主谱特异性发生突变的具有宽噬性的噬菌体．结果：从污水中分离出12种特异性噬菌体，发现了可裂解同一菌属的不同菌种的宽噬噬菌体，改变了噬菌体专-宿主谱这一特性．结论：针对同一菌属中不同菌种的宽噬噬菌体具有较高的稳定性及裂菌滴度，为探索噬菌体寄生的基因控制及特异吸附的分子生物学机制奠定了基础，将人工改造噬菌体，使之成为新型的杀菌生物制剂成为可能。     

前列腺癌放射免疫治疗的实验研究

为评价放射免疫治疗对前列腺癌治疗效果的作用，用１３１Ｉ标记人精浆蛋白（γＳｍ）单克隆抗体对前列腺癌荷瘤裸鼠模型放射免疫治疗。３５只荷瘤裸鼠分对照组、腹腔给药组、瘤内给药组、分次给药组及非特异抗体组５组。比较各组移植物的体积，生长抑制率及动物生存时间。结果：１３１ＩγＳｍ对人前列腺癌裸鼠移植物有较强的抑制作用，在同样剂量下瘤内给药抑制效果优于其它方法给药，肿瘤生长抑制率为８５．７％。结论：１３１ＩγＳｍ放射免疫治疗可作为前列腺癌治疗的新方法     

高脂血症性胰腺炎临床特点分析及治疗方法探讨

目的 探讨高脂血症性胰腺炎的发病特点及诊治方法.方法 分析该科自2005年7月～2011年7月收治的高脂血症性胰腺炎患者的临床资料.结果 全组30例,年龄(33.7±13.4)岁,体质量指数男性(29.5±3.2),女性(23.4±5.6) ;反复发作10例 ;多伴有糖尿病、脂肪肝等疾病.其中轻型23例,重型7例,血三酰甘油平均值重型组较轻型组为高,经治疗后血TG降至5.65 mmol/L以下的平均时间及平均住院天数重型组较轻型组为长.其中有3例重型胰腺炎患者采取血液灌流治疗,其血TG降至5.65 mmol/L以下的时间及平均住院天数均明显缩短.结论 HAP有发病年龄轻、体型肥胖、可以反复发作的临床特点,且多有基础病.HAP在一般急性胰腺炎治疗基础上有其自身特点.     

荧光定量RT-PCR检测沙门氏菌方法的建立

目的建立沙门氏菌实时荧光定量PCR的快速检测方法 ,探讨该方法的可行性和应用价值。方法根据沙门氏菌fimY基因序列设计引物和探针,采用基因重组技术构建用于沙门氏菌检测的定量标准品,建立实时荧光定量PCR检测沙门氏菌的方法。结果成功构建了沙门氏菌重组质粒标准品和沙门氏菌实时荧光定量PCR方法 ;通过特异性、敏感性、稳定性和重复性验证,结果表明具有较好的特异性、敏感性、稳定性和重复性;对模拟标本与分离培养对比,二者符合率为100%。结论沙门氏菌实时荧光定量PCR检测方法的建立,为食源性沙门氏菌污染的快速检测提供依据,可应用于食品卫生监管、商品检验检疫以及临床诊断等。     

银杏内酯A对缺血/再灌注损伤的大鼠心功能的影响

目的探讨银杏内酯A(Ginkgolide A,GA)对离体大鼠心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤的心功能的影响。方法 Langendorff灌注离体大鼠心脏,用停灌复灌的方式制备心肌缺血/再灌注损伤模型,记录左心室收缩峰压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)、收缩压和舒张压最大变化速率(±LVdp/dtmax)和心率(HR)的变化,并测定复灌后冠状动脉流出液中LDH和SOD的含量及心肌梗死面积。分离单个细胞进行GA预处理,模拟缺血/再灌注培养后检测心肌细胞存活率和单个心肌细胞的收缩幅度。结果 GA预处理以后,LVSP、-dp/dtmax和HR在复灌10 min时较缺血/再灌注组具有明显的改善(P<0.05),并增加心率,减少LDH的生成,增加SOD的活性,降低心肌梗死面积。经GA预处理的心肌细胞存活率明显提高,10μmol.L-1GA能够明显提高缺血后单个心肌细胞的收缩幅度。结论 GA对缺血/再灌注损伤的心肌具有一定的改善作用。     

γ-谷氨酰转肽酶37℃参考方法的建立在临床中的初步应用

目的 建立37 ℃γ-谷氨酰转肽酶(GGT)的参考方法,并对酶校准品定值,探讨血清GGT测定结果 的准确性与可比性.方法 依据国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)推荐的参考测量程序建立GGT酶催化活性参考方法,用参考方法 测定GGT(ERM AD452/IFCC)参考品,验证参考方法 的准确度,并对其精密度进行方法 学评价,同时用参考方法 对制备的酶校准品进行准确定值,按照NCCLS EP9-A方案分别比较40例人血清用酶校准品校正的非配套常规方法 、配套常规方法 、理论K值常规方法 和参考方法 GGT结果,计算常规方法 与参考方法 的相关系数及相对偏倚.结果 用参考方法 测定ERM -AD 452 GGT参考品结果 113.6 U/L,在其给定的(114.1±2.4)U/L范围内.初步建立的37 ℃ GGT参考方法 总CV<1%.用酶校准品校正的非配套常规方法 、配套常规方法 、理论K值常规方法 和参考方法 比较,相关性均良好,r2分别为0.999 8、0.999 6和0.999 5,与配套常规方法 、理论K值常规方法 相比较,酶校准品校正的非配套常规方法 与参考方法 的相对偏倚明显降低,在10%以下.结论 GGT参考方法 基本建立,采用参考方法 为酶校准品定值,可以提高血清GGT测定结果 的准确度和可比性.     

PSMA-IRES-FCY1-TK真核表达载体的构建及在前列腺癌细胞中的表达

目的: 构建前列腺特异性膜抗原(PSMA)启动子调控表达的FCY1/TK双自杀基因表达载体,并观察单、双自杀基因对前列腺癌细胞LNCaP的杀伤作用.方法: 通过PCR方法扩增出基因组DNA中PSMA启动子,利用基因重组的方法,替换真核表达载体pIRES中的CMV启动子.测序正确后,再将自杀基因FCY1和HSV-TK分别克隆于载体pIRES的两个多克隆位点,构建真核表达载体pPSMA-IRES-FCY1-TK.将该载体转染LNCaP细胞,用RT-PCR的方法检测其转录,用MTT法检测前体药物5-氟胞嘧啶、丙氧鸟苷单一或联合使用对转染后的LNCaP细胞的杀伤作用.结果: PCR扩增出长1400 bp的PSMA启动子片段,经克隆至pIRES后酶切鉴定证实,并测序表明序列与GenBank(Accession Number AF007544)报道的一致.pPSMA-IRES-FCY1-TK经脂质体转染LNCaP细胞后,RT-PCR检测到FCY1和TK基因在该细胞中均有转录.MTT法检测表明5-FC与GCV联合使用,其细胞生长抑制率明显高于单独使用5-FC,GCV(P<0.05). 结论: pPSMA-IRES-FCY1-TK的双自杀基因体系对前列腺癌细胞LNCaP细胞的杀伤作用,明显优于单自杀基因体系.     

高温合并化疗对耐药性VX-2细胞多药耐药基因的影响

目的：观察热化疗对多药耐药性VX-2细胞mdr基因的影响．方法：采用单纯化疗(阿霉素32μg／mL,1h),单纯热疗(42．5℃,1h)及热疗联合化疗(阿霉素32μg／mL 42．5℃,1h),分别作用于VX-2及VX-2,mdr1细胞．观察不同处理组细胞的存活率、mdr1 mRNA及．P-gp的表达情况．结果：热化疗组细胞的存活率明显低于单纯加热组及单纯化疗组,同时热化疗组细胞mdr1 mRNA的表达明显减低或消失,P—gp表达明显减低．结论：热化疗可以使多药耐药细胞mdr1 mRNA表达降低或消失,使P—gp表达降低,从而逆转了肿瘤细胞的多药耐药性,提高了化疗的敏感性．